P504s、CK-HMW、p6S-100蛋白與前列腺癌病理分級的關系.docx

1、P504s> CK-HMW、p63、S-100蛋白與前列腺癌病理分級的關系 段凱軍 李青(河南省商丘市第四人民醫(yī)院病理科商丘476100)摘要：目的：探究前列腺癌病理分級與a-甲酰基輔酶A-消旋酶、人高分子量細胞角蛋白、 p63蛋白及S-100蛋白的關系。方法：收集2017年1月2020年10月期間的前列腺穿刺活 檢標本，前列腺癌標本92例，納入PCa組；良性前列腺增生標本80例，納入BPH組。所 有標本均行免疫組化檢測a-甲?；o酶A消旋酶和人高分了量細胞角蛋白、p63、S-100蛋 白的表達，光鏡下觀察前列腺癌患者病理組織學形態(tài)，進行Gleason分級評分。比較a-甲酰 基輔酶A-消

2、旋酶，人高分子量細胞角蛋白、p63、S-100蛋白在PCa組、BPH組中的表達陽 性率，以及這些指標在不同Gleason分級中的表達強度，采用Spearman相關性分析a-甲酰 基輔酶A-消旋酶水平，人高分子量細胞角蛋白、p63、S-100蛋白表達強度與Gleason分級 的相關性。結(jié)果：a-甲?；o酶A-消旋酶在PCa組中表達陽性率高于BPH組，人高分子量 細胞角蛋白、p63、S-100蛋白在PCa組中表達陽性率低于BPH組3均<0.05) ； PCa組 中Gleason評分W7分者如甲?；o酶A-消旋酶表達強度低于Gleason評分>7分者(P< 0.05),人高分子量細

3、胞角蛋白、p63、S-I00蛋白在PCa組不同Gleason分級中的表達強度 差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05) o Spearman相關性分析結(jié)果顯示，Gleason分級與P504s表達 強度呈正相關性(r=0.632, PV0.05),與人高分子量細胞角蛋白(r=0.212, PXJ.05)、p63 (r=0.197, P>0.05)、S-100蛋白(r=0.244, P>0.05)表達強度無顯著相關性。結(jié)論：a- 甲?；o酶A-消旋酶、人高分子量細胞角蛋白、p63、S-100蛋白在前列腺癌的鑒別診斷中 有重要應用價值，a-甲?；o酶A-消旋酶可作為評價前列腺癌病情與預后的

4、重要參考指標。 關鍵詞：前列腺癌；病理分級；a-甲?；o酶A-消旋酶：高分子量角蛋白；p63蛋白；S-100 蛋白Relationship Between P504s, CK-HMW, p63 Protein and S-100 Protein and Pathological Grades of Prostate CancerDUAN Kai-jun, LI Qing(The Department of Pathology, the Fourth People's Hospital of Shangqiu, Hcnan476100)Abstract: Objective: To ex

5、plore the relationship between pathological grades of prostate cancer and a-formyl coenzyme A-racemase, Human high molecular weight cytokeratin, p63 protein and S-100 protein. Methods: From January 2017 to October 2020, 92 prostate cancer specimens were collected and included in PCa group; 80 benign

6、 prostatic hyperplasia specimens were included in BPH group. The expressions of a-fonnyl coenzyme A-racemase, Human high molecular weight cytokeratin, p63, S-100 protein were detected by immunohistochemistry. The histopathological morphology of prostate cancer patients was observed under light micro

7、scope, and Gleason grading was performed. The levels of a-fbrmyl coenzyme A-racemase, the positive rales of Human high molecular weight cytokeratin, p63 and S-100 protein expression in PCa group and BPH group, and the expression intensity of these indicators in different Gleason grades were compared

8、. The correlation between a-fbrmyl coenzyme A-racemase, Human high molecular weight cytokeratin, p63 and S-100 protein expression intensity and Gleason grades was analyzed by Spearman correlation. Results: The positive rate of a-formyl coenzyme A-racemase in PCa group was higher than that in BPH gro

