微生物革蘭氏染色法和芽孢染色法

1、實驗二革蘭氏染色法和芽孢染色法革蘭氏染色法革蘭氏染色法n實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色方法；了解革蘭氏染學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色方法；了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。n實驗原理實驗原理 革蘭氏染色法是細(xì)菌細(xì)胞的復(fù)合染色法，由革蘭氏染色法是細(xì)菌細(xì)胞的復(fù)合染色法，由丹麥病理學(xué)家丹麥病理學(xué)家Hans Christian Gram Hans Christian Gram 于于18841884年創(chuàng)年創(chuàng)立。該法是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒別染色法。立。該法是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒別染色法。第一步：初染第一步：初染: :結(jié)晶紫使菌體著上藍(lán)紫結(jié)晶紫使菌體著上

2、藍(lán)紫色；色；第二步：媒染第二步：媒染: :碘和結(jié)晶紫形成大碘和結(jié)晶紫形成大分子復(fù)合物，能被細(xì)胞壁阻留在細(xì)胞內(nèi)；分子復(fù)合物，能被細(xì)胞壁阻留在細(xì)胞內(nèi)；第三步：酒精脫色第三步：酒精脫色: :細(xì)胞壁成分和構(gòu)造細(xì)胞壁成分和構(gòu)造不同，出現(xiàn)不同的反應(yīng)不同，出現(xiàn)不同的反應(yīng)G G+ +菌：菌：細(xì)胞細(xì)胞不能被酒精脫色，仍呈紫藍(lán)色；不能被酒精脫色，仍呈紫藍(lán)色；G G- -菌：菌：酒精將細(xì)胞脫色，細(xì)胞無色；酒精將細(xì)胞脫色，細(xì)胞無色；第四步第四步: :番紅復(fù)染番紅復(fù)染， G G- -菌呈紅色，菌呈紅色， G G+ +菌呈紫藍(lán)菌呈紫藍(lán)色。色。革蘭氏染色革蘭氏染色原理原理n實驗器材實驗器材1 1）菌種：菌種： 大腸桿菌和枯

3、草芽孢桿菌大腸桿菌和枯草芽孢桿菌 2 2）染色劑：染色劑：結(jié)晶紫，番紅結(jié)晶紫，番紅3 3）器材：器材：顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶、擦鏡紙等雙層瓶、擦鏡紙等革蘭氏染色法革蘭氏染色法n實驗步驟實驗步驟混合涂片法涂片、干燥、固定混合涂片法涂片、干燥、固定 結(jié)晶紫初染結(jié)晶紫初染1min1min，水洗水洗 碘液媒染碘液媒染1min1min，水洗，水洗 用濾紙吸去殘水后，用濾紙吸去殘水后，將玻片傾斜，在白色背景下，用將玻片傾斜，在白色背景下，用95%95%乙醇脫色，直至乙醇脫色，直至流出的乙醇無色時，立即水洗流出的乙醇無色時，立即水洗 番紅復(fù)染番紅復(fù)染2min2

4、min，水，水洗洗 干燥后，鏡檢干燥后，鏡檢注：注：乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，脫色乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，脫色不足，陰性菌被染成陽性菌；脫色過度，陽性菌被不足，陰性菌被染成陽性菌；脫色過度，陽性菌被染成陰性菌染成陰性菌革蘭氏染色法實驗結(jié)果 陽性菌（藍(lán)紫色）陽性菌（藍(lán)紫色） 陰性菌（紅色）陰性菌（紅色）細(xì)菌芽孢染色法n實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?學(xué)習(xí)并掌握芽孢染色方法；初步了解芽孢桿學(xué)習(xí)并掌握芽孢染色方法；初步了解芽孢桿菌的形態(tài)特征。菌的形態(tài)特征。n實驗原理實驗原理 芽孢：芽孢：某些細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下，能在某些細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下，能在菌體內(nèi)部形成一個圓形或卵圓形小體，是細(xì)菌的

5、菌體內(nèi)部形成一個圓形或卵圓形小體，是細(xì)菌的休眠形式。產(chǎn)生芽孢的都是革蘭氏陽性菌。休眠形式。產(chǎn)生芽孢的都是革蘭氏陽性菌。芽孢染色法原理 用弱堿性染料孔雀綠在用弱堿性染料孔雀綠在加熱條件加熱條件下染色，使染下染色，使染料不僅進入菌體，也可進入芽孢內(nèi)。進入菌體料不僅進入菌體，也可進入芽孢內(nèi)。進入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色后難的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色后難以被水洗脫，當(dāng)用對比度大的復(fù)染劑染色后，以被水洗脫，當(dāng)用對比度大的復(fù)染劑染色后，芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體被染成復(fù)染芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體被染成復(fù)染劑的顏色，使芽孢和菌體易于區(qū)分。劑的顏色，使芽孢和菌體易于區(qū)分。n

6、實驗器材實驗器材 1 1）菌種：菌種：枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌 2 2）染色劑：染色劑：5%5%孔雀綠水溶液、孔雀綠水溶液、0.5%0.5%番番紅水溶液紅水溶液 3 3）器材：器材：顯微鏡、滴管、酒精燈、載顯微鏡、滴管、酒精燈、載玻片、接種環(huán)等玻片、接種環(huán)等細(xì)菌芽孢染色法n實驗步驟實驗步驟1 1）改良的）改良的Schaeffer-FultonSchaeffer-Fulton氏染色法氏染色法制備菌懸液制備菌懸液 孔雀綠染液孔雀綠染液(2(2滴滴) )水浴加熱染色水浴加熱染色15-20 15-20 min min 取取1 1小滴，涂片，固定小滴，涂片，固定 水洗水洗 番紅染液復(fù)番紅染液復(fù)染染2-3min2-3min，傾去染液，水洗，傾去染液，水洗 鏡檢鏡檢2 2）Schaeffer-FultonSchaeffer-Fulton氏染色法氏染色法涂片固定涂片固定 孔雀綠染液在微火上加熱染