回流法與超聲法對(duì)清脂顆粒有效成分提取比較研究

1、回流法與超聲法對(duì)清脂顆粒有效成分提取比較研究         09-08-29 09:06:00     作者：黃志海 蔡宇 馮笑    編輯：studa20【摘要】  目的: 比較不同方法對(duì)清脂顆粒中有效成分進(jìn)行提取，篩選最佳條件。方法: 采用正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)法，以高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定有效成分含量，比較提取率。結(jié)果: 清脂顆粒中有效成分的最佳提取條件超聲法為加6倍量的80的乙醇，提取3次，每次提取30min。結(jié)論: 所

2、確定的提取條件穩(wěn)定可行。 【關(guān)鍵詞】  提取 正交設(shè)計(jì) 清脂顆粒 有效成分清脂顆粒是由制首烏、決明子、山楂等藥配伍而成，用于痰濁阻滯型高脂血癥。本實(shí)驗(yàn)研究是根據(jù)處方中藥材所含有效成分的性質(zhì)，通過(guò)回流法和超聲法進(jìn)行提取，確定清脂顆粒中的乙醇提取條件。分別采用正交實(shí)驗(yàn)探討乙醇倍數(shù)、提取時(shí)間、提取次數(shù)和加醇含量作為考察因素，以2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷，大黃素，熊果酸含量為檢測(cè)指標(biāo)，對(duì)兩個(gè)方法進(jìn)行比較，報(bào)告如下。1  儀器與對(duì)照品1.1  主要儀器    LC-10AT型液相色譜儀泵主機(jī)（日本島津）；S

3、PD-10A型紫外檢測(cè)器（日本島津）；N-2000色譜工作站（浙江大學(xué)智達(dá)公司）；萬(wàn)分之一電子天平（美國(guó)PE公司）；SB2200-T型超聲波清洗器（上海奧特賽恩斯儀器公司）。1.2  對(duì)照品    大黃素對(duì)照品，110756-200110；2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄糖苷，110844-200404；熊果酸，110742-200527。均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。2  實(shí)驗(yàn)部分2.1  正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)    優(yōu)選提取工藝條件，按每份試驗(yàn)1日用量稱(chēng)取制首烏、決明子、山楂等藥

4、材以L(fǎng)9（34）正交表率選，每方法共試驗(yàn)9份。    其因素水平安排見(jiàn)表1，結(jié)果見(jiàn)表2。表1  清脂顆粒劑提取工藝因素水平表（略）2.2  有效成分指標(biāo)含量測(cè)定3，42.2.1  2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷    色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水（13:87）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm。理論踏板數(shù)以葡萄苷峰計(jì)應(yīng)不低于2000。    對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取葡萄苷對(duì)照品適量，加稀乙醇制成每1ml含0.

5、2mg的溶液，即得。    供試品的制備：取本品粉末約0.5g，精密稱(chēng)定，具塞錐型瓶中，精密加入稀乙醇10ml，稱(chēng)定重量，超聲30min，放冷，再稱(chēng)定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失重量，濾過(guò)，取上清液，即得。    測(cè)量法：精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10l，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。    本品按照干燥品計(jì)算，含2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷（C2OH22O9）不得少于0.70。2.2.2  大黃酚，大黃素    色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)

6、性實(shí)驗(yàn)：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.1磷酸溶液（85：15）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm。理論踏板數(shù)以大黃素,大黃酚峰計(jì)應(yīng)不低于3000。    對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取大黃酚，大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含20g的溶液，即得。    供試品的制備：取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約1g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇10ml，稱(chēng)定重量，超聲處理30min，放冷再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。    測(cè)定法：分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10l，注入液相色譜儀，

7、測(cè)定，即得。2.2.3  熊果酸5，6    色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水-磷酸溶液（85：14.95：0.05）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。理論踏板數(shù)以熊果酸峰計(jì)應(yīng)不低于3000。    對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取熊果酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得。    供試品的制備：取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約1g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇10ml，稱(chēng)定重量，超聲處理30min，放冷再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

8、    測(cè)定法：分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10l，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。     09-08-29 09:06:00     作者：黃志海 蔡宇 馮笑    編輯：studa202.3  方差分析    根據(jù)表2，3的結(jié)果，將三指標(biāo)含量之和作為綜合含量進(jìn)行方差分析。表2  回流提取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷、大黃素、熊果酸含量測(cè)定正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

9、L9（34）（略）表3  超聲提取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷、大黃素、熊果酸含量測(cè)定正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果L9（34）（略）2.4  工藝條件的確定    從方差分析結(jié)果可知，清脂顆粒制首烏、決明子、山楂的醇提條件中，提取方法、乙醇倍數(shù)、提取時(shí)間均無(wú)顯著差異（P>0.05），提取次數(shù)和乙醇濃度具有顯著性差異（P<0.05），各因素的作用的主次為乙醇濃度>提取次數(shù)>提取倍數(shù)>提取方法>提取時(shí)間，較適宜的因素為：乙醇濃度2提取次數(shù)3提取倍數(shù)2提取時(shí)間1。3  討論 &#

10、160;   中藥有效成分的提取是指從原料藥材中分離有效成分的操作，其直接關(guān)系到中藥有效成分的得率和后續(xù)加工的難易程度。傳統(tǒng)的提取方法主要有溶劑提取法、水蒸氣蒸餾法兩種。溶劑提取法又分為浸漬法、滲濾法、煎煮法、回流提取法以及連續(xù)提取法等。這些傳統(tǒng)的方法普遍存在著提取率不高、雜質(zhì)消除率低、能耗高、生產(chǎn)周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)。近年來(lái)，一些新的技術(shù)，如超聲場(chǎng)強(qiáng)化、超臨界流體萃取、微波輔助提取技術(shù)、破碎提取法、空氣爆破提取法、荷電提取法、旋流提取法等被廣泛應(yīng)用于中藥有效成分的提取過(guò)程中。    通過(guò)比較提取方法，回流法和超聲法沒(méi)有顯著性差異，根據(jù)節(jié)省能源、降低成本的前提，選擇超聲法為本顆粒提取方法。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，清脂顆粒中制首烏、決明子、山楂的最佳提取條件為6倍量的80乙醇，提取3次，每次30min。    用超聲法提取中藥有效成分，方便快捷，提取率比傳統(tǒng)的回流方法高，但真正的工業(yè)化生產(chǎn)還有待深入探討?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 謝偉，謝紹輝，張愛(ài)紅.安神補(bǔ)心顆粒醇提工藝研究.廣東藥學(xué)，2005，15（3）：2830.2 許小軍，田更河，馮洪江，等.通脈活絡(luò)康顆粒的制備及質(zhì)量控制.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26（3）：336337.3 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典(一