9、up, while the positive rates of Human high molecular weight cytokcratin, p63 protein and S-100 protein in PCa group were lower than those in BPH group (all P<0.05). The expression intensity of a-formyl coenzyme A-racemase of patients with Gleason score <7 points in PCa group was lower (han (ha

10、t of patients with Gleason score>7 points (all P<0.05), but there was no significant difference in the expression intensity of Human high molecular weight cytokeratin, p63 and S-IOO protein in different Gleason grades of PCa group (P>0.05). Spearman correlation analysis showed that Gleason

11、grade was positively correlated with a-formyl coenzyme A-raccmasc expression (r=0.632, P<0.05), but not with Human high molecular weight cytokcratin (r=0.212, P>0.05), p63 (r=0.197, P>0.05) and S-100 protein (r=0.244, P>0.05). Conclusion: a-fbrmyl coenzyme A-racemase, Human high molecula

12、r weight cytokcratin, p63 protein and S-100 protein have important application value in the differential diagnosis of prostate, a-formyl coenzyme A-racemase can be used as an important reference index for evaluating the disease condition and prognosis of prostate cancer.Key words: Prostate cancer; P

13、athological grades; a-formyl coenzyme A-racemase; Human high molecular weight cytokcratin; p63 protein; S-100 protein中圖分類號：R737.25文獻標識碼：B前列腺癌是我國發(fā)病率位居前二的男性惡性腫瘤，由于發(fā)病隱匿、早期癥狀 不明顯，多數(shù)患者確診時己為晚期。隨著直腸超聲前列腺穿刺活檢技術(shù)及血清前 列腺特異性抗原(PSA)的應用，前列腺癌的早期檢出率己顯著提升。前列腺 穿刺活檢是診斷前列腺癌的可靠手段，但活檢獲得的樣本量有限，且在病變不典 型的情況下，單憑光鏡鏡檢、蘇木精-伊紅染色

14、(HE染色)，很難對微小病灶做 出明確診斷。前列腺癌病理診斷強調(diào)腫瘤細胞異形性、浸潤現(xiàn)象及腺體結(jié)構(gòu)異 常，而前列腺癌的病理形態(tài)差別不大，光鏡下進行病理診斷較為困難，故需要免 疫組化協(xié)助診斷。本研究分析免疫組化指標a-甲酰基輔酶A-消旋酶(P504s)、 人高分子量細胞角蛋白(CK-HMW)、p63蛋白、S-100蛋白與前列腺癌病理分 級的關系，探討其對前列腺癌診斷的意義。現(xiàn)報道如下：1資料與方法1.1 一般資料收集我院2017年1月2020年10月前列腺穿刺活檢標本，前列腺癌標本92例，納入PCa組；良性前列腺增生標本80例，納入BPH組。 納入標準：經(jīng)組織形態(tài)學檢查，參考免疫組化結(jié)果最終確診

15、為前列腺癌(PCa組) 或良性前列腺增生(BPH組)；首次就診病例。PCa組年齡46-79歲，平均(66.21+7.62)歲；Gleason分級評分囹，W7分44例，>7分48例。BPH組年 齡4782歲，平均(65.73±7.79)歲。兩組年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。1.2 檢測方法所有標本均行免疫組化檢測P504s, CK-HMW、p63、S-100蛋白的表達，光鏡下觀察PCa組標本病理組織學形態(tài)，進行Gleason分級評分。 1.2.1 常規(guī)病理觀察將獲取的標本采用體積分數(shù)為10%的甲醛液固定， 石蠟包埋，連續(xù)切片，行常規(guī)HE染色。根據(jù)HE染色切片中

