乙肝表面抗原固相放免定量藥盒的特性

1、第10卷第3期1997年8月同位素JournalofIsotopes.10No.3VolAug.1997乙肝表面抗原固相放免定量藥盒的特性徐哲孔繁信(中國(guó)原子能科學(xué)研究院同位素研究所,北京102413)研究了乙肝表面抗原固相放免定量藥盒的特性,包括HBsA包被條件和標(biāo)記物比活度對(duì)標(biāo)準(zhǔn)線性范圍的影響。:,較好16mIU󰃗mL,靈敏度為018mIU󰃗mL,回收率為85%,批間變異系數(shù)小于20%。關(guān)鍵詞。它的傳染性強(qiáng),轉(zhuǎn)為慢性肝炎后,特別是觀察療效,迫切需要定量的測(cè)量手段。由此。該藥盒包括6個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,做出含6個(gè)點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到HBsAg的含量。

2、為更簡(jiǎn)捷、準(zhǔn)確地測(cè)定人血清中表面抗原的含量,避免標(biāo)記物衰變、批間差異等諸多不利因素對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)曲線的影響,為醫(yī)務(wù)工作者提供便利、有效的測(cè)量手段,本文擬就溫度、包被和標(biāo)記物比活度等不同條件對(duì)HBsAg標(biāo)準(zhǔn)線性范圍的影響進(jìn)行觀察。1實(shí)驗(yàn)材料111主要試劑聚苯乙烯珠:北京門頭溝淤白塑料廠生產(chǎn);125I2NaI:放化純度為9919%,中國(guó)原子能科學(xué)研究院提供;馬Anti2HBs血清:北京生物制品研究所提供;葡聚糖凝膠(SephadexG250):上?；瘜W(xué)試劑廠生產(chǎn);HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品:中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。112主要儀器FT2630G計(jì)數(shù)儀:北京261廠生產(chǎn);SephadexG250分離柱:b

3、3201;10mm×300mm,自制。2實(shí)驗(yàn)方法211標(biāo)準(zhǔn)品的制備將HBsAg強(qiáng)陽性血清按倍數(shù)稀釋,按操作方法說明繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后進(jìn)行刻度,配制具有一定濃度的HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品。收稿日期:1997201227修改稿收到日期:1997205204164同位素第10卷212HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品的穩(wěn)定性將HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品分別在4、37、45的溫度下放置1周,然后測(cè)其計(jì)數(shù)率,繪制HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)數(shù)率與含量的關(guān)系曲線。213包被條件對(duì)線性范圍的影響用物理吸附原理制備包被珠1。分別用由低到高的三種包被濃度包被塑料珠進(jìn)行實(shí)驗(yàn),以觀察包被濃度對(duì)HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品線性范圍的影響。214125I-Anti-

4、HBs標(biāo)記物比活度對(duì)線性范圍的影響此處標(biāo)記物比活度是以每個(gè)反應(yīng)管加入125I2Anti2HBs的總放射性活度來表示。選用依次由低到高的5種標(biāo)記物比活度,觀察標(biāo)準(zhǔn)品的含量與標(biāo)記物比活度之間的線性變化。215藥盒的批內(nèi)、批間變異系數(shù)、回收率及靈敏度用同一生產(chǎn)批號(hào)的藥盒測(cè)量3個(gè)不同濃度的HBsAg樣品,分別測(cè)量3,系數(shù);分別用3個(gè)不同生產(chǎn)批號(hào)的藥盒測(cè)量同一種HBsAg,;3個(gè)不同含量的HBsAg樣品,分別加入微量高濃度的HBg,;用藥盒測(cè)量HBsAg靈敏度標(biāo)準(zhǔn),3結(jié)果與討論311HBsAgHBsAg含量的依據(jù),標(biāo)準(zhǔn)品的穩(wěn)定是保證標(biāo)準(zhǔn)曲sAg含量與計(jì)數(shù)率的線性關(guān)系的重要因素。藥盒要求適宜的存放溫度和適

5、。為了模擬運(yùn)輸?shù)臈l件,將配制好的標(biāo)準(zhǔn)品置于37圖1HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品在不同溫度條件下放置1周后HBsAg含量C與計(jì)數(shù)率N的關(guān)系曲線4起始;41周后;+371周后;451周后第3期徐哲等:乙肝表面抗原固相放免定量藥盒的特性165和45的溫度條件下,觀察1周后計(jì)數(shù)率的變化及線性的穩(wěn)定性。結(jié)果示于圖1。從圖1可以看出,HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)數(shù)率雖然略有下降,但是差異不太大。同時(shí)HBsAg含量與計(jì)數(shù)率的直線關(guān)系保持不變。這說明HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品在高溫下即37或45,1周內(nèi)是比較穩(wěn)定的。312包被條件與線性范圍的關(guān)系用濃度依次倍增的表面抗體包被固相塑料珠,做HBsAg含量與計(jì)數(shù)率比(NS󰃗N0)

