培養(yǎng)基質(zhì)量保證與質(zhì)量控制ppt課件

1、培育基質(zhì)量保證與質(zhì)量控制培育基制備指南(SN/T1538)簡介李衛(wèi)華山西出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心微生物檢測的定義n在特定的環(huán)境下無菌，采用適當(dāng)?shù)姆椒▽悠分心康奈⑸镞M(jìn)展增殖和培育，并對經(jīng)放大后的目的微生物進(jìn)展感官、生理、生化等方面的特性分析和斷定，以確定樣品中目的微生物的量和/或質(zhì)的特性的過程。微生物檢測涉及的要素n檢測人員n檢測閱歷和判別才干n檢測設(shè)備n保證目的菌種的生長的外部環(huán)境n菌種試劑n保證目的菌種生長的內(nèi)部環(huán)境n檢測方法n選擇適宜目的菌種檢測的方法n測試環(huán)境n保證操作過程不受外界干擾維護(hù)樣品和人員培育基的質(zhì)量保證與質(zhì)量控制n質(zhì)量保證質(zhì)量保證 quality assurance qu

2、ality assurancen 為使人們能確信某個產(chǎn)品為使人們能確信某個產(chǎn)品( (這里只培這里只培育基育基) )能滿足規(guī)定的質(zhì)量要求所必需執(zhí)行能滿足規(guī)定的質(zhì)量要求所必需執(zhí)行的有方案的和系統(tǒng)的活動的有方案的和系統(tǒng)的活動n提出質(zhì)量要求并制定系統(tǒng)的質(zhì)量控制方提出質(zhì)量要求并制定系統(tǒng)的質(zhì)量控制方案案n質(zhì)量控制質(zhì)量控制 quality control quality control n 為到達(dá)質(zhì)量要求所采取的操作技術(shù)和為到達(dá)質(zhì)量要求所采取的操作技術(shù)和活動活動n為到達(dá)質(zhì)量要求所采取的詳細(xì)的技術(shù)操為到達(dá)質(zhì)量要求所采取的詳細(xì)的技術(shù)操作作培育基制備指南：SN/T1538nSN/T1538.1-2019(2019

3、年7月1日實(shí)施)n第1部分:實(shí)驗(yàn)室培育基制備質(zhì)量保證通那么n提出要求并制定系統(tǒng)的控制方案n屬于質(zhì)量保證的范圍nSN/T1538.2-2019(待發(fā)布)n第2部分:培育基性能測試適用指南n為保證提出的質(zhì)量要求所需求采取的技術(shù)操作n屬于質(zhì)量控制的內(nèi)容規(guī)范制定情況簡介nSN/T1538.1修正采用了ISO/TS11133-1：2000E(2000年6月1日發(fā)布)nSN/T1538.1修正采用了ISO/TS11133-2：2019E(2019年12月25日發(fā)布)本規(guī)范的作用nSN/T1538為培育基質(zhì)量保證和質(zhì)量控制規(guī)范體系，有利于對培育基的規(guī)范化管理，提高實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量：n第1部分為質(zhì)量保證和培育基

4、質(zhì)量根本要求n第2部分為質(zhì)量控制技術(shù)n為CNAS合格評定的微生物實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證任務(wù)提供參考根據(jù)重點(diǎn)講解內(nèi)容n相關(guān)術(shù)語n主要質(zhì)量保證要求n質(zhì)量控制方法n質(zhì)控菌株培育基n液體、半固體或固體方式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁衍或堅持其活力的物質(zhì)培育基類型n各別成分培育基各別成分培育基 Culture medium prepared Culture medium prepared from individual components from individual components n實(shí)驗(yàn)室用不同的化學(xué)和實(shí)驗(yàn)室用不同的化學(xué)和/ /或生物試劑按照一定或生物試劑按照一定的配方、比例配置而成的培育基

5、的配方、比例配置而成的培育基n即用型培育基即用型培育基 ready-to-use medium ready-to-use medium n以即用方式置于容器中以即用方式置于容器中( ( 例如：平皿、試管或例如：平皿、試管或其它容器其它容器) ) 供應(yīng)的培育基。供應(yīng)的培育基。n脫水合成培育基脫水合成培育基 culture medium prepared culture medium prepared from commercially dehydrated formulation. from commercially dehydrated formulation. n不立刻便用的干粉方式的不立刻