16、腫瘤組織學形態(tài), 觀察切片中組織形態(tài)結(jié)構(gòu)、排列方式及腫瘤浸潤情況、間質(zhì)變化。1.2.2 免疫組織化學檢測 采用免疫組化實驗（SP）法進行檢測。試劑盒: 鏈霉菌抗生素蛋白-過氧化物酶與生物素標記的第二抗體與底物色素混合液；抗 體：小鼠抗CK-HMW單克隆抗體、DAK-p63抗體、兔抗人P504s單克隆抗體（13H4）、兔抗人S-100多克隆抗體，均來自Dako公司。染色步驟：石蠟切片 進行脫蠟、水化，并采用自來水沖洗；按照第一抗體相關要求，對組織進行抗原 修復；去除磷酸緩沖鹽溶液，過氧化物酶阻斷試劑滴于切片，孵育10min（室溫）； 去除血清，第一抗體滴加在切片上，孵育60 min （室溫）或過

17、夜（4°C）,磷酸 緩沖鹽溶液沖洗3 min,反復沖洗3次；去除磷酸緩沖鹽溶液，將生物素標記的 第二抗體滴加于切片上，孵育1（） min（室溫），再采用磷酸緩沖鹽溶液沖洗3 min, 反復沖洗3次；去除磷酸緩沖鹽溶液，鏈霉菌抗生素蛋白-過氧化物酶滴加于切 片，孵育10 min （室溫），磷酸緩沖鹽溶液沖洗3 min,反復沖洗3次；去除磷 酸緩沖鹽溶液，將新鮮配置的DAB顯色試劑滴加于切片上；采用自來水沖洗， 終止顯色，再以蘇木素復染，磷酸緩沖鹽溶液返藍；對切片進行梯度乙醇脫水處 理，二甲苯透明化，并采用中性樹膠封固。1.2.3 免疫組織化學結(jié)果評估 由兩名病理醫(yī)師對免疫組織化學結(jié)果進

18、 行判斷。顯微鏡下隨機選擇5個視野，計算各視野中陽性細胞數(shù)占上皮細胞總數(shù) 百分比，并結(jié)合染色強度進行評分。陽性細胞占比vl%記0分，陽性細胞占比 2%25%記1分，陽性細胞占比26%50%記2分,陽性細胞占比51%75%記3 分，陽性細胞占比>75%記4分。染色強度：無染色記0分，弱染色記1分，中 等染色記2分，強染色記3分。陽性細胞占比評分與染色強度評分相乘為總分， 根據(jù)總分分為：，01分；+, 24分；+, 58分；+, 912分。1.3 觀察指標 比較 P504s, CK-HMW、p63、S-100 蛋白在 PCa 組、BPH 組中的表達陽性率，及P504s, CK-HMW、p63

19、、S-100蛋白在不同Gleason分級 中的表達強度；采用Spearman相關性分析P504s, CK-HMW、p63、S-100蛋白 表達強度與Gleason分級的相關性。1.4 統(tǒng)計學方法以SPSS20.0統(tǒng)計學軟件及Origin8.0軟件進行數(shù)據(jù)處理及繪圖。計數(shù)資料采用頻數(shù)表示，進行X 2檢驗；等級資料比較采用秩和檢驗； 相關性檢驗采用Spearman分析。所有檢驗均為雙側(cè)檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2 結(jié)果2.1 P504s, CK-HMWs p63、S.100蛋白表達情況比較 P504s在PCa組 中表達陽性率高于BPH組，CK-HMW、p63、S-100蛋白在P

20、Ca組中表達陽性率 低于BPH組(P均<0.05) o見表1。表1P504s、CK-HMW、p63、S-100蛋白表達情況比較例(%)組別nP504sCK-HMWp63S-100PCa組9289 (96.74)4 (4.35)4 (4.35)45 (48.91)BPH組8010 (12.50)80 (100.00)80 (100.00)70 (87.50)X2124.301156.687156.68728.755P<0.001<0.001<0.001<0.(X)l2.2P504s在PCa組不同Gleason分級中的表達強度比較PCa組中，Gleason評分W7分者

