益胃消增膠囊對慢性萎縮性胃炎模型大鼠胃粘膜病理組織學的影響(一)

1、益胃消增膠囊對慢性萎縮性胃炎模型大鼠胃粘膜病理組織學的影響(一)    作者：龔占悅 范 明 龔其淼 郅扶 王玲玲 【關鍵詞】 益胃【摘要】 目的 觀察益胃消增膠囊對慢性萎縮性胃炎（CAG）模型大鼠胃粘膜病理組織學的影響。方法 將78只Wistar雄性大鼠隨機分為6組:正常對照組、模型組、自然恢復組、維酶素對照組、益胃消增膠囊低劑量組及益胃消增膠囊高劑量組。應用2%水楊酸溶液及150g/L、55熱鹽水灌胃、20mmol/L脫氧膽酸鈉溶液自由飲用方法對正常對照組以外的其他各組大鼠進行造模60天，造模成功后，將模型組大鼠處死，留取胃粘膜標本待測，另五組大鼠施

2、加相關因素30天后處死，同樣留取胃粘膜標本，分別用光鏡和電鏡觀察胃粘膜組織學方面的改變。結果 益胃消增膠囊治療組大鼠胃粘膜炎癥、萎縮、腸化等各項病理指標與模型組比較P均0.01，不典型增生的改變與模型組比較P均0.05，病理組織學改善明顯。結論 益胃消增膠囊能夠消除胃粘膜炎癥，并能改善、甚至部分逆轉(zhuǎn)CAG已經(jīng)形成的萎縮、腸化及不典型增生等，這提示本方能有效治療CAG，并能防止其癌變。關鍵詞 慢性萎縮性胃炎 病理組織學 益胃消增膠囊【Abstract】 Objective To observe the effect of YiWeiXiaoZeng Capsule（YWC）on gastric

3、mucosa pathological histology in rats model of chronic atrophic gastritis.Methods Seventy eight male Wistar rats were randomly divided into six groups:normal control group，model group，natural recovery group，WeiMeiSu control group，low-dose YWC group and high-dose YWC group.CAG model was established b

4、y synthetical method:salicylas and high-salt hot water and sodium deoxycholate were given，et al.All the factors were given for sixty days.When the model was established successfully，model group rats were sacrificed，gastric mucosa were collected，and other rats were treated with different medicines.Af

5、ter a month，all the rats were sacrificed and gastric mucosa were collected to observe the histologic mucosa changes by microscopy.Results Compared to model group，significant statistics difference（P0.01）in pathologic changes of gastric mucosa was found between YWC treated group and model group.Conclu

6、sion YiWeiXiaoZeng Capsule can scavenge，even can turnover partly the pathologic changes of gastric mucosa.It suggests YiWeiXiaoZeng Capsule can treat CAG effectively and can prevent its progress.Key words chronic atrophic gastritis（CAG） pathological histology YiWeiXiaoZeng Capsule 慢性萎縮性胃炎（CAG）是一種常見消

7、化系統(tǒng)疾病。1978年WHO將其列為胃癌的癌前狀態(tài)，而在此基礎上伴發(fā)有不完全腸腺化生（IM）和（或）中、重度不典型增生（Dys）則被視為癌前病變。本研究是以觀察益胃消增膠囊對CAG模型大鼠胃粘膜病理組織學的影響，為其療效提供科學的理論依據(jù)，并進一步挖掘其臨床應用價值。1 實驗材料1.1 實驗動物 78只健康、性成熟雄性Wistar大鼠，（150±10）g，由黑龍江中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供。1.2 實驗藥物及試劑 益胃消增膠囊（黃芪、丹參、三七粉、白芍、元胡、甘草等），由黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院制劑室提供，分別配成生藥濃度為1g/ml和2g/ml的混懸液;脫氧膽酸鈉（北京市海淀區(qū)

