細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)——上課用

1、一、目的要求1.了解普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和原理。2.掌握普通光學(xué)顯微鏡的正確使用和維護(hù)方法。二、實(shí)驗(yàn)原理成像原理：顯微鏡是根據(jù)透鏡成像的原理，對(duì)微小物體進(jìn)行放大的。樣品置于聚光鏡與物鏡之間，目鏡、物鏡、聚光器各自相當(dāng)于一個(gè)凸透鏡。平行的光線自反射鏡折射入聚光器，光線經(jīng)聚光器集聚增強(qiáng)，照射在標(biāo)本上。樣品的像經(jīng)物鏡放大成像，但像是倒像。目鏡將此倒像進(jìn)一步放大成像于人眼的視網(wǎng)膜上正像。三、實(shí)驗(yàn)用品普通光學(xué)顯微鏡、擦鏡紙、香柏油、二甲苯、標(biāo)本片等。四、內(nèi)容與方法普通光學(xué)顯微鏡由機(jī)械部分和光學(xué)部分和照明部分等三部分組成（圖1-1）1.機(jī)械部分：（1）鏡座（Base）：在顯微鏡的底部，呈馬蹄形、長方形、三

2、角形等。（2）鏡臂（Arm）：連結(jié)鏡座和鏡筒之間的部分，呈圓弧形，作為移動(dòng)顯微鏡時(shí)的握持部分。（3）鏡筒（Tube）：位于鏡臂上端的空心圓筒，是光線的通道。鏡筒的上端可插入接目鏡，下面與轉(zhuǎn)換器相連。鏡筒的長度一般為160mm。顯微鏡分為直筒式或斜筒式；有單筒式的，也有雙筒式的。（4）轉(zhuǎn)換器（Nosepiece）：位于鏡筒下端，是一個(gè)可以旋轉(zhuǎn)的圓盤。有34個(gè)孔，用于安裝不同放大倍數(shù)的接物鏡。（5）載物臺(tái)（Stage）：是支持被檢標(biāo)本的平臺(tái)，呈圓形或方形。中央有孔可透過光線，臺(tái)上有用來固定標(biāo)本的夾子和標(biāo)本移動(dòng)器。（6）調(diào)焦旋鈕：包括粗調(diào)焦旋鈕（Coarse adjustment knob）和細(xì)調(diào)焦

3、旋鈕（Fine adjustment knob），是調(diào)節(jié)鏡筒或載物臺(tái)上下移動(dòng)的裝置。2.光學(xué)部分：由物鏡、目鏡、聚光器等部分組成。顯微鏡的重要性能參數(shù)是分辨率的大小（即鏡頭能判別物質(zhì)兩點(diǎn)間最小的距離D）。D越小，表示分辨率越高。D=普通光學(xué)顯微鏡能分辨率直徑為0.2µm以上的物體。大部分細(xì)菌直徑在0.5µm以上，故用油鏡就能看清其個(gè)體形態(tài)。（2）目鏡起放大鏡的作用，經(jīng)物鏡放大的實(shí)像作進(jìn)一部放大。低倍物鏡下的視野深度與面積比高倍鏡下大。故常用低倍鏡尋找載玻片上的目標(biāo)。觀察的物體的工作距離與光圈大小之間的關(guān)系。（1）反光鏡：載物臺(tái)下方，鏡柱前面的一個(gè)圓鏡。一面為平面，一面為凹面

4、。平面鏡聚光力弱，適于強(qiáng)光源和平行光源。凹面鏡聚光力強(qiáng)，適用于弱光源和散射光源。反射鏡的方位可以隨意調(diào)節(jié)。（2）聚光器由聚光鏡和可變光闌組成。聚光器邊框上的數(shù)字代表其最大的數(shù)值孔徑，其作用是把光線聚集在標(biāo)本上，增強(qiáng)照明度。可變光闌是用以調(diào)節(jié)光強(qiáng)和聚光器數(shù)值孔徑大小的，使物鏡和聚光器的數(shù)值孔鏡相符合。如果光圈開得太大，超過物鏡的數(shù)值孔徑，就會(huì)產(chǎn)生光斑；如果光圈開得太小，則分辨率下降，反差增大，都會(huì)降低物像的清晰度。五、顯微鏡的使用指南1.移動(dòng)顯微鏡時(shí)要一手握持鏡臂，一手托著鏡座。2.使用時(shí)，應(yīng)通過調(diào)整凳子高度，以便能舒適地觀察，勿將顯微鏡傾斜。3.在觀察標(biāo)本時(shí)，應(yīng)兩眼同時(shí)睜開，這樣既能同時(shí)繪圖，

