2020版藥典分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則

1、20202020 版藥典分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則分析方法驗(yàn)證（analyticalmethodvalidation）的目的是證明建立的方法適合于相應(yīng)檢測(cè)要求。在建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、變更藥品生產(chǎn)工藝或制劑組分、修訂原分析方法時(shí)，需對(duì)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證。生物制品質(zhì)量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物學(xué)測(cè)左方法，其中理化分析方法的驗(yàn)證原則與化學(xué)藥品基本相同，所以可參照本指導(dǎo)原則進(jìn)行，但在進(jìn)行具體驗(yàn)證時(shí)還需要結(jié)合生物制品的特點(diǎn)考慮：相對(duì)于理化分析方法而言，生物學(xué)測(cè)左方法存在更多的影響因素，因此本指導(dǎo)原則不涉及生物學(xué)測(cè)壓方法驗(yàn)證的內(nèi)容。驗(yàn)證的分析項(xiàng)目有：鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)測(cè)立（限度或泄量分析）、含量測(cè)左（包括特

2、性參數(shù)和含量/效價(jià)測(cè)立，苴中特性參數(shù)如：藥物溶出度、釋放度等）。驗(yàn)證的指標(biāo)有：準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測(cè)限、龍量限、線性、范圍和耐用性。在分析方法驗(yàn)證中，須用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)。由于分析方法具有各自的特點(diǎn)，弁隨分析對(duì)象而變化，因此需要視具體情況擬訂驗(yàn)證的指標(biāo)。表1中列出的分析項(xiàng)目和相應(yīng)的驗(yàn)證指標(biāo)可供參考。表1檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證指標(biāo)越表 1 1 檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證指標(biāo)項(xiàng)目X.定？特？含成效價(jià)！定隈度+,確度+It復(fù)性+中間+他+6測(cè)限一6+定K限+，戔性+mm+卜寸用性+已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度。如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充。視具體情況予以驗(yàn)證

3、。方法驗(yàn)證內(nèi)容如下。一、專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下,采用的分析方法能正確測(cè)定出被測(cè)物的能力。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)泄方法，均應(yīng)考察其專屬性。如方法專屬性不強(qiáng)，應(yīng)采用一種或多種不同原理的方法予以補(bǔ)充。1.鑒別反應(yīng)應(yīng)能區(qū)分可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似的化合物。不含被測(cè)成分的供試品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，應(yīng)均呈陰性反應(yīng)。2.含量測(cè)泄和雜質(zhì)測(cè)圮采用的色譜法和英他分離方法，應(yīng)附代表性圖譜，以說(shuō)明方法的專屬性，弁應(yīng)標(biāo)明諸成分在圖中的位置，色譜法中的分離度應(yīng)符合要求。任雜質(zhì)對(duì)照品可獲得的情況下，對(duì)于含量測(cè)怎，試樣中可加入雜質(zhì)或輔料，考察測(cè)左結(jié)果是否受干擾，弁

4、可與未加雜質(zhì)或輔料的試樣比較測(cè)壓結(jié)果。對(duì)于雜質(zhì)檢查，也可向試樣中加入一左量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)之間能否得到分離。在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可將含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣進(jìn)行測(cè)定，與列一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證的方法或藥典方法比較結(jié)果。也可用強(qiáng)光照射、高溫、高濕、酸（堿）水解或氧化的方法進(jìn)行強(qiáng)制破壞，以研究可能的降解產(chǎn)物和降解途徑對(duì)含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)龍的影響。含量測(cè)定方法應(yīng)比對(duì)兩種方法的結(jié)果，雜質(zhì)檢查應(yīng)比對(duì)檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)，必要時(shí)可采用光電二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)行峰純度檢查。二、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用所建立方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參比值接近的程度，一般用回收率（）表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的線性范弗I內(nèi)試驗(yàn)。準(zhǔn)確度也

5、可由所測(cè)左的精密度、線性和專屬性推算出來(lái)。在規(guī)左范圍內(nèi)，取同一濃度（相當(dāng)于100%濃度水平）的供試品，用至少6份樣品的測(cè)泄結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或設(shè)汁至少3種不同濃度，每種濃度分別制備至少3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)立，用至少9份樣品的測(cè)左結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，且濃度的設(shè)左應(yīng)考慮樣品的濃度范用。兩種方法的選任應(yīng)考慮分析的目的和樣品的濃度范囤。1.化學(xué)藥含量測(cè)泄方法的準(zhǔn)確度原料藥可用已知純度的對(duì)照品或供試品進(jìn)行測(cè)定，或用所測(cè)立結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測(cè)泄的結(jié)果進(jìn)行比較。制劑可在處方量空白輔料中，加入已知量被測(cè)物對(duì)照品進(jìn)行測(cè)左。如不能得到制劑輔料的全部組分，可向待測(cè)制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)泄，或用所建立方法的測(cè)