6、便用的干粉方式的( (如：粉末、小顆粒、如：粉末、小顆粒、凍干等方式凍干等方式) )培育基。培育基。規(guī)范的主要內(nèi)容n購置驗(yàn)收要求(CNAS-CL01 ：4.6.2)n消費(fèi)企業(yè)提供資料n實(shí)驗(yàn)室外觀檢查記錄n儲存、運(yùn)用、棄置要求CL11：5.9)n廢品的質(zhì)量控制(概述第2部分.重點(diǎn)為菌株)n物理目的:培育基外觀n微生物目的:重點(diǎn)提到對測試菌株的要求nSN/T1538.1n常規(guī)質(zhì)量控制要求n物理目的:外觀控制n微生物目的:污染;生長率;選擇性;特異性(CNAS-CL01 : 4.6.2; CNAS/CL11：5.9)n性能測試方法舉例n對質(zhì)量控制要求的補(bǔ)充闡明和詳細(xì)實(shí)例nSN/T1538.2購置驗(yàn)收

7、要求n消費(fèi)企業(yè)提供資料：n產(chǎn)品標(biāo)簽：n產(chǎn)品稱號、編號n批號n運(yùn)用前的pHn必要的平安/危害數(shù)據(jù) n有效期n技術(shù)數(shù)據(jù)清單n質(zhì)控證書n性能評價n所用測試菌株n實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收：n產(chǎn)品標(biāo)簽：n稱號和批號n有效期n接納日期n包裝及其完好性nSN/T1538.1-2019中4.1;對應(yīng)CNAS/CL01 4.6.2內(nèi)容,通常要記錄(采購效力和供應(yīng))儲存要求n例行常規(guī)檢查內(nèi)容:n容器密閉性復(fù)查n初次開封日期n內(nèi)容物的感官檢查 n運(yùn)用前檢查(即用型培育基):n顏色能否發(fā)生變化?n能否蒸發(fā)/脫水?n能否有微生物生長 ?n注:SN/T1538.1:2019中4.2;對應(yīng)CNAS/CL01:4.6.2內(nèi)容,可不做記錄實(shí)

8、驗(yàn)室自制和運(yùn)用要求n培育基用水n稱量和復(fù)水n溶解和分裝npH測定n滅菌n監(jiān)測n瓊脂培育基融化n培育基脫氣n添加成分制備和參與n平板的制備和儲存n培育n注:SN/T1538.1-2019中4.3-4.4內(nèi)容,對應(yīng)CNAS/CL11:5.9部分內(nèi)容,紅色部分通常需做記錄培育基的棄置要求n一切污染和未運(yùn)用的培育基的棄置必需采用平安的方式，并且要符合相關(guān)法律法規(guī)的規(guī)定。n注:SN/T1538.1-2019中4.5內(nèi)容,應(yīng)符合CNAS/CL01:5.3.5(廢棄物處置程序)要求質(zhì)量控制根本要求n對培育基的要求n分裝數(shù)量n外觀、色澤和均一性n瓊脂凝膠的硬度n水份含量npH n緩沖才干n微生物污染(即用培育

9、基)n對根底成分的要求n對不穩(wěn)定的生物成分，運(yùn)用時可根據(jù)情況調(diào)整用量。注:SN/T1538.2中對制造商的要求微生物學(xué)要求n微生物污染n生長特性n生長率n選擇性n生理生化特性n選擇性和特異性n抗菌實(shí)驗(yàn)特性n 紅色部分為對培育基進(jìn)展質(zhì)量控制的主要內(nèi)容生長率(定量測試方法)nPR = NS/NOnNS ：待測培育基平板上得到的菌落總數(shù)。nN0 ：參考培育基平板上獲得的菌落總數(shù)，應(yīng)100cfu n 要求：非選擇性培育基上目的菌的生長率最低應(yīng)為0.7，該類培育基應(yīng)易于目的菌生長；選擇性培育基上目的菌的生長率最低應(yīng)為0.1n 選擇性(定量測試方法)nSF = DO DSnD0：能在參考培育基上生長至少1

10、0個菌落的最高稀釋度nDS：能在測試培育基上顯示生長的最高稀釋度 n非目的菌在選擇性培育基上的SF至少為2 n半定量和定量法中，非目的菌應(yīng)部分或全部被抑制 培育基測試方法n定量測試方法n半定量測試方法n定性測試方法幾種方法的運(yùn)用原那么n通常運(yùn)用半定量或定性測試方法就能滿足實(shí)驗(yàn)室對培育基性能測試的要求n評價新的培育基或新的供應(yīng)商的產(chǎn)品時，應(yīng)采用定量測試方法n采用定量方法時，必需運(yùn)用參考培育基進(jìn)展對照；采用半定量和定性方法時，運(yùn)用參考有助于結(jié)果解釋。n參考培育基必需是從近期批次中選出的知質(zhì)量良好的培育基。引見幾種常用的質(zhì)控方法nMiles-Misra法(定量方法)n改良的平板劃線法(半定量方法)n