21、P504s表達強度低于Gleason評分>7分者(P<0.05)。見 表2。表2P504s在PCa組不同Gleason分級中的表達強度比較例(%)Gleason 分級例數(shù)- +<7分442 (4.55 )18 (40.91)24 (54.55)0 (0.00)>7分481 (2.08)10 ( 20.83)18 (37.50)19 (39.58)Z3.914P<0.0012.3 CK-HMW蛋白在PCa組不同Gleason分級中的表達強度比較CK-HMW在PCa組不同Gleason分級中表達強度差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 見表3。表3 CK-HMW蛋

22、白在PCa組不同Gleason分級中的表達強度比較例(%)Gleason 分級例數(shù)-+<7分4441 (93.18)0 (0.00)3 (6.82)0 (0.00)>7分4847 (97.92)1 (2.08)0 (0.00)0 (0.00)Z1.128P0.2592.4p63蛋白在PCa組不同Gleason分級中的表達強度比較p63蛋白在PCa組不同Gleason分級中表達強度差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表4。表4p63蛋白在PCa組不同Gleason分級中的表達強度比較例（%）Gleason 分級n-+W7分4441(93.18)2 (4.55)1 (2.27)0

23、 (0.00)>7分4847(97.92)1 (2.08)0 (0.00)0 (0.00)Z1.106P0.2692.5S.100蛋白在PCa組不同Gleason分級中的表達強度比較S-100蛋白在PCa組不同Gleason分級中表達強度差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表5。表5S-100蛋白在PCa組不同Gleason分級中的表達強度比較例（%）Gleason 分級例數(shù)- + +W7分4420 (45.45)7 (15.91)15(34.09)3 (6.82)>7分4827 (56.25)8 (16.67 )12(25.00)1 (2.08)Z1.374P0.1702.

24、6P504s, CK.HMW、p63、S-100蛋白表達強度與Gleason分級的相關性Spearman相關性分析結(jié)果顯示，Gleason分級與P504s表達強度呈正相關性（P<0.05）,與CK-HMW、p63、S-100蛋白表達強度無顯著相關性（P>0.05）。見表6<>表6P504s, CK-HMW、p63、S-100蛋白表達強度與Gleason分級的相關性指標P504sCK-HMWp63S-100rPrPrPrPGleason 分級0.632<0.0010.212>0.050.197>0.050.244>0.053 討論前列腺穿刺活檢技術(shù)

25、是診斷前列腺癌的金標準，但前列腺癌區(qū)別于其他臟器 腺癌，其生物學行為及形態(tài)結(jié)構(gòu)較為獨特。前列腺癌較少出現(xiàn)單核、多核瘤巨細 胞，也少見顯著的核異型，主要表現(xiàn)為核仁增大，故傳統(tǒng)的惡性指標如核分裂、 核異型、血管淋巴管及包膜侵犯對其診斷價值不高"I。前列腺癌病理診斷主要觀 察腫瘤細胞異型性、浸潤情況及腺體結(jié)構(gòu)異常改變，由于其病理形態(tài)復雜、差別 微小，故在光鏡下診斷較為困難，需結(jié)合免疫組化進行判斷。P504s是一種前列腺癌細胞標志物，存在于胞質(zhì)過氧化物中。既往研究采用 基因芯片篩選發(fā)現(xiàn)，P504s與正常前列腺上皮組織無反應，而在前列腺癌中過表 達【叱P504s在前列腺癌免疫組化染色后，可在低

26、倍鏡下區(qū)分于正常組織。據(jù)文 獻報道，前列腺癌88%以上胞質(zhì)內(nèi)P504s彌漫性強陽性表達。本研究中，P504s 在PCa組中表達陽性率為96.74%,顯著高于BPH組的12.50%,與既往研究一 致3】。且有充分研究證實，P504S的表達與前列腺癌的生物學行為有密切關系， P504s高表達可在一定程度上提示惡性程度高、預后不佳【。Gleason分級系統(tǒng) 是目前應用最廣泛的前列腺癌組織病理學分級系統(tǒng)，是根據(jù)低倍鏡下觀察到的腺 體生長方式、分化程度、間質(zhì)浸潤狀態(tài)來評分，可作為前列腺癌診斷、預后的預 測指標，與前列腺癌患者病情發(fā)展、轉(zhuǎn)歸、預后有密切關系。本研究結(jié)果顯 示，P504s在Gleason評分

