丹參注射液促心肌梗塞后大鼠缺血心肌血管新生作用及對相關生長因子的影響研究

1、丹參注射液促心肌梗塞后大鼠缺血心肌血管新生作用及對相關生長因子的影響研究 08-05-21 14:31:00 作者：王振濤編輯：studa20【摘要】 目的觀察丹參注射液對心肌梗塞（MI）后大鼠缺血心肌血管新生作用，并探討其機制。方法雄性Wistar大鼠，結扎左冠狀動脈造成急性心肌梗塞（AMI）模型，隨機分為丹參注射液組、麝香保心丸（陽性對照）組、模型組（陰性對照），并設假手術組，6周后處死動物。用免疫組織化學法，檢測各組大鼠缺血心肌中微血管數(shù)（MVC）、微血管密度（MVD）及血管內皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）、血小板衍生生長因子（PDGF-）、胰島素樣生長因子（

2、IGF-1）蛋白的表達，用病理圖像分析系統(tǒng)測定生長因子蛋白表達灰度值并進行半定量分析。結果模型組、麝香保心丸組及丹參注射液組大鼠MI邊緣區(qū)MVC和MCD較假手術組明顯增多（P0.05）；丹參注射液組大鼠缺血心肌局部MVC和MVD明顯高于模型組（P0.05），與麝香保心丸組作用相似（P0.05）。模型組VEGF，bFGF-，IGF-1蛋白表達及其灰度值明顯高于假手術組（P0.05）；丹參注射液組VEGF，bFGF，PDGF-蛋白表達灰度值明顯高于模型組（P0.05），而IGF-1蛋白表達灰度值低于模型組（P0.05）VEGF，bFGF，PDGF-，IGF-1蛋白表達灰度值低于麝香保心丸組（P0.

3、05）。結論丹參注射液有促MI后大鼠缺血心肌血管新生的作用，其機制可能與促進VEGF，bFGF，PDGF-的表達有關。 【關鍵詞】 丹參注射液 心肌梗塞 血管新生 分子機制Study of Angiogenesis and Correlative Growth Factors Effects of Salvia miltiorrhiza Injection on the Ischemic Myocardium of the Rats after Myocardial InfarctionAbstract：ObjectiveTo study the angiogenesic effects an

4、d mechanisms of Salvia miltiorrhiza Injection on the ischemic myocardium of the rats after myocardial infarction(MI).MethodsMale wistar rats were ligated left coronary artery to be made into models of acute myocardial infarction (AMI). All rats were randomly divided into Salvia miltiorrhiza Injectio

5、n, Shexiang baoxin pills (positive control group), model (negative contral group) group and sham operation group. Treated them respectively for six weeks. Microvascular count(MVC), microvascular density (MVD), vascular endothelial growth factor (VEGF), basic fibroblast growth factor (bFGF), insulin-

6、kind growth factor (IGF) and platelet-derived endothelial growth factor (PDGF) in ischemic myocardium of MI rats were detected by immunobistochemistry assay. The values of protein expression of VEGF,bFGF, PDGF- and IGF-1 on ischemic myocardyzum were calculated and analied by image analysis system.Re

7、sults There were more MVC and MVD in ischemic myocardium of AMI rats of model group、salvia miltiorrhiza injection group, Shexiang baoxin pills group than sham operation group. MVC and MVD were higher in ischemic myocardium of AMI rats of Salvia miltiorrhiza Injection group than those of model group.

8、 Compared with Shexiang baoxin pills, they had the same roll. The values of protein expression of VEGF, bFGF, PDGF- and IGF-1 in model group were significantly elevated compared with that in sham operation group. The protein expression of VEGF, bFGF and PDGF- in salvia miltionrrhiza injection group

9、was significantly elevated compared with that in sham operation group. The protein expression of VEGF,bFGF and PDGF- in Salvia miltiorrhiza Injection group was significantly elevated compared with that in model group. IGF- 1 in Salvia miltiorrhiza Injection group was lower than modle group. But ther

10、e was no significant statistics difference between them. There were significant statistics differences in the protein expression of VEGF,bFGF,PDGF-and IGF-1 in salvia miltiorrhiza injection group compared with that in Shexiang baoxin pills group. Conclusion Salvia miltiorrhiza Injection has the effe

