探討腫瘤藥敏試驗對結(jié)直腸癌患者個體化化療的應(yīng)用價值

1、探討腫瘤藥敏試驗對結(jié)直腸癌患者個體化化療的應(yīng)用價值摘要： 目的探討腫瘤藥敏試驗對結(jié)直腸癌患者個體化化療的應(yīng)用價值。 方法 采用組織塊培養(yǎng)一終點染色一計算機圖像分析法（TECIA ,測定47例結(jié)直腸癌患者對阿霉素（ADM、 氟脲嘧咗焙 內(nèi)）、絲裂霉素（MMC）卡鉑（CBP）、 順鉑（DDP）、氨甲喋呤（MTX）6種化療藥物的體外敏感性。結(jié)果 47例結(jié)直腸癌對 腫瘤組織的平均抑制率由高到低依次為 5甲 聯(lián)合用藥的抑制率為訓口 卅卩巧訓5止汕）卩5 Fli。結(jié)論結(jié)直腸癌是對化療藥物敏 感性較好的腫瘤，且存在著明顯的異質(zhì)性。體外腫瘤藥敏試驗在指導結(jié)直腸癌的 臨床用藥及個體化化療方面具有重要的指導意義。

2、關(guān)鍵詞：結(jié)直腸癌；藥敏試驗；TECIA法；化療結(jié)直腸癌是胃腸道中常見的惡性腫瘤之一，近年來，隨著人民生活方式和膳食 結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)直腸癌的發(fā)病率呈上升趨勢。目前外科手術(shù)是治療結(jié)直腸癌的主 要手段，但仍有相當多的患者就診時已屬晚期， 失去手術(shù)的機會；接受根治術(shù)后 的患者也有較高的復(fù)發(fā)率，因此化學藥物治療在結(jié)直腸癌的治療中占有十分重要 的地位，它可以殺死生長中的腫瘤細胞，可以減少或預(yù)防術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移， 提高結(jié)直腸癌的療效。然而臨床使用的化療藥物種類繁多，腫瘤對各種化療藥物 存在著明顯的個體差異，為了提高療效，我們采用TECIA法作了結(jié)直腸癌的體外 藥物敏感性試驗，探討不同的結(jié)直腸癌患者對不同化

3、療藥物的敏感和耐受情況， 為臨床結(jié)直腸癌化療藥物的選擇提供參考依據(jù)。1 材料與方法病例標本 47例結(jié)直腸癌新鮮標本均取自本院手術(shù)標本，其中男32例，女15例。所有標本都經(jīng)病理診斷為結(jié)直腸腺癌。 所有病例均為首次治療， 術(shù)前未化療。標本于無菌條件下快速送到實驗室。藥品與試劑選用目前常用的6種結(jié)直腸癌化療藥物：阿霉素（ADM意大利產(chǎn)）；3氟脲嘧咗燈Ell上海啟東制藥廠）;絲裂霉素（MMC日本產(chǎn)）;卡鉑 （CBP,齊魯制藥）;順鉑（DDP,齊魯制藥）；氨甲喋呤（MTX,上海華聯(lián)制藥）。MTT（美 國Sigma公司），配制濃度為5 mg/mL過濾滅菌，避光冷藏。培養(yǎng)液RPVT 16-10（GIBCO公

4、司產(chǎn)品）含20%、牛血清，-20 C凍存。100級凈化工作臺（吳江市 偉峰凈化設(shè)備廠），二氧化碳培養(yǎng)箱（上海一恒科學儀器有限公司），計算機圖像 分析儀由江蘇先聲藥業(yè)有限公司提供。標本處理無菌切取腫瘤組織1 cm3大小，用lj lci'lk.s反復(fù)沖洗3次，加200 U/mL的青、鏈霉素適量浸泡10 min。剪除脂肪、纖維及壞死組織， 選取邊緣生長好、無壞死的癌組織塊，在層流超凈工作臺上，細切成1 mm：大小的組織塊。將組織塊堆放到有1640培養(yǎng)液的24孔板中，每組設(shè)4孔，37C CO2 孵箱培養(yǎng)24 h,以圖像分析儀測定每孔組織塊面積 A,每孔加入相應(yīng)的化療藥10 卩L,繼續(xù)培養(yǎng)4 d