27、W7分的患者中表達強度小J Gleason評分7分的患 者；Spearman相關性分析結(jié)果顯示，Gleason分級與P504s表達強度呈正相關性, 表明P504s與前列腺癌病理分級密切相關，P504s的表達可能在腫瘤的發(fā)生、發(fā) 展、遠處轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用?；准毎笔乔傲邢侔┰\斷的重要形態(tài)學依據(jù)。CK-HMW是基底細胞 的重要標志物，在前列腺腺體基底細胞中存在，故CK-HMW高表達提示基底細 胞完好未被侵犯，可作為前列腺癌診斷、分期的輔助指標p63是一種核蛋白， 可在具有增殖功能的基底細胞層中選擇性表達，故通常只在前列腺良性病變或正 常前列腺組織中表達，而在前列腺癌中不表達或低表達，其診斷意

28、義與CK-HMW 基本類似f,51o S-100蛋白是一種酸性鈣離子結(jié)合蛋白，是病理診斷中較為常見的 免疫組化標志物"虬 研究顯示，S-100蛋白具有廣泛的細胞內(nèi)外生物學作用，在 細胞外具有巨噬細胞激活、白細胞趨化、細胞增殖調(diào)節(jié)作用，這一功能使其在腫 瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用mi。S-100蛋白可與p53蛋白相互作用，促進p53 蛋白依賴的細胞凋亡，因此是一種腫瘤抑制因子U8】。本研究結(jié)果顯示,CK-HMW、 p63、S100蛋白在PCa組中表達陽性率分別為4.35%、4.35%、48.91%,在BPH 組表達陽性率則為100%、100%、87.50%,表明CK-HMW、p63、

29、S-100蛋白均 可作為鑒別前列腺良惡性病變的指標。CK-HMW、p63、S-100蛋白在不同Gleason 分級中的表達強度差異無統(tǒng)計學意義，且Spearman相關性分析結(jié)果顯示,Gleason 分級與三者表達強度均無顯著相關性，表明CK-HMW、p63、S-I00蛋白并非可 有效預測前列腺癌病情發(fā)展、預后的生物標志。綜上所述，P504s, CK-HMW、p63> S-100蛋白在前列腺癌的鑒別診斷中有 重要的應用價值，P504s可作為評價前列腺癌病情與預后的重要參考指標。參考文獻1 賴己創(chuàng)，曾寶輝,陳佳琳，等.超聲引導下前列腺穿刺病理標本免疫學指標與前列 腺癌相關性J.實用醫(yī)學雜志,

30、2019,35(6):898-902.2 Fonseca-Alves CE,Kobayashi PE,Rivera Calderon LG,et al.Immunohistochemical panel to characterize canine prostate carcinomas according to aberrant p63 ex pression J. Pios One,2018,13(6):e.3 畢罡,毛成毅，江軍，等.聯(lián)合檢測P504s和Claudin-4在前列腺癌中的表達及其在 預后評估中的價值J.第三軍醫(yī)大學學報,2019,41(22):2195-2198.4 曾曉勇，吳人亮.前列腺癌Gleason分級系統(tǒng)的臨床價值J.現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜 志,2009,1(1):56-57.5 辛華，王莉，張淑萍，等.多種標記物聯(lián)合應用對前列腺癌診斷的臨床意義J.海南 醫(yī)學院學報,2018,24(20): 1849-1851.6 郭睿，田怡，金雪媛，等.胸昔酸合成酶免疫組化染色在標記前列腺基底細胞中的 應用J.山西醫(yī)科大學學報,2019,50(5):658-663.7 龔德霖，李錚，萬志成，等.P504s、34PE12與p65聯(lián)合CK5/6對前列腺良惡性病 變鑒別診斷的臨床意義J