肝炎靈對血清膽堿酯酶活性影響的臨床觀察及機制研究

1、    作者：郭獻忠，顏劍斌，王治宇，蘇毅，李曉琳，梁學(xué)琳，蘭晶聶紅明，梁翠云，金磊，金樹根【摘要】  目的 動態(tài)觀察慢性肝病治療使用肝炎靈過程中血清膽堿酯酶活性和體外肝炎靈及其組分苦參堿和苦參素對血清膽堿酯酶活性的干預(yù)作用，以探討其作用機制及臨床意義。方法 采用每天肌注肝炎靈4 ml并動態(tài)觀察病人肝功能變化，通過體外肝炎靈和所含雙稠哌啶類生物堿成分苦參堿與苦參素及槐定堿與血清共育觀察對血清膽堿酯酶活性等肝功指標影響。結(jié)果 慢性肝病治療使用肝炎靈過程中血清膽堿酯酶活性明顯進行性下降，與其他肝功能指標改善無相關(guān)性，停用肝炎靈后血清膽堿酯

2、酶活性明顯回復(fù)性升高。體外血清共育實驗表明，肝炎靈和苦參堿及特定品牌的高濃度苦參素對血清膽堿酯酶活性有抑制作用。結(jié)論 體內(nèi)外肝炎靈和苦參堿對膽堿酯酶活性有直接抑制作用，而有些品牌的高濃度苦參素對膽堿酯酶活性有一定抑制作用，其原因可能是苦參素質(zhì)量問題（含有其他的強力膽堿酯酶活性抑制劑）或保存不當致苦參素變質(zhì)（轉(zhuǎn)化為強力膽堿酯酶活性抑制劑）所致?？鄥㈩惿飰A體內(nèi)用藥致血清膽堿酯酶明顯下降原因是其在人體內(nèi)可經(jīng)過代謝轉(zhuǎn)化成為具有強力抑制膽堿酯酶活性的代謝產(chǎn)物或轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。 【關(guān)鍵詞】  肝炎靈；雙稠哌啶類生物堿；苦參堿；苦參素；膽堿酯酶活性    Abstract

3、  Objective  To observe the in vitro and in vivo effect and explore the mechanism of Ganyanlin and its quinolizidine alkaloids Matrine and Oxymatrine on serum cholinesterase activity.Methods  Ganyanlin was injected intramuscularly 4 ml daily，and the serum cholinesterase

4、 activity and other liver function serum index of patients with liver disease were measured weekly.Ganyanlin and its quinolizidine alkaloids such as Matrine，Oxymatrine were incubated with serum in vitro，to measure serum cholinesterase activity.Results  After Ganyanlin was injected，the seru

5、m cholinesterase activity was progressively downregulated with no relationship to other serum index of liver function，and after Ganyanlin was discontinued，the serum cholinesterase activity was progressively upregulated.By in vitro incubating with serum，the effect of Ganyanlin was same，and it was als

6、o found that among its two quinolizidine alkaloids Matrine and Oxymatrine，only Matrine had significant effect in downregulating the serum cholinesterase activity，but some kinds of Oxymatrine at high concentration also in some degree had an effect in downregulating the serum cholinesterase activity.C

7、onclusion  In vivo and in vitro Ganyanlin downregulates the serum cholinesterase activity through its component Matrine or other quinolizidine alkaloids which have stronger downregulating effects on serum cholinesterase activity，or / and biotransfering into Matrine or other quinolizidine a

8、lkaloids which have stronger downregulating effects on serum cholinesterase activity.In vitro some kind of Oxymatrine at high concentration also in some degree had an effect in downregulating the serum cholinesterase activity due to containing the matter which have  downregulating effects

9、on serum cholinesterase activity.In Vivo Matrine or Oxymatrine and other quinolizidine alkaloids may biotransfer into stronger inhibitors of cholinesterase activity.    Key words  Ganyanlin；quinolizidine alkaloids；moatrine；oxymatrine；cholinesterase activity    在治療慢性乙肝的過

10、程中，近年來隨著雙稠哌啶類生物堿（quinolizidine alkaloids）如苦參堿和氧化苦參堿（苦參素）制劑的廣泛應(yīng)用，臨床觀察表明在肝功能其他各項指標均有不同程度改善的同時，卻可伴有血清膽堿酯酶活性下降15?？紤]肝炎靈（山豆根注射液）中含有大量苦參堿，并以其生物堿苦參堿不少于35 mg/支作為質(zhì)量控制指標，而因檢測方法和山豆根產(chǎn)地不一，文獻報道山豆根中苦參素含量是苦參堿的0.618倍610。而肝炎靈中其生物堿主要成分為苦參堿（未發(fā)表資料，江蘇常熟制藥廠提供資料）。鑒于此，在臨床實踐中筆者對使用肝炎靈的病人進行了治療前后血清膽堿酯酶活性變化的動態(tài)觀察，結(jié)合其所含的生物堿苦參堿和苦參素成

