容器密封系統(tǒng)完好性試驗---微生物侵入試驗方案

1、容器/密封系統(tǒng)完好性試驗-微生物侵入試驗方案-大容量注射劑產品驗證編號：N-2222-01起草人：部門審核：QA審核:審核批準人：批準日期：1 概述 微生物侵入試驗是對最終滅菌容器密封件系統(tǒng)完好性的挑戰(zhàn)性試驗。在驗證試驗中，取輸液瓶，灌裝入培養(yǎng)基，在正常生產線上壓塞、壓蓋滅菌。此后，將容器密封面浸入高濃度運動性菌液中，取出、培養(yǎng)并檢查是否有微生物侵入，確認容器密封系統(tǒng)的完好性。此同時，需作陽性對照試驗，確認培養(yǎng)基的促菌生長能力。 2 試驗樣品的制備 2.1 在玻瓶輸液及軟袋輸液生產線上，按100ml、250ml二種產品規(guī)格，各取300瓶（袋）數量的瓶（袋）中，灌裝營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，使用自動壓塞和

2、壓蓋設備將容器密封。 2.2 將灌裝后的容器經121、20分鐘滅菌（過度殺滅法滅菌）。 2.3 從滅菌柜中取出試樣， 冷卻， 將每一試樣倒轉， 使培養(yǎng)基與容器內表面充分接觸，在3035下豎放培養(yǎng)14天。 3 確認培養(yǎng)基促菌生長能力營養(yǎng)性試驗 3.1 所有試樣培養(yǎng) 14 天均不長菌時，隨機取 20 個帶蓋試樣，每個試樣內接種 1ml 的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027，菌液濃度：10100CFU/1ml。 3.2 在3035下培養(yǎng)7天，或培養(yǎng)至所有試樣都呈陽性結果。 3.3 若7天內，所有接種銅綠假單胞菌的試樣中，微生物生長良好，則容器內培養(yǎng)基的促菌

3、生長能力可判為合格。 使用革蘭染色和紫外燈下肉湯呈藍綠色熒光的性質，來鑒定并確認試樣容器內生長的菌為接入的銅綠假單胞菌。 4 挑戰(zhàn)菌懸浮液的制備 4.1 從銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)ATCC 9027 的新鮮斜面上取一整環(huán)培養(yǎng)物，分別接入含lOml 無菌培養(yǎng)基的試管中，在3035下培養(yǎng)1618h。 4.2 將每管的培養(yǎng)物分別轉入含 1000ml 相同培養(yǎng)基的容器內，于 3035下培養(yǎng)2224h。在培養(yǎng)結束時，能明顯見容器內培養(yǎng)基出現渾濁。 4.3 培養(yǎng)結束后的菌懸液即可用來作容器密封系統(tǒng)完好性試驗。 5 微生物侵入試驗操作步驟： 本試驗須在生物安全柜內或其他不影

4、響生產環(huán)境的地方進行。 5.1 將新鮮的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027 的菌懸液倒入合適的盆中，用金屬絲架固定試樣容器，使試倒置在菌懸液中。 5.2 將50個經最長滅菌程序滅菌的試樣倒置，并浸入菌懸液中。試樣容器內的無菌培養(yǎng)基應充分接觸封口內表面，樣品的頸部及封口的外表面應完全浸泡在菌懸液中。 5.3 實驗開始時取一份菌懸液，平板計數每毫升所含的活菌數。按 3.3確認試驗用微生物是銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。 5.4 將試樣容器在菌懸液中持續(xù)浸泡約4h。 5.5 浸泡結束時，再用平板計數菌懸液的濃度。 5.6 從

5、菌懸液中取出試樣，擦干試樣容器外殘余的菌懸液，然后用含 0.5過氧乙酸的 70異丙醇消毒容器外表面。 5.7 取裝滿培養(yǎng)基的樣品兩個，作陽性對照。陽性對照用樣品制備方法同試樣，但不經菌懸液浸泡，其外表用含 0.5過氧乙酸的70異丙醇消毒。此后，接種入 10I00CFU銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027， 按步驟3進行培養(yǎng)基的營養(yǎng)試驗。 5.8 將消毒后的容器，置 3035培養(yǎng) 7 天。5.9 挑戰(zhàn)試驗用菌懸液經滅菌后丟棄。 5.10 將挑戰(zhàn)試驗用的試樣培養(yǎng)7天，觀察檢查試樣容器內培養(yǎng)基中微生物的生長情況。 5.10.1 對每一試樣進行觀察檢查，有生長

6、記作+，無生長計作。 5.10.2 如果試樣容器長菌，按3.3方法確認生長菌是挑戰(zhàn)微生物銅綠假單胞菌。 5.10.3 如果所有容器都不長菌，則從浸過菌懸液的試樣取 10 個，分別按步驟3進行培養(yǎng)基的營養(yǎng)檢查。 6 結果評價 6.1 步驟3、步驟5.8、步驟5.11.3中進行的營養(yǎng)試驗都合格，試樣的挑戰(zhàn)試驗才有效。 6.2 在挑戰(zhàn)試驗開始時，挑戰(zhàn)用菌懸液濃度(活菌數)必須達到1×106CFU/ml。 63 挑戰(zhàn)試驗中試樣如有長菌，需記錄長菌的試樣數。在試樣中如出現長菌試驗，則需按下述要求作進一步調查。 631 仔細去除微生物生長的容器的蓋和塞，檢查容器封口是否有缺損，造成微生物侵入。 632 將觀察到試樣容器封口的缺陷，采用拍照或及其他適當詳細記錄。 64 如果任何挑戰(zhàn)試驗中長菌的容器不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，容器密封系統(tǒng)挑戰(zhàn)試驗作失敗論處。 7 貯存穩(wěn)定性 71 將剩余未經過挑戰(zhàn)試驗的容器放入箱中，保存在室溫，黑暗處。 72 在適當的時間間隔(如12個月、24個月)取出一些容器，重復挑戰(zhàn)試驗。 8 驗證周期根據驗證情況再定，若包裝容器供應商變更后應重新驗證。9 驗證小組分