8、微生物培養(yǎng)基制品廠，批號:011108）配成20mmol/L的脫氧膽酸鈉溶液;氯化鈉光復精細化工研究所，批號:020811）配成150g/L的氯化鈉溶液，臨用時加熱至55;另配0.9%的氯化鈉溶液;水楊酸（天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心，批號:030109）配成濃度為2%的水楊酸溶液;維酶素片（北海陽光藥業(yè)有限公司，批號:030716）研末，配成0.1g/ml的混懸液。2 實驗方法2.1 動物分組 將78只大鼠隨機分為6組:正常對照組（組）、模型組（組）、自然恢復組（組）、維酶素對照組（組）、益胃消增膠囊低劑量組（組）及益胃消增膠囊高劑量組（組），每組13只，除組外，其余大鼠給予造模處理，造模過

9、程中組各死亡1只，多因衰竭而死，組大鼠沒有死亡。2.2 動物模型的建立及處理措施 模型建立:參閱大量文獻資料 112 ，結合中西醫(yī)理論，具體的造模方法為:150g/L、55熱鹽水，10ml?kg -1 ?d -1 ，灌胃;2%水楊酸溶液10ml?Kg -1 ?d -1 ，灌胃;均為1次/d;20mmol/L脫氧膽酸鈉溶液，自由飲用;配以饑飽失常處理，即2d飽食，1d禁食。按上述方法造模60天。處理措施:60天后，隨機殺取2只模型組大鼠，取胃體、胃竇部標本，經(jīng)光鏡證實造模成功后，殺取模型組另10只大鼠，留取胃體、胃竇部標本待測各項觀察指標。第組大鼠仍然充足供食及清潔自來水，組大鼠則停止造模，第組

10、大鼠開始給予自配生理鹽水10ml?kg -1 ?d -1 ，灌胃;第組大鼠給予0.1g/ml維酶素混懸液10ml?kg -1 ?d -1 ，灌胃;第組給予1g/ml的益胃消增膠囊混懸液以10ml?kg -1 ?d -1 ，灌胃;第組給予2g/ml的益胃消增膠囊混懸液以10ml?kg -1 ?d -1 ，灌胃;均1次/d，連續(xù)用藥30天。2.3 取材與指標檢測 處死大鼠后立即剖腹取胃，沿胃大彎剪開，于裝有生理鹽水的燒杯中漂洗干凈、攤平。2.4 鏡下觀察2.4.1 光學顯微鏡觀察 在胃體及胃竇部小彎側(cè)切取1.5 cm×1.0cm組織塊，立即投入10%甲醛溶液中固定，經(jīng)梯度酒精脫水，二甲苯

11、透明，石蠟包埋切片，常規(guī)HE染色，置Olympus BX60型光鏡下觀察，并進行顯微攝影。2.4.2 電子顯微鏡觀察 在胃體及胃竇部小彎側(cè)切取胃粘膜1mm×1mm大小各2塊，迅速固定于2.5%戊二醛內(nèi)，置4冰箱。充分固定后抽取益胃消增膠囊高劑量組2只，其余各組各1只，用磷酸緩沖液充分沖洗，再用鋨酸后固定，丙酮逐級脫水，Epon821環(huán)氧樹脂包埋，切片，光鏡下選取病變明顯部位，作超薄切片，經(jīng)醋酸鈾和檸檬酸鉛雙重 染色后，Philips Tecnai G 2 型透射電鏡下觀察。2.5 統(tǒng)計學方法 實驗數(shù)據(jù)（積分）采用均數(shù)±標準差（x±s）進行統(tǒng)計，用SPSS統(tǒng)計軟件進

12、行t檢驗統(tǒng)計分析，以P0.05差異有顯著性，以P0.01差異有非常顯著性。3 實驗結果3.1 光學顯微鏡所見 正常組胃粘膜上皮完整，腺體排列規(guī)則，粘膜固有層未見炎細胞或僅見少數(shù)淋巴細胞及嗜酸性粒細胞散在，無充血、水腫及糜爛，粘膜肌層較薄;模型組粘膜不完整，粘膜變薄或糜爛，表面可見脫落的變性、壞死的上皮細胞，粘膜腺體有不同程度的萎縮或消失，多數(shù)腺體結構排列紊亂，見核分裂像，核大深染，核漿比例失調(diào)而呈現(xiàn)有不同程度的異型性，部分腺體呈囊狀擴張。擴張的腺體在胃體及胃竇部均可見，其上皮呈柱狀。粘膜固有層內(nèi)見較多淋巴細胞、漿細胞、少數(shù)嗜酸性粒細胞及嗜中性粒細胞浸潤。重者淋巴細胞呈灶性浸潤，形成淋巴濾泡。粘