5、又能減少疲勞。4.調(diào)焦應(yīng)細(xì)心，應(yīng)采取將物鏡調(diào)離標(biāo)本的辦法。5.用低倍鏡時(shí)，光圈要適當(dāng)縮小，以獲得較好的對(duì)比度。隨著放大倍數(shù)的增大，所需要光的量也要加大。6.鏡檢時(shí)，應(yīng)首先用低倍鏡進(jìn)行調(diào)焦，再換高倍鏡，最后用油浸鏡進(jìn)行觀察。7.保持載物臺(tái)清潔、無油。除油浸外，其它物鏡不得接觸香柏油。8.所有透鏡應(yīng)保持清潔，只能用擦鏡紙擦拭鏡頭，不得用手觸摸透鏡。9.結(jié)束后，取下標(biāo)本片，將油浸鏡上的浸油擦拭干凈，蓋上防塵罩，放回箱內(nèi)。10.顯微鏡發(fā)生故障，應(yīng)立即向指導(dǎo)教師匯報(bào)，未經(jīng)同意，不得隨便更換顯微鏡。六、思考題1.使用顯微鏡應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？2.提高顯微鏡分辨率的方法有哪些？3.鏡檢標(biāo)本時(shí)，為什么要先用低倍物

6、鏡觀察？實(shí)驗(yàn)二 細(xì)胞凝集反應(yīng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)植物凝集素的提取方法。2.觀察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞外被是指細(xì)胞質(zhì)膜外表面的一層粘多糖物質(zhì)，它在細(xì)胞間的聯(lián)系和識(shí)別、細(xì)胞的生長和分化、免疫反應(yīng)和腫瘤發(fā)生等過程中發(fā)揮重要作用。動(dòng)物細(xì)胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖鏈伸向膜的表面，它們是細(xì)胞識(shí)別、細(xì)胞免疫及細(xì)胞接觸抑制現(xiàn)象的必要組分。凝集素是一類含糖的（少數(shù)例外）并能與糖專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。凝集素使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞表面的糖分子連接，在細(xì)胞間形成“橋”的結(jié)果。凝集素與糖分子結(jié)合有一定的專一性和結(jié)合性，并與細(xì)胞膜上受體的分布有關(guān)。3、 實(shí)驗(yàn)用品 自己歸納總結(jié)四

7、、實(shí)驗(yàn)方法1.提取凝集素：稱取土豆去皮塊莖20g，加100ml PBS緩沖液，浸泡2h后，將浸出的粗提液過濾，即為含有可溶性的土豆凝集素。2.用滴管吸取土豆凝集素和2的紅細(xì)胞懸液各1滴，置于雙凹片上，充分混勻，靜置10min后于低倍顯微鏡下觀察血球凝集現(xiàn)象。3.以PBS液加2的紅細(xì)胞懸液作對(duì)照實(shí)驗(yàn)。五、作業(yè)記錄紅細(xì)胞凝集情況。六、注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)三 細(xì)胞膜的滲透性一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握細(xì)胞膜對(duì)不同物質(zhì)的滲透性的一般規(guī)律。2.了解溶血現(xiàn)象及其發(fā)生機(jī)制。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞膜是細(xì)胞與環(huán)境之間進(jìn)行物質(zhì)與能量交換的一種選擇性通透屏障。它是一種半透膜，可選擇性地控制不同物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞。將紅細(xì)胞放在低滲鹽溶液中，水分

8、子大量滲到細(xì)胞內(nèi)，可使細(xì)胞脹破，血紅蛋白釋放到介質(zhì)中，由不透明的紅細(xì)胞懸液變?yōu)榧t色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為溶血。將紅細(xì)胞放在某些等滲鹽溶液中，由于紅細(xì)胞膜對(duì)各種溶質(zhì)的通透性不同，膜兩側(cè)的滲透壓平衡會(huì)發(fā)生改變，也會(huì)發(fā)生溶血現(xiàn)象。因此，發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時(shí)間長短可作為測(cè)量物質(zhì)進(jìn)入紅細(xì)胞速度的一種指標(biāo)。三、實(shí)驗(yàn)用品自己總結(jié)四、實(shí)驗(yàn)步驟取7支試管，分別加入0.15mol/L NaCl溶液，0.005mol/L NaCl溶液，0.8mol/L 甲醇溶液，0.8mol/L 丙三醇溶液，氯仿，2TritonX-100各3ml，作出標(biāo)記后，各管均加入50%雞紅細(xì)胞懸液2滴，混勻后靜置于溫室中，觀察各支試

