格列吡嗪緩釋膠囊人體相對(duì)生物利用度研究

1、    格列吡嗪緩釋膠囊人體相對(duì)生物利用度研究        摘要：目的研究格列吡嗪緩釋膠囊在正常人體內(nèi)相對(duì)生物利用度。方法采用反相高效液相色譜法測(cè)定16名健康男性志愿者單劑量po 10 mg和多劑量po格列吡嗪緩釋膠囊及控釋片后的血漿藥物濃度，計(jì)算兩制劑的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)及相對(duì)生物利用度，以cmax，AUC048等指標(biāo)，利用方差分析、雙單側(cè)t檢驗(yàn)及(1-2)置信區(qū)間分析判定兩制劑生物等效性。結(jié)果兩制劑藥-時(shí)曲線有雙峰，連續(xù)服藥4 d達(dá)穩(wěn)態(tài)，單劑量與多劑量給藥主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

2、經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析無(wú)顯著差異(P0.05)。結(jié)論格列吡嗪緩釋膠囊與控釋片生物等效。關(guān)鍵詞：格列吡嗪；緩釋?zhuān)桓咝б合嗌V；生物利用度中分類(lèi)號(hào)：977.1+5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1001-2494(2000)09-0610-04Study on the relative bioavailability of glipizide sustained-release capsule in humanQU Fu-jun,SUN Hua,ZHANG Li-xin,GUO Xiao-jun(Clinical Pharmacy and Drug Institute at the Second Hospital o

3、f Harbin Medical University,Harbin 150086)ABSTRACT：OBJECTIVETo study the relative bioavailability of glipizide sustained-release capsule in healthy volunteers.METHODSThe plasma concentrations of gliplzide sustained-release capsule and controlled-realease tablet were determined with HPLC in 16 health

4、y male volunteers after 10 mg orally single dosage and multiple dosage.The pharmacokinetic parameters and relative bioavailability of two drugs were calculated.The cmaxand AUC036 were used to evaluate the bioequivalence of the two drugs with analysis of variance and double single t-test.RESULTSThe c

5、oncentration-time curves of these two drugs had two peaks.The stable phase could be attained after the drugs were taken in consecutive 4 days.The main pharmacokinetic parameters between single dosage and multiple dosage had no singificant difference by statistic analysis.CONCLUSIONThe glipizide sust

6、ained-release capsule was bioequivalent to the glipizide controlled-release tablet.KEYWORDS：glipizide;sustained-release;HPLC;bioavailablity格列吡嗪(glipizide,吡磺環(huán)己脲)為第二代口服降糖藥，是治療非胰島素依賴(lài)型(2型)糖尿病較有效且安全的藥物1，由于格列吡嗪普通片劑需每天服藥34次，給長(zhǎng)期服藥帶來(lái)不便和高濃度時(shí)可能導(dǎo)致血糖過(guò)低等不良反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)選擇16名志愿受試者，對(duì)格列吡嗪緩釋膠囊及控釋片的藥代動(dòng)力學(xué)及相對(duì)生物利用度進(jìn)行研究，并考查了單劑量給藥

7、和多劑量給藥后的血藥濃度變化，評(píng)價(jià)了兩制劑的生物等效性，為臨床用藥提供參考。1材料和方法1.1藥品與試劑格列吡嗪緩釋膠囊(下稱(chēng)A藥，哈爾濱市神龍中藥藥物研究所，10 mg，批號(hào)980925)。格列吡嗪控釋片(下稱(chēng)B藥，輝瑞制藥有限公司，5 mg，批號(hào)85807008)。格列吡嗪標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品(含量99.9%，黑龍江省藥品檢驗(yàn)所)。水為超純水，實(shí)驗(yàn)所用試劑均為國(guó)產(chǎn)色譜純和分析純。1.2儀器與材料Waters 2010高效液相色譜儀，717自動(dòng)進(jìn)樣器，600泵，996PDA檢測(cè)器，Millenium色譜管理系統(tǒng)，在線脫氣機(jī)，柱溫箱。全自動(dòng)生化測(cè)定儀。XW-80旋渦混合儀。普通離心機(jī)。1.3試驗(yàn)對(duì)象與試

8、驗(yàn)設(shè)計(jì)1.3.1試驗(yàn)對(duì)象16例健康男性，年齡2225歲，體重6175 kg，身高170179 cm。對(duì)志愿受試者進(jìn)行肝腎功能及心電檢查，均正常，無(wú)藥物過(guò)敏史，簽定知情同意書(shū)后入選。試驗(yàn)前兩周未服用過(guò)任何藥物，受試期間禁煙、酒、茶，進(jìn)食統(tǒng)一餐。1.3.2單劑量試驗(yàn)設(shè)計(jì)采用隨機(jī)自身交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將16名志愿受試者隨機(jī)分為兩組，禁食12 h后，分別po A藥與B藥10 mg，于服藥前與服藥后1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12.0，16.0，24.0，36.0，48.0 h采靜脈血3 ml，肝素抗凝，離心取血漿。間隔1周后交叉服藥，同樣時(shí)間點(diǎn)靜脈采血。服藥后4 h進(jìn)餐。1