6、左結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。2.化學(xué)藥雜質(zhì)立疑測(cè)泄的準(zhǔn)確度可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)對(duì)照品進(jìn)行測(cè)左。如不能得到雜質(zhì)對(duì)照品，可用所建立的方法與另一成熟方法（如藥典標(biāo)準(zhǔn)方法或經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法）的測(cè)立結(jié)果進(jìn)行比較。3.中藥化學(xué)成分測(cè)定方法的準(zhǔn)確度可用已知純度的對(duì)照品進(jìn)行加樣回收率測(cè)泄，即向已知被測(cè)成分含量的供試品中再精密加入一泄量的已知純度的被測(cè)成分對(duì)照品，依法測(cè)立o用實(shí)測(cè)值與供試品中含有量之差，除以加入對(duì)照品量計(jì)算回收率。在加樣回收試驗(yàn)中須注意對(duì)照品的加入量與供試品中被測(cè)成分含有量之和必須在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)：加入的對(duì)照品的量要適當(dāng)，過(guò)小則引起較大的相對(duì)誤差，過(guò)大則干擾成

7、分相對(duì)減少，真實(shí)性差。4.數(shù)據(jù)要求對(duì)于化學(xué)藥應(yīng)報(bào)告已知加入雖的回收率（），或測(cè)泄結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及英相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或置信區(qū)間（卷信度一般為95%）;對(duì)于中藥應(yīng)報(bào)告供試品取樣疑、供試品中含有量、對(duì)照品加入量、測(cè)泄結(jié)果和回收率（）計(jì)算值，以及回收率（）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）或置信區(qū)間。樣品中待測(cè)左成分含量和回收率限度關(guān)系可參考表2。在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，回收率限度可適當(dāng)放寬。表 2 2 樣品中待測(cè)定成分含雖和回收率限度(%)(ppm或ppb)(mg/g或懲/g)(g/g)1001000mg/g1.098?10110100OOOppm100mg/g0.195?1

8、02110OOOppmlOmg/g0.0192?1050.1lOOOppmlmg/g0.00190?1080.01lOOppm100pg/g0.000185?1100.001lOppmioPg/g0.0000180?1150.0001lppmlpg/g0.00000175?120lOppb0.oi/ig/g0.0000000170?125此表源自AOAC(GuidelinesforSinglelaboratoryValidationofChemicalMethodsforDietarySupplementsandBotanicalsl.三、精密度精密度系指在規(guī)泄的測(cè)立條件下，同一份均勻供試品，

9、經(jīng)多次取樣測(cè)泄所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)左所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性；在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的條件改變,如不同時(shí)間、不同分析人員、不同設(shè)備等測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度；不同實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱為重現(xiàn)性。含量測(cè)定和雜質(zhì)的左疑測(cè)立應(yīng)考察方法的精密度。1.重復(fù)性在規(guī)左范囤內(nèi)，取同一濃度（分析方法擬左的樣品測(cè)定濃度,相當(dāng)于200%濃度水平）的供試品，用至少6份的測(cè)泄結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或設(shè)訃至少3種不同濃度，每種濃度分別制備至少3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)泄， 用至少9份樣品的測(cè)左結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。 采用至少9份測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)，

10、濃度的設(shè)左應(yīng)考慮樣品的濃度范用。2.中間精密度考察隨機(jī)變動(dòng)因素，如不同日期、不同分析人員、不同儀器對(duì)精密度的影響，應(yīng)進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。3.重現(xiàn)性國(guó)家藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)，如通過(guò)不同實(shí)驗(yàn)室協(xié)同檢驗(yàn)獲得重現(xiàn)性結(jié)果。協(xié)同檢驗(yàn)的目的、過(guò)程和重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說(shuō)明中o應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)所用樣品質(zhì)量的一致性及貯存運(yùn)輸中的環(huán)境對(duì)該一致性的影響，以免影響重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果。4.數(shù)據(jù)要求均應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或宜信區(qū)間。樣品中待測(cè)左成分含量和精密度RSD可接受范用參考表3（可接受范用可在給出數(shù)值0.52倍區(qū)間，計(jì)算公式，重復(fù)性：RSDr=C-0.15:重現(xiàn)性：RSDR=2C-0

11、.15,其中C為待測(cè)立成分含雖在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，精密度限度可適當(dāng)放寬。待測(cè)定成分含重待測(cè)定成分質(zhì) M M回收率限度分?jǐn)?shù)(%)表 3 3 樣品中待測(cè)定成分的含量與精密度可接受范圍關(guān)系待測(cè)定成分含世待測(cè)定成分質(zhì)M分?jǐn)?shù)重復(fù)性(RSDr%)重現(xiàn)性(RSDR%)(%)(ppm或ppb)(mg/g或pg/g)1001000mg/g1.01210100OOOppmlOOmg/g0.11.53110OOOppm10mg/g0.01240.11OOOppmlmg/g0.001360.01lOOppm100pg/g0.0001480.001lOppmlOpg/g0.0000161