9、管中發(fā)生溶血的時(shí)間及其變化。在第7支試管中，加入蒸餾水后作對(duì)照。五、實(shí)驗(yàn)觀察與溶血：試管內(nèi)液體分兩層：上層淺黃色透明，下層紅色不透明，鏡檢紅細(xì)胞完好呈雙凹盤狀。：液體混濁，上層變紅色，鏡檢有部分紅細(xì)胞呈碎片。：液體變紅而透明，鏡檢細(xì)胞全部呈碎片。六、統(tǒng)計(jì)不同濃度溶液的溶血情況，并進(jìn)行分析。七、思考題紅細(xì)胞在不同溶液中的溶血時(shí)間為什么不同？八、注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)四 考馬斯亮藍(lán)染色顯示植物細(xì)胞骨架一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握細(xì)胞骨架的光鏡標(biāo)本片的制作方法。2.了解細(xì)胞骨架的基本形態(tài)。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞骨架是指真核細(xì)胞中的蛋白纖維網(wǎng)絡(luò)體系，按組成成分和形態(tài)結(jié)構(gòu)的不同分為微管、微絲和中間絲。它們對(duì)細(xì)胞形態(tài)的維持、細(xì)胞

10、的生長、運(yùn)動(dòng)、分裂、分化和物質(zhì)運(yùn)輸?shù)绕鹬匾饔谩９忡R下細(xì)胞骨架的形態(tài)學(xué)觀察多用1 TritonX-100，可將細(xì)胞的大部分可溶性蛋白質(zhì)及全部脂質(zhì)抽提掉，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)卻被保存，再用考馬斯亮藍(lán)R250染色，使細(xì)胞質(zhì)中細(xì)胞骨架得以清晰顯現(xiàn)。三、實(shí)驗(yàn)用品（自己總結(jié)）（一）材料（二）器材（三）試劑四、實(shí)驗(yàn)方法1.取材用鑷子撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮若干（約cm2），浸入裝有PBS液的小燒杯中使其下沉，處理10min。2.抽提除去PBS液，加2ml 1 TritonX-100于小燒杯中，置于30恒溫水浴鍋處理30min。3.沖洗吸去1 TritonX-100，用M緩沖液輕輕洗3次，每次5min。4.固定

11、加3戊二醛固定20min。5.沖洗吸去固定液后，用PBS洗滌3次，每次5min。6.染色吸去PBS，滴5滴0.2考馬斯亮藍(lán)R250染液染色10min。7.制片倒去染液，用蒸餾水洗23次，將標(biāo)本平鋪在載玻片上，加蓋玻片。五、作業(yè)描繪觀察到的細(xì)胞骨架圖像。六、思考題TritonX-100的緩沖液處理材料？2.列舉你所知道的動(dòng)植物細(xì)胞中由微絲、微管和中等纖維組成的結(jié)構(gòu)。七、注意事項(xiàng)（）稱取咪唑、KCl、MgCl2·H2、EGTA乙二醇雙（氨基乙基）醚四乙酸380.35mg、EDTA、巰基乙醇0.07ml、甘油292ml，加蒸餾水至1000ml（用1mol/L HCl調(diào)pH為7.2），室溫保

12、存。2.1 TritonX-100取TritonX-100 1ml，加M緩沖液99ml。3.3戊二醛25戊二醛3ml，PBS液97ml。考馬斯亮藍(lán)R250染液考馬斯亮藍(lán)R250，加入46.5ml甲醇、冰醋酸7ml、蒸餾水46.5 ml。5.PBS（pH 7.2）A液：NaH2PO4·2H2O）936mg/LB液：Na2HPO4·12H2O）148mg/L工作液：A液68.5ml+B液31.5ml（用NaHCO3調(diào)pH）.實(shí)驗(yàn)五 動(dòng)物細(xì)胞融合 1、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握PEG誘導(dǎo)體外細(xì)胞融合的原理。2. 掌握細(xì)胞融合的方法。2、 原理兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞

13、的現(xiàn)象稱為細(xì)胞融合，也稱細(xì)胞雜交。       誘導(dǎo)細(xì)胞融合的主要方法有：     1. 病毒誘導(dǎo)：常用的是滅活的仙臺(tái)病毒（HVJ），為RNA病毒。病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的過程有：首先是細(xì)胞表面吸附許多病毒粒子，接著細(xì)胞發(fā)生凝集，幾分鐘至幾十分鐘后，病毒粒子從細(xì)胞表面消失，而就在這個(gè)部位鄰接的細(xì)胞的細(xì)胞膜融合，胞漿相互交流，最后形成融合細(xì)胞。      2. 化學(xué)融合劑誘導(dǎo)：常用的是聚乙二醇（PEG）。PEG用于細(xì)胞融合至少有兩方面的作用：可促使細(xì)胞凝

14、結(jié)；破壞互相接觸處的細(xì)胞膜的磷脂雙分子層，從而使相互接觸的細(xì)胞膜之間發(fā)生融合，進(jìn)而細(xì)胞質(zhì)溝通，形成一個(gè)大的雙核或多核融合細(xì)胞。       3. 電融合：是指細(xì)胞在電場(chǎng)中極化成偶極子，并沿著電力線排列成串，然后用高強(qiáng)度、短時(shí)程的電脈沖擊穿細(xì)胞膜而導(dǎo)致細(xì)胞融合。       細(xì)胞融合技術(shù)在基因定位、基因表達(dá)產(chǎn)物、腫瘤診斷核治療、生物新品種培育及單克隆抗體技術(shù)等領(lǐng)域有著非常廣泛的應(yīng)用前景。單克隆抗體技術(shù)就是通過細(xì)胞融合技術(shù)發(fā)展起來的，在生命科學(xué)研究核應(yīng)用方面產(chǎn)生了重大影響。三、實(shí)驗(yàn)用品自己總結(jié)四、實(shí)

15、驗(yàn)步驟1.用滅菌的注射器吸入2ml 3.8%的檸檬酸鈉，從用75酒精消過毒的兔耳緣靜脈處采取靜脈血轉(zhuǎn)入事先裝有3.8%的檸檬酸鈉的燒杯中使血液與檸檬酸鈉的體積比為1：9，放入4冰箱中保存。2.取兔紅細(xì)胞懸液lml移入l0ml的刻度離心管內(nèi)，加入4ml 0.85生理鹽水混勻，1500r/min離心5min；3.重復(fù)上述條件離心洗滌2次；4.收集最后一次離心沉淀的紅細(xì)胞，用手指輕彈底壁使沉淀松散，加入4倍體積的GKN液，配成20的紅細(xì)胞懸液。L加入1000L預(yù)熱的50%PEG混勻，44水浴10min，再加入Hanks或Ringer液5ml終止PEG作用，再取紅細(xì)胞懸液，滴于載玻片上，加0.2%次甲

16、基藍(lán)1滴，蓋上蓋玻片觀察。五、作業(yè)繪出觀察到的細(xì)胞融合。六、注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)六 線粒體和液泡系的超活染色與觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.觀察動(dòng)植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體、液泡系的形態(tài)數(shù)量與分布；2.學(xué)習(xí)細(xì)胞的超活染色技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理活體染色是指對(duì)生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色但又無毒害的一種染色方法。其目的是顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)和產(chǎn)生任何理化變化以致引起細(xì)胞死亡?；铙w染色可分為體內(nèi)活染與體外活染兩類。體內(nèi)活染是以膠體狀的染料溶液注入動(dòng)植物體內(nèi)，染料的膠粒固定于細(xì)胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)內(nèi)以達(dá)到易于識(shí)別的目的。體外活染又稱超活染色，是由活的動(dòng)植物分離出部分細(xì)胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇

17、固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)中而顯色。活體染色之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是染料的“電化學(xué)”特性起重要作用。堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽離子，這樣，它們彼此之間就發(fā)生了吸引作用。但不是任何染料都可作為活體染色劑使用，一般應(yīng)選擇那些無毒或毒性小的堿性染料并配成較稀的溶液來使用。詹納斯綠和中性紅兩種堿性染料是活體染色中重要的染料，對(duì)線粒體和液泡系的染色各有專一性。詹納斯綠可專一性地對(duì)對(duì)線粒體進(jìn)行活染，這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))，呈藍(lán)綠色；而線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中，這些染料被