9、.3.3多劑量試驗(yàn)設(shè)計(jì)采用隨機(jī)自身交叉設(shè)計(jì)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將16名志愿受試者隨機(jī)分為2組，均于早8：00時(shí)po A藥與B藥每天10 mg，連續(xù)服藥7 d，并于第4，5，6，7次服藥前和第7次服藥后1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12.0，16.0，24.0，36.0，48.0 h采靜脈血3 ml，肝素抗凝，離心取血漿。間隔兩周后交叉服藥，同樣時(shí)間點(diǎn)采靜脈血。1.4血漿中格列吡嗪測(cè)定方法1.4.1色譜條件色譜柱：Nova-Pak C18柱(300 mm×4.0 mm,4 m)，C18預(yù)柱；流動(dòng)相：甲醇-0.02 mol.L-1醋酸鹽緩沖液(pH3.5，6040)；流速：0

10、.9 ml.min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm;柱溫：25；滿(mǎn)量程吸光度：0.02 AUFS。在上述條件下格列吡嗪的保留時(shí)間為10.268 min。1.4.2測(cè)定方法精密量取血漿樣品1.0 ml，置于具塞離心試管中，加入系列的格列吡嗪標(biāo)準(zhǔn)液，使血漿中藥物濃度分別為50，200，500，1000，2000 ng.ml-1，然后加入200 l 0.5 mol.L-1鹽酸溶液，混勻后加入5 ml乙醚(重蒸)，旋渦振蕩90 s，離心吸取乙醚，40水浴下蒸干，殘?jiān)尤?00 l流動(dòng)相溶解，吸取20 l在上述色譜條件下進(jìn)樣分離，以格列吡嗪的峰面積(a)對(duì)濃度(c)回歸，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為c11.16+4.19

11、×10-3a，r=0.9957，P0.01，本法最低檢測(cè)濃度為50 ng.ml-1，在502000 ng.ml-1內(nèi)線性良好，格列吡嗪色譜峰處無(wú)血漿成分干擾峰。取濃度為50，500，2000 ng.ml-1血漿樣品，按前方法進(jìn)行血漿處理和色譜分析，再以相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，單點(diǎn)法求算高、中、低3個(gè)濃度的血漿藥物濃度，計(jì)算溶劑回收率，結(jié)果50，500，2000 ng.ml-1血漿樣品的溶劑回收率分別為(86.0±5.2)%，(86.5±6.0)%，(90.4±5.7)%(n=5)。另將以上高、中、低3個(gè)濃度的血漿樣品，通過(guò)血漿樣品處理和色譜分析，得藥物的

12、峰面積，將峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程得血漿中藥物濃度，計(jì)算方法回收率。結(jié)果50，500，2000 ng.ml-1的血漿樣品的方法回收率分別為(98.6±6.2)%，(97.8±5.9)%，(97.3±6.1)%(n5)。以上3個(gè)濃度分別做日內(nèi)RSD和日間RSD，結(jié)果50，500，2000 ng.ml-1的血漿樣品的日內(nèi)RSD分別為7.2%，8.1%，8.6%(n=5)，日間RSD分別為7.5%，8.0%，8.8%(n=5)。1.5數(shù)據(jù)處理1.5.1單劑量數(shù)據(jù)處理cmax,tmax為實(shí)測(cè)值。AUC048,AUMC048統(tǒng)計(jì)矩法2求算。MRTAUMC048/AUC048。

13、FAUC048(A)/AUC048(B)×100%。1.5.2多劑量數(shù)據(jù)處理cmax，cmin，tmax為第7次給藥后的實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)讀出，其中cmin是指第7次給藥后24 h的血藥濃度。AUC048，AUMC048統(tǒng)計(jì)矩法計(jì)算，其中c0是指第7次給藥前采靜脈血測(cè)得的血藥濃度，即谷濃度。MRT=AUMC048/AUC048。F=AUC048(A)/AUC048(B)×100%。FI=(cmax-cmin)/cmax×100%。1.5.3統(tǒng)計(jì)分析方差分析，雙單側(cè)t檢驗(yàn)，(1-2)置信區(qū)間分析。2結(jié)果2.1單劑量相對(duì)生物利用度測(cè)定結(jié)果16名志愿受試者單劑量po 10 mg

14、A藥與B藥的不同時(shí)間血藥濃度藥時(shí)曲線見(jiàn)1，從1可知，A藥、B藥體內(nèi)過(guò)程均出現(xiàn)雙吸收峰，A藥tmax為3.0 h，cmax為194219 ng.ml-1，B藥tmax為12.0 h，cmax為231242 ng.ml-1。第1個(gè)峰與第2個(gè)峰濃度波動(dòng)很小，達(dá)到緩釋效果。藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)結(jié)果見(jiàn)表1。方差分析結(jié)果表明，兩制劑因素間cmax,tmax，AUC048,MRT無(wú)顯著差異(P0.05)。雙單側(cè)t檢驗(yàn)及(12)置信區(qū)間結(jié)果見(jiàn)表2，從表2可知以上4個(gè)參數(shù)的t11.74，t21.74，且A藥均在B藥的(12)置信區(qū)間內(nèi)。A藥的相對(duì)生物利用度為(99.5±5.5)%，均在80%120%范圍內(nèi)，

