HPLC法測定清經(jīng)膠囊中小檗堿的含量

1、HPLC法測定清經(jīng)膠囊中小檗堿的含量提要用HPLC方法對中藥復(fù)方制劑清經(jīng)膠囊中小檗堿進(jìn)行含量測定，并進(jìn)行了方法的廣泛適應(yīng)性試驗，結(jié)果表明小檗堿在0.1150.575 g范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，方法回收率為98%。精密度與準(zhǔn)確度均較滿意。該法可有效地控制其內(nèi)在質(zhì)量。關(guān)鍵詞HPLC清經(jīng)膠囊小檗堿 DETERMINATION OF BERBERINE IN QINGJINGCAPSULES BY HPLCYu PingHu PingHe Qiang(Sichuan Enwei Traditional Chinese Medicine InstituteChengdu 610041)AB

2、STRACTThis paper described the content determination on berberine within Qingjing capsules of traditional medicine compounds by HPLC method, which also carried out a adaptability test in a wide-ranging.The results showed that within 0.1150.575 g, berberine kept a fine line relationship between conce

3、ntration and peak area. The average recovery rate in sample was about 98%. The precision and accuration were both satisfactory, and the method can control quality effectively.Key WordsHPLCQingjing capsulesBerberine清經(jīng)膠囊是由牡丹皮、黃柏等數(shù)味中藥材研制而成的中藥復(fù)方制劑。具有清熱涼血、滋腎養(yǎng)陰、調(diào)經(jīng)止痛等功效。為制定本品質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，對其中小檗堿的含量測定方法進(jìn)行了研究。該法回收率

4、高、分離度好、方法簡便、適應(yīng)性好，適于清經(jīng)膠囊生產(chǎn)的質(zhì)量控制。1實(shí)驗部分1.1儀器與試劑惠普HP1100高效液相色譜儀，G1315A二極管陣列檢測器(DAD)，G1316柱溫箱(Quatpump),G1322A在線真空脫氣機(jī)(Degasser),G2170AA HP化學(xué)工作站(HP Chemstation);Waters高效液相色譜儀，486檢測器，515 HPLC pump，temperature control module, PC800譜及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；波達(dá)1004超聲清洗器；TGL-16G臺式高速離心機(jī)。鹽酸小檗堿(berberine)對照品(中國藥品生物制品檢定所)；供試品(自制)；

5、乙腈為色譜純；其它試劑均為分析純；流動相用水為高純水(西南物理研究所)。1.2方法結(jié)果1.2.1色譜條件ODS色譜柱，流動相用乙腈-水-磷酸二氫鉀-十二烷基硫酸鈉(500 ml500 ml3.4 g1.7 g)，檢測波長346 nm。1.2.2方法可行性考察精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，用甲醇溶解配制成0.02 mg/ml的對照品溶液，取空白樣品(缺黃柏)和供試品分別制備成空白對照溶液和供試品溶液，在上述色譜條件下測得三種溶液的HPLC譜(1)。由譜可見，小檗堿最大吸收為346 nm，且小檗堿與巴馬汀色譜峰能達(dá)到基線分離，空白樣品在此波長無吸收。故選擇346 nm作為清經(jīng)膠囊中小檗堿含量的檢測

6、波長。Fig 1High performance liquid chromatogram of berberineA PalmatineB BlankC BerberineD Samplea peak of berberineb peak of palmatine1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別吸取對照溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5 l注入色譜儀。以峰面積積分值對進(jìn)樣濃度進(jìn)行回歸，得回歸方程C=0.0001944A+0.003827，r=0.9998(式中C為鹽酸小檗堿的量g，A為峰面積積分值)。可見，進(jìn)樣量在0.1150.575 g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線基本過原點(diǎn)。故在實(shí)際