6、的關(guān)系曲線,觀察線性范圍,結(jié)果示于圖2。圖2中NS為HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品含量的計(jì)數(shù)率;N0為零標(biāo)準(zhǔn)的計(jì)數(shù)率。其中零標(biāo)準(zhǔn)指不含HBsAg的原血清。從圖2發(fā)現(xiàn),隨著包被濃度的增加,藥盒可測(cè)定的HBsAg含量增大了,但其靈敏度下降。包被濃度1對(duì)應(yīng)的曲線1的線性范圍是0160mIU󰃗mL,靈敏度為018mIU󰃗mL;與包被濃度2和3分別對(duì)應(yīng)的曲線2和曲線3表明,HBsAg含量大于mIU󰃗mL時(shí),計(jì)數(shù)率仍然隨樣品HBsA增大而增加,圖2固相塑料珠的不同包被濃度下NS󰃗N0與度分別是116mIU2IU,HBsAg含量線性范圍的關(guān)系,1包被濃度1;

7、2包被濃度2;3包被濃度3升,。,包被濃度1是較為合適的,藥盒靈敏度符合國(guó)家衛(wèi)生部要求2,線性范圍較好。313標(biāo)記物比活度與線性范圍的關(guān)系選5種依次遞增、比活度分別為A1、A2、A3、A4、A5的標(biāo)記物,觀察其對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品線性范圍的影響。結(jié)果示于圖3。由圖3可知,標(biāo)記物比活度過高或過低時(shí),曲線靈敏度略有下降,但相關(guān)系數(shù)不變(皆為0199),曲線相關(guān)性一致,在比活度為A3時(shí),標(biāo)記物表現(xiàn)較好的活性和較寬的線性范圍。314藥盒的批內(nèi)、批間變異系數(shù)、回收率及靈敏度為了保證定量藥盒測(cè)定樣品的準(zhǔn)確性和精密度,用人血清做樣品進(jìn)行定量測(cè)定與計(jì)算。結(jié)果列于表1、表2和表3。由表13可知,藥盒的批內(nèi)變異系數(shù)小于15%

8、,批間變異系數(shù)小于20%,回收率為85%110%,靈敏度為018mIU󰃗mL。表1藥盒的批內(nèi)變異系數(shù)(藥盒批號(hào):9506)樣品編號(hào)123HBsAg含量󰃗mIUmL-3103±013822130±210551197±31061批內(nèi)變異系數(shù)󰃗%1064166同位素第10卷圖HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品線性范圍的關(guān)系11A2時(shí);3比活度為A3時(shí);4比活度為A4時(shí);5比活度為A5時(shí)表2藥盒的批間變異系數(shù)藥盒批號(hào)950695079508樣品編號(hào)123HBsAg含量󰃗mIUmL-2163±014921193

9、7;214047110±71691批內(nèi)變異系數(shù)󰃗%14714表3藥盒的回收率和靈敏度(藥盒批號(hào):9507)樣品編號(hào)樣品1樣品2樣品3靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品HBsAg含量加入微量高濃度標(biāo)準(zhǔn)后的HBsAg含量󰃗mIUmL111033145910-1HBsAg含量測(cè)定值󰃗mIUmL31225165112018-1󰃗mIUmL111329166414-1回收率󰃗%10310881710910N󰃗N01)不加標(biāo)準(zhǔn)5102)注:1)N󰃗N0是指靈敏度標(biāo)準(zhǔn)與零標(biāo)準(zhǔn)的計(jì)數(shù)率之比;2)國(guó)家衛(wèi)生部要求靈

10、敏度標(biāo)準(zhǔn)2.14結(jié)論乙肝表面抗原固相放免定量藥盒可以利用計(jì)算機(jī)程序直接得出血清中HBsAg的定量值,避免了一些煩瑣的計(jì)算和實(shí)驗(yàn)操作。一系列的實(shí)驗(yàn)研究表明:該藥盒在常溫條件下運(yùn)輸不影響標(biāo)準(zhǔn)線性范圍,而且藥盒的靈敏度符合國(guó)家衛(wèi)生部的要求。同時(shí),藥盒的批內(nèi)和批間的變異較小,說明該藥盒可以比較準(zhǔn)確地測(cè)量血清的HBsAg含量。第3期徐哲等:乙肝表面抗原固相放免定量藥盒的特性167參考文獻(xiàn)1RobertAR,ShmuelHK,SidneyU.Solid2phaseRadioimmunoassayonPolystyreneBeadsandItsApplica22tiontoDopamine2Hydroxyl

11、ase.ClinicalChemistry,1975,21(1):148-150.2衛(wèi)生部藥品生物制品鑒定所1甲、乙型肝炎診斷試劑檢定要求1199011213HollingerFB,AdamE,HeibergD,etal.ResponsetoHepatitisBVaccineinaYoungAdultPopulation.n.,1981.454-456.InternationalSymposium1HollingerFB.s.11:s4RobertCB.SimplifiedApproachtoConfidenceLimitsinRadioimmunoassay.ClinicalChemistr

12、y,1980,26(6):763-765.PROPERTIESOFHEPATITISBSURFACEANTIGENSID-PHASERADIOIMMUNOASSAYXuZhe(DepartmentofIsotope,ChteAto,Beijing102413)STRACTThepBsurfaceantigenHBsAgsolid2phaseradioimmunoassaykit,thestabilityofHBsAgstandardandtheinfluencesofsolid2phasebeadsandspecificactivtyofthetracerontheclassiclinearrange,areinvestigated.Theresultsshowthatthekitisstableathightemperatureinshorttime,andgoodcoatingconditionandspecificactivitycanimprovetheclassiclinearrange.Thelinearrangeofthekitis077.6mIU󰃗mL,thesensitivityis0.8mIU󰃗mL,rateofrecoveryis85%