11、ct of promoting angiogenesis of the ischemic myocardium in rats after MI. Its mechanisms can be related with stimulating the expression of VEGF,bGFG and PDGF-.Key words：Salvia miltiorrhiza Injection; MI; Angiogenesis; Molecular mechanism 本研究觀察丹參注射液對MI后大鼠缺血心肌血管新生的影響，并通過觀察其對相關生長因子蛋白表達水平的變化探討促血管新生作用機制。

12、1 材料與方法1.1 材料1.1.1 藥品丹參注射液，上海第一生化藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號031001；麝香保心丸，上海和黃藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號A040214，把麝香保心丸粉碎后溶于無菌蒸餾水中，每毫升含麝香保心丸3 mg。1.1.2 試劑小鼠抗大鼠CD34單克隆抗體，購自美國Santa公司，生物素化二抗、三抗、非免疫血清購自福建邁新公司；VEGF、bFGF、IGF-1、PDGF-免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，SP-9001 Rabbit SP Kit購自北京中杉金橋生物技術有限公司；DAB顯色試劑盒購自北京中山公司。1.1.3 器材小動物呼吸機（江西特力麻醉呼吸設備公司，型號

13、TKR-200C）；顯微鏡（日本OLYMPUS光學有限公司，型號CH20BIMF200）；石蠟切片機（德國蔡司公司，型號HM340E）；彩色病理圖像分析系統(tǒng)（日本Sony公司，型號SSC-DC18P）。1.2 動物造模及分組選取體重為（20020） g的Wistar 雄性大鼠（鄭州大學動物中心提供，合格證號：410116），參照文獻方法1，1%戊巴比妥鈉腹腔注射（35 mg/kg）麻醉，背位固定，行氣管插管術，連接小動物呼吸機，人工呼吸，開胸結扎左冠脈根部，以即刻心臟表面顏色變化和術后心電圖1、aVL導聯(lián)ST段顯著抬高顯示造模成功，縫合胸壁，觀察大鼠生理狀態(tài)平穩(wěn)后，停止人工呼吸，術后注射青霉素

14、3 d預防感染。成活動物隨機分為丹參注射液組、麝香保心丸組、模型組，假手術組手術方法同上，但在冠狀動脈下穿線后打一松結。1.3 治療方法造模后24 h內開始藥物干預，給藥1次/d。假手術組腹腔注射生理鹽水10 mlkg-1d-1；丹參注射液組腹腔注射丹參注射液0.5 gkg-1d-1；麝香保心丸組管飼麝香保心丸30 mgkg-1d-1；模型組管飼與治療組同等容積的生理鹽水10 mlkg-1d-1。6周后處死動物。1.4 心肌取材麻醉大鼠后取出心臟，剪去主動脈弓、右心室、心房、心耳等，在乳頭肌橫切面切取心肌組織（包括心梗區(qū)、移行區(qū)、健存區(qū)），10%中性緩沖福爾馬林液固定，石蠟包埋，制備厚4 m組

15、織切片。1.5 觀察指標1.5.1 一般組織形態(tài)學觀察切片脫臘，二甲苯透明，HE染色，梯度酒精脫水，二甲苯透明，樹膠封固，光鏡觀察。1.5.2 大鼠MI邊緣區(qū)心肌MVC，MVD的測定用免疫組織化學法染色組織切片。一抗工作濃度為1100。染色后血管內皮細胞被染成黃、棕色。微血管判斷標準：按參考文獻方法2，不以紅細胞的出現(xiàn)來確定是否為血管，也不以是否出現(xiàn)管腔來計數(shù)血管，凡是染成棕黃色單個內皮細胞或內皮細胞簇均作為一個血管計數(shù)，凡管腔大于8個紅細胞大小、帶有較厚肌層血管區(qū)域的血管均不計數(shù)。具體方法為：先在40視野下找到MI邊緣區(qū)，然后在400視野下進行大鼠MI邊緣區(qū)微血管計數(shù)，每張切片隨機選取5個視野，計數(shù)每個視野的MVC，取其均值作為本例大鼠的MVC值，因MVD以毛細胞血管個數(shù)/視野表示，故每例的MVC值即為該大鼠的MVD值。1.5.3 大鼠MI邊緣區(qū)心肌VEGF