7、含量測定中，可采取隨行標(biāo)準(zhǔn)法(中國藥典1995年版一部附錄VID)計算供試品小檗堿的含量。1.2.4供試品提取條件的考察取裝量差異測定項下顆粒，研細(xì)，取細(xì)粉約0.1 g，精密稱定，置25 ml量瓶中，加入提取液20 ml，超聲提取30 min；取出放冷后用提取液稀釋至刻度，搖勻，靜置，取上清液適量高速離心(12 000 r/min)5 min；取其上清液10 l，注入色譜儀，按標(biāo)準(zhǔn)比較法計算其含量(表1)。Table 1Results for determination by different extracting solvents(n=3)SolventBerberine content(

8、mg/g)MeOH4.214.294.17MeOH-HCl(1001)7.287.417.39Mobile phase6.406.406.52根據(jù)上述試驗結(jié)果，選用酸性甲醇甲醇-鹽酸(1001)作為溶劑制備供試品液，超聲提取不同時間后依上法測定，結(jié)果見表2。 Table 2Results for determination by different extracting time (n=3)Time (min)Berberine content(mg/g)57.357.107.17157.157.287.16307.257.177.20457.107.177.17試驗表明：超聲提取545 mi

9、n含量測定結(jié)果無明顯差異。為確保小檗堿提取完全并縮短分析時間，供試品中其含量測定的提取條件以酸性甲醇作溶劑，超聲提取15 min為佳。1.2.5進(jìn)樣精密度及方法精密度試驗以同一對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10 l，測得小檗堿對照品峰面積，其RSD為0.79%。按“1.2.4”方法測定同一批供試品的含量，RSD為0.97%，試驗結(jié)果表明精密度良好。1.2.6空白和供試品回收試驗分別稱取5份空白樣品約0.1 g，各加入鹽酸小檗堿對照品適量，按“1.2.4”方法測定，結(jié)果見表3。 Table 3Recovery of blankNo.Weight(g)AmountRecovery(%)Averag

10、erecovery(%)RSD(%)content(mg)added(mg)measured(mg)10.085100.73500.733910020.097100.73500.71979830.110000.73500.719598990.9140.092800.73500.72999950.127400.73500.721598取供試品約0.1 g，加入鹽酸小檗堿對照品適量，按“1.2.4”方法測定，結(jié)果見表4。 Table 4Recovery of samplesNo.Weight(g)AmountRecovery(%)RSD(%)content(mg)added(mg)measured

11、(mg)10.09310.69080.80001.493410020.10150.75310.80001.538098982.030.09750.72340.80001.48779640.09000.66780.32000.98059850.09230.68490.32000.995397981.060.11020.81770.32001.1358991.2.7供試品的測定取3批供試品，依“1.2.4”方法測定，結(jié)果見表5。 Table 5The content of different samplesBatchNo.Amounts(mg/g)Average(mg/g)RSD(%)980101

12、3.223.173.243.211.129801023.403.433.483.441.819801033.403.443.423.421.181.3方法適應(yīng)性試驗1.3.1色譜儀考察兩臺不同高效液相色譜儀(HP1100型和Waster515型，其它色譜條件不變)按擬定方法測定同一供試品溶液中小檗堿的含量(n=6)，試驗結(jié)果表明儀器與儀器之間無顯著性差異。1.3.2色譜柱考察其它色譜條件不變，對不同的ODS色譜柱按“1.2.4”方法進(jìn)行色譜分析，均得到供試品主要成分基線分離的對稱色譜峰形，保留時間918 min(依色譜柱不同而異)，空白對照品(缺黃柏)無干擾，小檗堿色譜峰與巴馬汀能夠達(dá)到基線分離。試驗結(jié)果表明，該方法廣泛適應(yīng)性良好。2討論2.1曾以乙腈-0.1 mol/L醋酸銨(3565，磷酸調(diào)pH6.0)；醋酸乙酯-乙醇-甲醇(75205)作流動相，結(jié)果均不理想。鹽酸小檗堿色譜峰與雜質(zhì)峰不能達(dá)到很好的基線分離。