12、10.0001lpprnlpg/g0.000001816lOppb0.01pg/g0.000000011532此表源白AOAC(GuidelinesforSingleLaboratoryValidationofChemicalMethodsforDietarySupplementsandBotanicals)四、檢測(cè)限檢測(cè)限系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。檢測(cè)限僅作為限度試驗(yàn)指標(biāo)和左性鑒別的依據(jù)，沒(méi)有上量意義。常用的方法如下。1.直觀法用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。2.信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把己知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較

13、，計(jì)算出能被可靠地檢測(cè)出的被測(cè)物質(zhì)最低濃度或量。一般以信噪比為3:1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確左檢測(cè)限。3.基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法按照LOD=3.3S/S公式計(jì)算。式中LOD:檢測(cè)限；響應(yīng)值的偏差；S:標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率?？梢酝ㄟ^(guò)下列方法測(cè)得：測(cè)宦空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差；標(biāo)準(zhǔn)曲線的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或是截距的標(biāo)準(zhǔn)獺據(jù)要求上述計(jì)算方法獲得的檢測(cè)限數(shù)據(jù)須用含疑相近的樣品進(jìn)行驗(yàn)證。應(yīng)附測(cè)筮圖譜，說(shuō)明試驗(yàn)過(guò)程和檢測(cè)限結(jié)果。五、立量限定量限系指試樣中被測(cè)物能被左量測(cè)左的最低量，具測(cè)立結(jié)果應(yīng)符合準(zhǔn)確度和精密度要求。對(duì)微量或痕量藥物分析、定量測(cè)泄藥物雜質(zhì)和降解產(chǎn)物時(shí)，應(yīng)確立方法的泄量限。常用的方法如下。1?直觀

14、法用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地左量測(cè)左的最低濃度或量。2.信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法，即將已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，計(jì)算出能被可靠地定量的被測(cè)物質(zhì)的最低濃度或氐一般以信噪比為10：1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確泄泄量限。3.基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法按照LOQ=106/S公式計(jì)算。式中LOQ:左量限：:響應(yīng)值的偏差標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率?？梢酝ㄟ^(guò)下列方法測(cè)得：測(cè)左空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差：采用標(biāo)準(zhǔn)曲線的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或是截距的標(biāo)準(zhǔn)偏差。4.數(shù)據(jù)要求上述計(jì)算方法獲得的泄量限數(shù)據(jù)須用含量相近的樣品進(jìn)行驗(yàn)證。應(yīng)附測(cè)試圖譜，說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和定量限結(jié)果，包括準(zhǔn)確度和精密度

15、驗(yàn)證數(shù)據(jù)。六、線性線性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，線性試驗(yàn)結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈比例關(guān)系的能力。應(yīng)在設(shè)il?的范用內(nèi)測(cè)左線性關(guān)系?？捎猛粚?duì)照品貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱取對(duì)照品，制備一系列對(duì)照品溶液的方法進(jìn)行測(cè)定，至少制備5個(gè)不同濃度水平。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算，或者可采用描述濃度-響應(yīng)關(guān)系的非線性模型。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)、殘差平方和、線性圖（或其它數(shù)學(xué)模型）。七、范圉范圍系指分析方法能達(dá)到精密度、 準(zhǔn)確度和線性要求時(shí)的高低限濃度或量的區(qū)間。 范用應(yīng)根據(jù)分析方法的

16、具體應(yīng)用及苴線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確龍。原料藥和制劑含量測(cè)左，范囤一般為測(cè)泄?jié)舛鹊?0%120%;制劑含量均勻度檢查，范用一般為測(cè)左濃度的70%130%,特殊劑型，如氣霧劑和噴霧劑，范國(guó)可適當(dāng)放寬：溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定，范弗一般為限度的士30%,如規(guī)泄了限度范用,則應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%:雜質(zhì)測(cè)定，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)際測(cè)左數(shù)據(jù)，擬訂為規(guī)左限度的士20%。如果一個(gè)試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)怎和純度檢查，且僅使用200%的對(duì)照品，線性范圍應(yīng)覆蓋雜質(zhì)的報(bào)告水平至規(guī)左含量的120%.在中藥分析中，范圜應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果及要求確左。對(duì)于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分，其驗(yàn)證范用應(yīng)大于被限立含量的區(qū)間。溶出度或釋放度中的溶出呈：測(cè)泄，范國(guó)一般為限度的士30%。八、耐用性耐用性系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)泄結(jié)果不受影響的承受程度，為所建立的方法用于常