11、分，進行了體外上述藥物與血清共孵育實驗，檢測其對血清膽堿酯酶活性的影響，以探討臨床上苦參類生物堿致膽堿酯酶活性下降的原因及生物學(xué)意義，現(xiàn)將研究結(jié)果報告如下。    1  材料與方法    1.1  肝炎靈對肝炎患者血清膽堿酯酶活性影響的檢測    1.1.1  病例選擇  上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院東院肝炎科住院病人隨機分成肝炎靈組12例和對照甘利欣組12例，并排除其他心腎重要器官嚴重疾病者入組。    1.1.2  

12、;給藥及取樣  慢性乙型肝炎患者8例采用肝炎靈（2 ml/支，其中苦參堿含量不低于35 mg/2 ml，江蘇常熟制藥廠）每日2支一次性肌注，至少觀察用藥3周以上，對部分病人進行停藥后隨訪。于肝炎靈治療前、治療后每周及停藥后13周抽血常規(guī)肝功能檢測。對照組5例采用甘利欣治療（甘利欣50 mg/支，連云港正大天晴制藥有限公司），每日150 mg一次性靜滴治療。    1.1.3  指標檢測  包括各種常規(guī)肝功能指標如谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT，GPT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST，GOT）、堿性磷酸酶（AKP）、谷氨酰

13、胺轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、直接膽紅素（DB）和膽堿酯酶（ChE）等，其中ChE檢測采用英國Randox公司試劑盒、DB檢測采用日本和光純藥工業(yè)株式會社試劑盒、其他酶檢測采用日本第一化學(xué)工業(yè)株式會社試劑盒，采用美國雅培Areoset全自動生化分析儀按產(chǎn)品說明和相應(yīng)程序上機進行檢測。    1.2  肝炎靈及其組分苦參堿和苦參素體外對健康人血清膽堿酯酶活性影響的檢測    1.2.1  藥物  肝炎靈注射液（2 ml/支，其中苦參堿含量不低于35 mg/2 ml），江蘇常熟制藥廠，批號0502021肝炎靈

14、（蘇）；苦參素粉針劑（200 mg/支），吉林省輝南長龍生化藥業(yè)股份有限公司，批號20041201苦參素（吉）；苦參堿注射液（50 mg/5 ml），廣州明興制藥有限公司，批號040903-3苦參堿（粵）；苦參素葡萄糖注射液（0.6 g/100 ml），江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司，批號0508221苦參素（蘇）；苦參素葡萄糖注射液（0.6 g/100 ml），四川美大康佳樂藥業(yè)有限公司，批號05041531苦參素（川）；苦參堿葡萄糖注射液（150 mg/250 ml），江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司，批號0504181苦參堿（蘇）；苦參堿和苦參素，寧夏豐利源生物化工制品有限公司提供，純度98%

15、以上苦參堿（銀）和苦參素（銀）。    1.2.2  血清  浙江省臺州市玉環(huán)縣中醫(yī)院檢驗科收集的血清混合。    1.2.3  試劑  血清膽堿酯酶活性檢測試劑采用北京利德曼公司試劑盒（批號503011）。    1.2.4  藥物配制  按有關(guān)生物堿對膽堿酯酶活性影響的文獻設(shè)置高濃度和苦參堿、苦參素的人體動力學(xué)資料設(shè)置低濃度11，12。高濃度液是用5%葡萄糖液將肝炎靈、苦參素和苦參堿稀釋配制成濃度為1 mgml，

16、另外還將廣州明興制藥有限公司苦參堿注射液用5%葡萄糖液稀釋配制成濃度為0.6 mgml以便與0.6 mgml天晴苦參堿5%葡萄糖液相比較。低濃度液（2 gml）將上述高濃度液采用注射用水進行稀釋而成。    1.2.5  檢測方法  取各藥物的高、低濃度液與等量混合血清混勻，一式三份，將混有藥物血清置37 水浴中孵育10 min和24 h，以不含藥而只加等體積的稀釋液為對照，取樣采用HITACHI 7080全自動生化分析儀（日立公司產(chǎn)品）按試劑廠家試劑盒說明書設(shè)置參數(shù)進行膽堿酯酶活性檢測。    1.3  統(tǒng)計學(xué)處理  數(shù)據(jù)采用微機全部輸入SPSS數(shù)據(jù)庫，計量資料齊性檢驗后進行方差分析和兩兩比較和相關(guān)性分析。    2  結(jié)果    2.1  肝炎靈對肝炎患者血清膽堿酯酶活性影響  見表1。雖每例患者使用肝炎靈后血清膽堿酯酶活性進行性下降，因肝炎靈組內(nèi)差異太大（治療前27007400 u/L），致肝炎靈不同