15、綜合判定單劑量給藥兩制劑生物等效。116名受試者po單劑量10 mg格列吡嗪后平均血藥濃度-時(shí)間曲線曲線-緩釋膠囊；-控釋片表116名受試者單劑量po A藥與B藥的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù).±s,n=16藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)A藥B藥cmax/ng.ml-1287±44274±52tmax/h10.8±2.810.3±2.9AUC048/ng.h.ml-16444±3346488±431AUMC048/ng.h2.ml-1121341±9514125788±10374MRT/h18.8±1.019.0±

16、1.0F/%99.5±5.5表2單劑量po 10 mg A藥與B藥藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)雙單側(cè)t檢驗(yàn)及(12)置信區(qū)間參數(shù)XTXRt1t290%置信區(qū)間cmax2872744.72.9247301tmax10.810.35.12.09.011.0AUC0486444648811.110.454377021MRT18.819.02.71.916.920.52.2多劑量穩(wěn)態(tài)時(shí)相對(duì)生物利用度測(cè)定結(jié)果16名志愿受試者連續(xù)服藥4 d達(dá)穩(wěn)態(tài)濃度，平均谷濃度A藥為(139±9) ng.ml-1，B藥為(140±10) ng.ml-1。由第7天給藥計(jì)時(shí)，16名受試者A藥與B藥的血藥濃度平

17、均藥時(shí)曲線見(jiàn)2，從2可知，連續(xù)給藥，于第7次給藥后體內(nèi)藥物濃度仍具有雙吸收峰，A藥tmax1為3.0 h，cmax1為229243 ng.ml-1，B藥tmax2為12.0 h，cmax2為283297 ng.ml-1。第1個(gè)吸收峰與第2個(gè)吸收峰波動(dòng)小，達(dá)到緩釋效果。藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)結(jié)果見(jiàn)表3。將藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)cmax,cmin,tmax,AUC048,MRT,FI進(jìn)行方差分析，結(jié)果兩制劑因素間無(wú)顯著差異(P0.05)。進(jìn)一步用雙單側(cè)t檢驗(yàn)及(12)置信區(qū)間分析，結(jié)果表明，所分析參數(shù)t11.74，t21.74，A藥的參數(shù)值均在B藥12置信區(qū)間內(nèi)，見(jiàn)表4。多劑量穩(wěn)態(tài)時(shí)A藥相對(duì)生物利用度為(98.9

18、±7.9)%，均在80%120%范圍內(nèi)。進(jìn)一步判定兩制劑生物等效。216名受試者po多劑量格列吡嗪后血藥濃度-時(shí)間曲線-緩釋膠囊；-控釋片表316名受試者多劑量po A藥與B藥的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù).±s,n=16藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)A藥B藥tmax/t10±2.110±2.0cmax/ng.ml-1311±55328±58cmin/ng.ml-1137±10139±11AUC048/ng.h.ml-17429±4907561±855AUMC048/ng.h2.ml-1136216±8326139

19、354±13658MRT/h18.4±0.918.5±0.6FI/%54.4±9.956.1±7.8F/%98.9±7.9表4多劑量po A藥與B藥后藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)雙單側(cè)t檢驗(yàn)及(12)置信區(qū)間參數(shù)XTXRt1t290%置信區(qū)間tmax10106.156.158.611.4cmax3113282.844.83292363cmin1371398.8910.28116162AUC048742975615.607.3568349896MRT18.418.514.314.715.820.6FI/%54.456.13.54.750.080.23討論3.1據(jù)報(bào)道3，血漿中格列吡嗪采用苯提取，由于苯毒性較大，沸點(diǎn)高，在實(shí)驗(yàn)時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)人員傷害較大又不易揮干。所以我們用重蒸乙醚提取，避免了以上的缺點(diǎn)，同時(shí)達(dá)到了分析要求，得到了很好的分離效果，專(zhuān)屬性強(qiáng)，靈敏度高，重現(xiàn)性好，溶劑回收率達(dá)到86.0%，方法回收率達(dá)到97.3%。在色譜分離時(shí)流動(dòng)相的pH值對(duì)格列吡嗪的保留時(shí)間影響較大，pH在3.403.50范圍內(nèi)較好。3.2有資料報(bào)道45普通片劑正常人po 5 mg，cmax為200 ng.ml-1，po 10 mg，cmax為632 ng.ml-1。我們研究的A藥與B藥的cmax既高于普通片po 5 mg，又低于普通片po 10 mg