13、膜肌層增厚，厚薄不均，并向固有膜伸延，在腺體之間見較多平滑肌纖維。并伴見IM及Dys。自然恢復組病變類似模型組，而益胃消增膠囊高劑量組則表現(xiàn)為輕度CSG表現(xiàn)或接近正常組，低劑量組病變則重于高劑量組，但明顯好于維酶素對照組，而維酶素對照組則優(yōu)于自然恢復組。各組的具體情況見表1、表2。（注:各表均是按病變程度無、輕、中、重進行積分，它們的積分分別為0、1、2、3分，其分級標準參見2000年5月井岡山慢性胃炎的病理診斷標準。）表1 各組大鼠胃粘膜慢性炎癥、萎縮的情況（略） 注:與組比較， P0.01;與組比較， P>0.05;與組比較， P0.05;與組比較， P0.05表2 各組大鼠胃粘膜腸

14、化、不典型增生的情況（略）注:與組比較， P0.01;與組比較， P>0.05;與組比較， P0.05;與組比較， P0.053.2 電子顯微鏡所見 正常組胃粘膜上皮細胞微絨毛排列整齊密集，細胞器豐富，線粒體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等均未見異常，分泌顆粒未見減少。模型組上皮細胞普遍發(fā)生退變，細胞游離緣微絨毛呈明顯刷狀緣或稀疏、短小、脫落，細胞間隙增寬，細胞間質(zhì)內(nèi)可見多個大小不等的杯狀細胞。許多壁細胞、主細胞的線粒體大小不一，嵴稀疏、斷裂或消失，有 的出現(xiàn)了空化或腫脹，有的線粒體膜已溶解，線粒體破碎，部分粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)出現(xiàn)斷裂，有的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張呈囊泡狀，脫顆粒明顯，微管泡系統(tǒng)也見擴張，高爾基復合體萎縮變

15、小，基質(zhì)蒼白、疏松，次級溶酶體增多，分泌顆粒減少。粘液分泌細胞有的已退變腫脹。見到少數(shù)內(nèi)分泌細胞，多已有損傷改變，內(nèi)分泌顆粒依然存在，線粒體腫脹，細胞表面微絨毛消失或非常稀少。間質(zhì)內(nèi)有淋巴細胞、漿細胞、中性粒細胞及嗜酸性粒細胞浸潤，毛細血管內(nèi)皮細胞腫脹，有的胞漿內(nèi)形成大空泡，有的毛細血管內(nèi)皮細胞已死亡、破碎、脫落，血管壁斷裂不連續(xù)，自然恢復組的情況與此類似。益胃消增膠囊高劑量組上皮細胞微絨毛排列尚整齊，細胞間隙未見明顯增寬，細胞漿內(nèi)細胞器豐富、結構正常，線粒體大小比較規(guī)整，嵴斷裂較少，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及微管泡系統(tǒng)未見明顯擴張，分泌顆粒接近正常，間質(zhì)內(nèi)尚可見少許淋巴細胞、漿細胞。低劑量組及維酶素對照組

16、細胞損害雖不如模型組明顯，但均比高劑量組為嚴重，而低劑量組要好于維酶素對照組。4 討論世界范圍內(nèi) 13 ，胃癌的患病率僅次于肺癌，每年死亡數(shù)占全部癌癥死亡數(shù)的第二位，我國是胃癌的高發(fā)區(qū)，其死亡數(shù)更是高居癌癥死亡數(shù)之首，而從慢性淺表性胃炎慢性萎縮性胃炎腸上皮化生不典型增生早期胃癌進展期胃癌，已經(jīng)成為從癌前到癌的一大模式，并且有資料顯示 14，15 :CAG的癌變率每年約1%，據(jù)長期隨訪，伴有IM及Dys的CAG癌變率在10%左右（8.6%13%），而大部分胃癌患者伴有CAG。因此，積極治療CAG也是預防其癌變，減少胃癌發(fā)病率的有效手段，尤其是對其癌前病變的治療更為關鍵。目前西醫(yī)尚無理想的治療方法