18、還原為無色的色基。中性紅對(duì)液泡系的染色具有專一性，只將活細(xì)胞中的液泡系染成紅色，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)不著色，這可能與液泡中的某些蛋白質(zhì)有關(guān)。三、實(shí)驗(yàn)用品1.器材；2.試劑；3.材料四、實(shí)驗(yàn)方法（一）線粒體的超活染色與觀察（1）取清潔載玻片放在37恒溫水浴鍋的金屬板上，滴2滴 1/5000詹納斯綠溶液。（2）刮取口腔內(nèi)壁的上皮細(xì)胞，放入染液滴中染色1015min，蓋上蓋玻片，吸去溢出的染液，觀察。（1）滴一滴1/5000詹納斯綠溶液于載玻片上，用鑷子撕取一小片內(nèi)表皮，置于染液中染色1015min。（2）用吸管吸去染液，加1滴Ringer溶液，注意展平，蓋上蓋玻片，觀察。（二）液泡系的超活染色與觀察綠豆

19、幼苗根尖（1cm長）小心切一縱切面，放入載玻片內(nèi)的1/3000中性紅染液滴中，染色510min。2.吸去染液，滴一滴Ringer溶液，蓋上蓋玻片，用鑷子輕壓蓋玻片，使根尖壓扁觀察。五、作業(yè)1.繪口腔上皮細(xì)胞示線粒體形態(tài)與分布。洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞線粒體形態(tài)與分布。形態(tài)與分布。六、注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)七Feulgen氏反應(yīng)顯示DNA一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)DNA的Feulgen染色方法。2.了解Feulgen反應(yīng)原理。二、實(shí)驗(yàn)原理DNA經(jīng)弱酸（1mol/L HCl）水解，其上的嘌呤堿和脫氧核糖之間的鍵打開，使脫氧核糖的一端形成游離的醛基（CHO），這些醛基在原位與Schiff試劑（無色品紅亞硫酸溶液）反應(yīng)，形

20、成紫紅色產(chǎn)物，使細(xì)胞內(nèi)含有DNA的部位呈紫紅色陽性反應(yīng)。紫紅色的產(chǎn)生，是由于反應(yīng)產(chǎn)物的分子內(nèi)含有醌基，醌基是一個(gè)發(fā)色團(tuán)，所以具有顏色。對(duì)照組預(yù)先用三氯乙酸或DNA酶處理，抽提去細(xì)胞中的DNA而得到陰性反應(yīng)，從而證明了Feulgen反應(yīng)的專一性。三、實(shí)驗(yàn)用品自己總結(jié)四、實(shí)驗(yàn)步驟1.水解：取一小段固定的洋蔥根尖放入小燒杯中，加數(shù)滴1mol/L HCl置于60水浴箱中水解8min。對(duì)照材料在5三氯乙酸中90保溫510min，隨后再用1mol/L HCl置于60水浴箱中水解8min。2.漂洗：棄HCl后用蒸餾水漂洗片刻。3.染色：Schiff液染色30min。4.水洗：用新配制的亞硫酸水溶液洗3次，每

21、次5min，至出現(xiàn)紅色。自來水沖洗5min。5.壓片：滴一滴4.5的醋酸于載玻片上，將根尖放于載玻片上的醋酸中，加蓋玻片輕壓。七、作業(yè)觀察記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并繪圖。八、思考題在進(jìn)行Feulgen反應(yīng)時(shí)為何用HCl水解？九、注意事項(xiàng)用具與藥品（一）器材光學(xué)顯微鏡，剪刀，鑷子，解剖針，解剖盤，染色缸，注射器，載玻片，蓋玻片，擦鏡紙，吸水紙，恒溫水浴鍋，10ml小燒杯（二）試劑1.Carnoy固定液：3份95酒精加入1份冰醋酸。2.1mol/L HCl鹽酸：取濃鹽酸8.25ml，加水至100ml。先將200ml蒸餾水煮沸，由火上取下，加入堿性品紅1g，充分?jǐn)嚢枞芙?。待溶液冷卻到50時(shí)，過濾到磨口棕色試劑

