短暫性MCAO大鼠注射天麻素具有神經(jīng)保護(hù)作用

1、短暫性MCAO大鼠注射天麻素具有神經(jīng)保護(hù)作用         08-10-11 11:46:00     編輯：studa20         作者：楊杰，趙朝華，宗長(zhǎng)宏，張峰昌，陳國(guó)敏  【摘要】  目的： 探討天麻素對(duì)缺血性腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用. 方法： 通過(guò)線栓技術(shù)閉塞大腦中動(dòng)脈（MCAO）2 h誘導(dǎo)建立暫時(shí)性局部腦缺血模型，SD大鼠腹腔內(nèi)連續(xù)注射天麻素3 d. 采用TU

2、NEL染色測(cè)定缺血邊緣區(qū)細(xì)胞凋亡；免疫組織化學(xué)染色觀測(cè)S100和iNOS蛋白表達(dá). 結(jié)果： MCAO后3 d，天麻素組大鼠腦梗死邊緣區(qū)TUNAL+細(xì)胞數(shù)目明顯減少（P<0.05）；S100和iNOS+細(xì)胞數(shù)目下降（P<0.05）. 結(jié)論： 天麻素可以抑制腦缺血誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，具有神經(jīng)保護(hù)作用；S100和iNOS蛋白表達(dá)的下調(diào)可能涉及到天麻素的抗細(xì)胞凋亡作用. 【關(guān)鍵詞】  天麻素；腦缺血；細(xì)胞凋亡；S100；iNOS    0引言    腦血管疾病的病理生理過(guò)程是非常復(fù)雜的，涉及到興奮性毒性、一氧化氮(NO)蓄積

3、、鈣超載、氧自由基損傷、能量代謝障礙、凋亡、膠質(zhì)細(xì)胞異常等. 腦缺血后神經(jīng)元死亡存在壞死和凋亡兩種方式. 抑制凋亡過(guò)程，挽救缺血性半暗帶內(nèi)的神經(jīng)元，防止半暗區(qū)向梗塞區(qū)的發(fā)展逐漸成為腦缺血保護(hù)劑研究的熱點(diǎn)1. 研究發(fā)現(xiàn)天麻素的神經(jīng)保護(hù)作用與抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)2. 本實(shí)驗(yàn)的目的是通過(guò)研究天麻素對(duì)暫時(shí)性大腦中動(dòng)脈閉塞（MCAO）大鼠的細(xì)胞凋亡和S100以及iNOS蛋白表達(dá)的影響，探討天麻素的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制.    1材料和方法    1.1材料健康雄性SpragueDawley (SD)大鼠（由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供），體質(zhì)量240

4、280 g. 實(shí)驗(yàn)前常規(guī)環(huán)境分籠飼養(yǎng)7 d. 參考longa等(1989)描述的管腔內(nèi)線栓技術(shù)閉塞大腦中動(dòng)脈制作暫時(shí)性局部腦缺血. 簡(jiǎn)要過(guò)程, 大鼠經(jīng)水合氯醛（300 mg/kg）腹腔注射麻醉，分離暴露右側(cè)頸部血管，40縫合線結(jié)扎頸外動(dòng)脈和頸總動(dòng)脈，將一頭端加熱呈光滑球形并覆有多聚賴(lài)氨酸（sigma）的30單股尼龍線（購(gòu)于寧波醫(yī)用縫針廠）緩慢插入頸內(nèi)動(dòng)脈至感到有輕微阻力為止(約距頸總動(dòng)脈分叉處1718 mm),閉塞MCA起始部. 手術(shù)期間使用電熱毯維持大鼠體溫在36.537.5. 大鼠拔線后分為天麻素組（n=4）和對(duì)照組（n=4）. 天麻素組大鼠按100 mg/kg腹腔內(nèi)每日注射天麻素注射液（

5、中山市三才醫(yī)藥集團(tuán)有限公司）1次，連續(xù)3 d. 對(duì)照組大鼠注射同體積的生理鹽水. 所有大鼠放回籠中常規(guī)喂養(yǎng).    1.2方法    統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：  計(jì)量數(shù)據(jù)均用x±s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.    2結(jié)果    2.1缺血邊緣區(qū)TNNEL陽(yáng)性細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)目變化MCAO后3 d在缺血側(cè)半球可見(jiàn)許多TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞環(huán)繞在梗死區(qū)周?chē)?，散在分布于正常?xì)胞中（圖1）. 而天麻素組缺血邊緣區(qū)凋亡細(xì)胞數(shù)目(18.42±

6、;2.43)較對(duì)照組（23.53±3.36）減少(P<0. 05).    圖1MCAO大鼠（A）和天麻素治療MCAO大鼠（B）缺血邊緣區(qū)TUNEL免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞TUNEL ×200    2.2缺血邊緣區(qū)S100陽(yáng)性細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)目變化免疫組織化學(xué)染色顯示，對(duì)照組大鼠MCAO后3 d S100陽(yáng)性細(xì)胞在缺血中心區(qū)消失，在缺血邊緣區(qū)出現(xiàn)大量胞體肥大呈圓形的S100陽(yáng)性細(xì)胞，突起較多且長(zhǎng). 天麻素治療組大鼠在缺血邊緣區(qū)也可見(jiàn)許多的S100陽(yáng)性細(xì)胞，但數(shù)目較少（圖2）. S100陽(yáng)性細(xì)胞定量分析顯示對(duì)照組組為1

7、8.92±2.37，天麻素組為14.64±3.11，天麻素組少于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0. 05).    圖2MCAO大鼠（A）和天麻素治療MCAO大鼠（B）缺血邊緣區(qū)S100免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞SABC ×200    2.3缺血邊緣區(qū)iNOS陽(yáng)性細(xì)胞的分布和數(shù)目變化免疫組織化學(xué)染色（圖3）顯示，各組大鼠MCAO后3 d在缺血側(cè)腦可見(jiàn)許多iNOS陽(yáng)性細(xì)胞，主要集中于梗死區(qū)周?chē)? 在天麻素組iNOS陽(yáng)性細(xì)胞體積較小,數(shù)目(27.42±5.18)較對(duì)照組（35.77±6.01

8、）減少(P<0.05).    圖3MCAO大鼠（A）和天麻素治療MCAO大鼠（B）缺血邊緣區(qū)iNOS免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞SABC ×200    3討論    研究表明腦缺血再灌注后的病理改變是形成缺血核心區(qū)和缺血半暗帶. 核心區(qū)為腦血流減少最嚴(yán)重的區(qū)域，神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞能量衰竭，失去調(diào)節(jié)其離子含量的能力，最終細(xì)胞死亡. 圍繞在缺血核心周?chē)娜毖氚祹а┦芤种?細(xì)胞功能受損，但能量代謝保存，為可逆性修復(fù)的腦組織1. 腦缺血再灌注后,壞死細(xì)胞主要位于梗死灶中心區(qū),而凋亡細(xì)胞主要分布于梗死邊緣區(qū)的內(nèi)側(cè), 并呈放射狀動(dòng)態(tài)地向四周擴(kuò)展, 提示缺血邊緣區(qū)