17、，而中醫(yī)藥對該病的治療不僅積累了豐富的臨床經(jīng)驗，而且大量的臨床報道表明，中醫(yī)藥治療，療效肯定，不僅可以逆轉(zhuǎn)腺體的萎縮，甚至可使不完全腸腺化生及不典型增生逆轉(zhuǎn)，因此一直受到醫(yī)藥學界的廣泛關注。益胃消增膠囊就是其中的有效方劑之一，其臨床療效顯著 16 ，本研究是通過動物模型來進一步探究其機理。CAG屬于中醫(yī)學“胃脘痛”、“痞滿”等范疇，我們認為其病因病機不外“滯”、“虛”二字，由滯及虛。滯乃氣滯，主要因肝失條達，肝氣郁滯，也可兼夾濕邪中阻，阻滯氣機;肝氣不舒，久則木郁克土，終以肝胃同病;氣滯血行不暢，胃絡瘀血;而中焦氣滯、血瘀、濕阻日久，必致脾胃受損終至脾胃虛弱。在治療上，我們虛實并重，攻補兼施，

18、把補脾與理氣活血作為治療CAG的關鍵，以健脾補氣、活血化瘀、疏肝和胃為其治療大法，辨證處方而成益胃消增膠囊。從表1、表2中可見，益胃消增膠囊高劑量組與模型組、自然恢復組、維酶素對照組相比較，均為P0.05（或P0.01），這表明高劑量的益胃消增膠囊能有效地改善、部分逆轉(zhuǎn)其病理改變，效果優(yōu)于維酶素，而高、低劑量組間P>0.05，提示高、低劑量組在改善病理結果方面未見差異;低劑量組與模型組、自然恢復組間均P0.05，表明低劑量的益胃消增膠囊也能改善胃粘膜病理改變;各表中維酶素對照組與模型組間均>0.05，這提示本實驗中維酶素并無改善組織學的作用;而模型組與生理鹽水對照組間均P >

19、0.05，提示了CAG的病理改變未見自我恢復趨勢;電鏡下所見線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞超微結構的改變也與這些結論保持了一致。本實驗提示益胃消增膠囊能夠消除胃粘膜炎癥，并能改善、甚至部分逆轉(zhuǎn)CAG已經(jīng)形成的萎縮、腸化及不典型增生等胃粘膜病理組織學改變，這提示本方能有效治療CAG，并能防止其癌變。具體機制可能與其能夠有效清除自由基、殺滅幽門螺桿菌、改善胃粘膜微循環(huán)、參與細胞的增殖與凋亡及基因的表達與調(diào)控等有關。參考文獻1 張瀝，張玲霞，徐俊榮，等.熱鹽水致大鼠萎縮性胃炎動物模型建立.世界華人消化雜志，2002，10（5）:571-574.2 姒健敏，吳加國，曹倩，等.鼠慢性萎縮性胃炎模型的建立及致萎

20、因素探討.中華消化雜志，2001，21（2）:75-78.3 王紅漫，田德祿.慢性萎縮性胃炎實驗動物模型研究進展.中國中西醫(yī)結合脾胃雜志，1999，7（4）:249-250.4 范英昌，張斌，胡利明，等.大鼠脾氣虛型慢性萎縮性胃炎動物模型的實驗研究.天津醫(yī)藥，1994，22:86-88.5 李兆申，全山叢，許國銘，等.綜合法制作大鼠萎縮性胃炎模型的實驗研究.中華醫(yī)學雜志，1992，72:81-83.6 Watanabe H.Experimentally induced intestinal metaplasia in Wistar rats by X-ray irradiation.Gastroenterology，1978，75:796-799.7 Hong Li.Responses of the rats to H.pylori infection.In:Hong Li.Healing of Gastric Ulcer，1st ed.Gotrboth:Tryckt&Bunden Vasastadens Bbokbinderi AB，1998，48-49.8 Fujioka T，Kodama R，Honda S，et