22、瓶中。加入1mol/L HCl 20ml，冷卻到25時(shí)加入1g偏重亞硫酸鉀（K2S2O5）或偏重亞硫酸鈉（Na2S2O5），充分振蕩后蓋緊瓶塞，放于暗處過夜。次日取出，呈淡黃色或近于無色，加中性活性炭0.5g，劇烈振蕩1min，過濾后即得無色品紅。保存時(shí)，需塞緊瓶塞，外包黑布或黑紙，貯存在4冰箱中（可保存數(shù)月或更長時(shí)間）。如液體變紅則不宜再使用。10的Na2S2O5 5ml，1mol/L HCl 5ml，加蒸餾水至100ml，搖勻，塞緊瓶塞。此溶液現(xiàn)用現(xiàn)配，否則會(huì)因SO2的逸出而失效。5.5三氯乙酸稱取5g三氯乙酸，蒸餾水定容至100ml。醋酸4.5ml醋酸用蒸餾水定容至100ml。實(shí)驗(yàn)八 酸

23、性磷酸酶的顯示方法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.熟悉金屬鹽沉淀法顯示酸性磷酸酶的原理及操作步驟。2.觀察酸性磷酸酶在細(xì)胞中的分布。二、實(shí)驗(yàn)原理酸性磷酸酶（acid phosphatase,ACP）主要存在于巨噬細(xì)胞，定位于溶酶體內(nèi)。在溶酶體膜完整時(shí)，底物不易滲入，ACP活力微弱或無。經(jīng)固定，在一定的pH條件下，膜的穩(wěn)定性改變，其滲透性加大，底物可以滲入細(xì)胞內(nèi)，酶的活力便可以顯示出來。顯示酸性磷酸酶的方法包括金屬鹽沉淀法和偶聯(lián)偶氮法，本實(shí)驗(yàn)為金屬鹽沉淀法。其原理是：在酸性條件下（pH4.8），酸性磷酸酶可使作用液中的底物甘油磷酸鈉的磷酸根解離出來，與溶液中硝酸鉛結(jié)合形成磷酸鉛，該沉淀物無色，需要再與黃色的硫化

24、胺作用顯示，生成棕黑色硫化鉛沉淀，進(jìn)而顯示該酶的活性。其主要反應(yīng)過程如下：ACP甘油磷酸鈉 甘油PO43PO43Pb(NO3)2 Pb3(PO4)2Pb3(PO4)2(NH4)2S PbS（棕黑）三、實(shí)驗(yàn)用品 自己總結(jié)四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟1.實(shí)驗(yàn)前46d每天用無菌注射器取已滅菌的3淀粉溶液1ml注射于小鼠腹腔。5天注射34h后，頸椎脫臼處死小鼠，剖開腹腔，吸取腹腔液，在4預(yù)冷的載玻片上涂片。3.放入37ACP作用液中30min。2min。5.10甲醛鈣固定液固定5min。2min。7.放入2硫化胺溶液35min。觀察。對(duì)照實(shí)驗(yàn)：對(duì)照組的作用液中不加甘油磷酸鈉，而以蒸餾水代替。或放入作用液之前先在

25、50水浴中處理30min，使酶失去活性，作好標(biāo)記，然后同時(shí)進(jìn)行上述過程。五、作業(yè)描述實(shí)驗(yàn)所得的結(jié)果，并進(jìn)行分析。六、注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)九 聯(lián)會(huì)復(fù)合體的染色與觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)光學(xué)顯微鏡顯示聯(lián)會(huì)復(fù)合體技術(shù)，觀察其形態(tài)結(jié)構(gòu)。二、實(shí)驗(yàn)原理聯(lián)會(huì)復(fù)合體（synaptonemal complex,簡稱S.C）是減數(shù)分裂前期同源染色體配對(duì)形成的非永久性核內(nèi)特殊結(jié)構(gòu)，典型的S.C由三股平行的線狀結(jié)構(gòu)組成，即兩條平行側(cè)線和一條纖細(xì)的中央軸組成。一般開始于偶線期，成熟于粗線期，消失于雙線期。它與減數(shù)分裂三個(gè)重要環(huán)節(jié)同源染色體聯(lián)會(huì)、交換以及分離有著密切關(guān)系。2、 實(shí)驗(yàn)用品 自己總結(jié)四、實(shí)驗(yàn)方法1.頸椎脫臼處死雄性小鼠，取出睪丸，放入盛有2ml 0.7檸檬酸鈉培養(yǎng)皿中。2.剪開白膜，用解剖針和