11、平板接種察看法(定性方法)n上述均為固體培育基測試方法,液體培育基定量和半定量測試方法也要經(jīng)過固體培育基菌落計數(shù)技術(shù)才干得到結(jié)果。改良Miles-Misra法操作方法n測試菌株過夜培育物10倍稀釋n測試平板和參照平板劃分為4個區(qū)域并標(biāo)志n從最高稀釋度開場 ，分別滴一滴稀釋液于實(shí)驗(yàn)平板和對照平板標(biāo)志好的區(qū)域n將稀釋液涂滿整個1/4區(qū)域，37C培育18 hr。n對易計數(shù)的區(qū)域計數(shù)，按公式計算結(jié)果方法舉例測試培育基在10-5稀釋度上有30個菌落參照培育基在10-5稀釋度上有40個菌落經(jīng)過公式計算： PR = 10-5 30/ 10-5 40=0.75注：在幾種固體計數(shù)方法中，Miles-misra方

12、法和螺旋平板涂布法效果較好。改良的劃線法接種法方式圖計 算n計算生長指數(shù)G ：n每條有菌落生長的劃線記作1分，每個n僅一半的線有菌落生長記作0.5分n沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半，那么記作0n如：菌落在A區(qū)和B區(qū)全部生長，而在C區(qū)有一半線生長那么G 為10 目的菌在培育基上應(yīng)呈現(xiàn)典型的生長，而非目的菌的生長應(yīng)部分或完全被抑制 目的菌的生長目的G大于6時，培育基可接受結(jié)果解釋定性測試方法 n用3mm接種環(huán)取測試菌培育物，在測試培育基外表劃平行直線?？赏瑫r在一個平板上接種多個菌株，但劃線不能交叉n按規(guī)范中規(guī)定的培育時間和溫度對接種后的平板進(jìn)展培育 結(jié)果解釋n培育后按以下方法計分：n0表示無生

13、長n1表示微弱生長n2表示生長良好n目的菌得分應(yīng)為2，并有典型的菌落外觀、大小和形狀n非目的菌的生長應(yīng)部分或全部被抑制 質(zhì)控菌株要求n規(guī)范菌株：來自國際/國家菌種保藏中心(本規(guī)范要求為ATCC菌株)或經(jīng)ISO9002認(rèn)證的經(jīng)銷商提供的菌株(有資質(zhì))n制備貯藏菌株和任務(wù)菌株時一次制備多份，每株菌原那么上不能反復(fù)運(yùn)用n通常任務(wù)菌株不能再傳代，但處置得當(dāng)可再次運(yùn)用規(guī)范貯藏菌株(Reference stock)n規(guī)范菌株在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過一次傳代獲得的一組完全一樣的菌株n傳代菌株該當(dāng)完全具備規(guī)范菌株的一切性狀n傳代時要保證一定的量(減少傳代次數(shù))n每株菌株盡量防止多次運(yùn)用n采用不同的保管方法保管期限不同n如

14、凍干法,液氮法,穿刺法,液體石蠟法,斜面保管法等(見后)菌種保藏方法n液氮保管法n低溫保管法n液體石蠟保管法液氮保管法液氮保管法保管制備細(xì)胞懸液，甘油或二甲亞砜作維護(hù)劑分裝無菌安瓿瓶，每管0.2ml預(yù)凍至-40控制溫度下降速率為1min放入液氮生物儲存罐中氣相保管恢復(fù)直接浸入38水浴中解凍510min轉(zhuǎn)接于適宜培育基內(nèi)培育留意：大多數(shù)屬種適于慢速凍結(jié)和快速解凍適用菌種適用菌種病毒支原體各類細(xì)菌、放線菌、酵母菌、絲狀真菌藍(lán)藻動物細(xì)胞 液體石蠟覆蓋保管法n傳代保管的變相方法n可以適當(dāng)?shù)匮由毂９軙r間n優(yōu)質(zhì)石蠟121高壓滅菌2小時，160枯燥箱中滅菌12小時，放冷備用n液體石蠟的深度以1cm左右 n保

15、管期通常6個月至一年適用菌種n霉菌、酵母菌、放線菌、部分細(xì)菌。如：大腸桿菌、變形桿菌、金黃色葡萄球菌等需氧性細(xì)菌n不能用于低溫冷凍保管的微生物如孢子構(gòu)成才干極差的絲狀菌n不適于用菌種：固氮菌、乳酸桿菌、明串珠菌、分枝桿菌、沙門氏菌，絲狀菌中的毛霉、根霉菌等甘油低溫保藏法n保藏方法：菌種懸浮在保藏方法：菌種懸浮在1010( (體積分?jǐn)?shù)體積分?jǐn)?shù)) )甘油蒸甘油蒸餾水中。置于低溫餾水中。置于低溫(-70)(-70)保藏。保藏。n本卷須知：所要保藏的菌種，最好先培育至對本卷須知：所要保藏的菌種，最好先培育至對數(shù)期；運(yùn)用液體培育基時，可直接加到已滅過數(shù)期；運(yùn)用液體培育基時，可直接加到已滅過菌的甘油中，并使甘油的終濃度在菌的甘