5、后，加入MTT染料再培養(yǎng)4 h。再次測定組織塊的染色面積（BA, 并按下式算出化療藥物的抑制率（IR）。IR%=1-（BA處理/A處理）/（BA對照/A 對照） X 100%評價指標和標準評價指標為化療藥物的抑制率（IR）: IR>50為高度敏感，302 結(jié)果47例結(jié)直腸癌體外藥敏試驗對不同化療藥物的敏感率、抑制率范圍和 平均抑制率見附表1。表1 結(jié)直腸癌對不同藥物的敏感率、抑制率范圍和平 均抑制率3 討 論化療方案個體化一直是惡性腫瘤治療的一個難題，為此人們建立了多種 腫瘤藥敏測試方法。但由于惡性腫瘤存在著較強的異質(zhì)性， 造成腫瘤對各種化療 藥物有著明顯的個體差異，忽視個體差異僅憑經(jīng)驗

6、用藥，存在著盲目性，使得總 體療效不佳。建立可靠的體外腫瘤藥敏檢測方法，可以幫助臨床醫(yī)師了解不同患 者對不同化療藥物的敏感和耐受情況， 設(shè)計合理治療方案，避免無效藥物所致的 副作用，從而實現(xiàn)個體化化療。目前的抗腫瘤藥物的藥敏試驗方法可分為體內(nèi)和 體外檢測法。體內(nèi)腫瘤藥敏試驗有裸鼠模型法和腫瘤腎包膜下移植法，但因?qū)嶒灄l件復(fù)雜，價格貴，實驗周期長等限制，未能在臨床推廣應(yīng)用；體外腫瘤藥敏試 驗常用的有三磷酸腺苷生物發(fā)光法（AT卩CSN）、四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT法）、四氮唑衍生物比色法（XTT法）、組織塊培養(yǎng)一終點染色一計算機圖像 分析法（TECIA）、膠原凝膠小滴植入法（CD DST）o本文所

7、采用的組織塊培養(yǎng) 終點染色-計算機圖像分析法（TECIA）操作步驟少、簡便易行、需標本量小、 成功率高；本法能夠保持實體瘤的組織結(jié)構(gòu)，有利于細胞存活，同時能夠模擬體 內(nèi)實體瘤細胞的環(huán)境，提高了藥敏的準確性，是一種較實用的微量化體外藥敏試 驗方法，具有很好的臨床應(yīng)用前景，能為臨床制定個體化化療方案提供參考依據(jù)。本文的結(jié)果提示不同個體的結(jié)直腸癌患者對同一化療藥物的敏感性存 在著明顯的個體差異，這可能與惡性腫瘤存在著先天性或獲得性的耐藥性及多重 耐藥性有關(guān)。所以結(jié)直腸癌的化療應(yīng)該通過藥敏實驗確定不同患者對每一個化療 藥物的敏感性，從而為結(jié)直腸癌患者建立“量體裁衣 （tailor、”式的個體化化 療。

8、結(jié)直腸癌是對化療藥物敏感性較好的腫瘤，至今5 I'll仍是結(jié)直腸癌最 常用、療效相對較好的藥物。從本文的藥敏結(jié)果可以看出，最敏感的單藥為5 Fii, 其次為MMC DDP按平均抑制率5血漩曲卩O惘 > 伽。聯(lián)合 用藥MMC+DDP+。結(jié)果表明了結(jié)直腸癌對各種藥物單藥治療療效均不佳，聯(lián)合化療可提高療效，聯(lián)合化療效果優(yōu)于任何一種單一 藥物。因此選擇結(jié)直腸癌化療方案時應(yīng)盡量選擇單藥敏感的兩種或兩種以上的藥 物進行化療，可提高結(jié)直腸癌化療的療效。結(jié)直腸癌的體外藥敏檢測技術(shù)對于評估、組合和篩選化療方案、實施個 體化化療具有重要指導意義。隨著分子生物與技術(shù)的發(fā)展，腫瘤藥敏試驗正步入 分子基因水平，腫瘤藥敏試驗方法也不斷改進與完善，這必將大大提高腫瘤藥敏試驗的實用性和準確性，腫瘤藥敏試驗在指導臨床用藥及個體化療方面發(fā)揮著越 來越重要的作用?！緟⒖嘉墨I】&n bsp；曾益新主編腫瘤學