大腸菌群-國標(biāo)表

1、實驗六：衛(wèi)生細(xì)菌的檢驗大腸菌群的測定一、實驗?zāi)康呐c要求：（1） 學(xué)習(xí)并掌握水體中大腸菌群的檢驗方法、檢驗的原理、檢驗的依據(jù)、數(shù)據(jù)處理和報告方法。（2） 強(qiáng)化水體大腸菌群檢驗的衛(wèi)生意義知識。二、實驗原理大腸菌群系指一群在37，24小時能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，需氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌中大腸菌群數(shù)是以每100毫升（克）檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)（MPN）表示。三、儀器及材料1、乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 1.1成份 A 蛋白胨 10g B 牛肉膏 3g C 乳糖 5g D 氯化鈉 5g E 溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) 1mL F 蒸餾水 1000mL 1.2制法 將蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化

2、鈉溶于蒸餾水中，調(diào)整pH為7.27.4，再加入1mL溴甲酚紫乙醇溶液（16g/L），充分混勻，分裝于裝有倒管的試管中，115高壓滅菌20min，儲存于冷暗處備用。 2、二倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 按上述乳糖蛋白胨培養(yǎng)液除蒸餾水外，其它成份量加倍。 3、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基 3.1成份 A 蛋白胨 10g B 乳糖 3g C 磷酸氫二鉀 5g D 瓊脂 5g E 蒸餾水 1000mL F 伊紅水溶液(20g/L) 20mL G 美藍(lán)水溶液(5g/L) 13mL 3.2制法：將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，校正pH為7.2，加入乳糖，混勻后分裝，以115 高壓滅菌20min。臨用時加熱熔化瓊脂，冷至

3、5055，加入伊紅和美藍(lán)溶液，混勻，傾注平皿。 4、革蘭氏染色液 4.1結(jié)晶紫染色液 A. 成份 a結(jié)晶紫 1g b乙醇 p （C2H2OH）=95% 20mL c草酸銨水溶液（10g/L） 80mL B制法：將結(jié)晶紫溶于乙醇 p （C2H2OH）=95%中，然后與草酸銨溶液混合。 注：結(jié)晶紫不可用龍膽紫代替，前者是純品，后者不是單一成份，易出現(xiàn)假陽性。結(jié)晶紫溶液放置過久會產(chǎn)生沉淀，不能再用。 4.2革蘭氏碘液 A成份 碘片 1g 碘化鉀 2g 蒸餾水 300mL B制法：將碘和碘化鉀先進(jìn)行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水。 4.3脫色劑：乙醇 p （C2H2OH）=9

4、5%。 4.4沙黃復(fù)染液 A成份 a沙黃 0.25g b乙醇 p （C2H2OH）=95% 10mL c蒸餾水 90mL B制法：將沙黃溶解于乙醇中，待完全溶解后加入蒸餾水。 注：如沙黃買不到，可用苯酚復(fù)紅染色液（1+10），作復(fù)染液，復(fù)染時間為10s。 儀器設(shè)備 1培養(yǎng)箱：36±1 2冰箱：04 3天平 4顯微鏡 5平皿：直徑為9cm 6試管 7分度吸管：1mL，10mL 8錐形瓶 9小倒管 10載玻片四、實驗內(nèi)容1、檢驗生活飲用水時，取10mL水樣接種到10mL雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，取1mL水樣接種到10mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，另取1mL水樣注入到9mL滅菌生理鹽水中，混勻

5、后吸取1mL（即0.1mL水樣）注入到10mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，每一稀釋度共接種5管。對已處理過的出廠自來水，需經(jīng)常檢驗或每天檢驗一次的，可直接種5份10mL雙料培養(yǎng)基，每份接種10mL水樣。 3、將接種管置36±1培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24±2h，如所有乳糖蛋白胨培訓(xùn)管都不產(chǎn)氣產(chǎn)酸，則可報告為總大腸菌群陰性，如有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，則按下列步驟進(jìn)行。 4、分離培養(yǎng) 將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，于36±1培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)1824h，觀察菌落形態(tài)，挑取符合下列特征的菌落： 深紫黑色，具有金屬光澤的菌落。 紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落。 淡紫紅色，中心較深的

6、菌落。 作革蘭氏染色、鏡檢和證實試驗。 5、證實試驗 經(jīng)上述染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽胞桿菌，同時接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，置36±1培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24±2h，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實有總大腸菌群存在。五、實驗報告根據(jù)證實為大腸菌群陽性管數(shù)，查MPN檢索表。報告每100毫升（克）樣品中大腸菌群的最近似值。大腸菌群檢驗程序表2：10毫升、1毫升、0.1毫升檢樣各接種3管的大腸桿菌最近似數(shù)（每100毫升）檢索表。陽性管MPN陽性管MPN陽性管MPN10ml1ml0.1ml10ml1ml0.1ml10ml1ml0.1ml001312011233530026121153002300391222

7、03013901031232430264011613016303950129131203104301312132243117502061332931212002192009313160022122011432093023162022032115003092032632221003113210153232900321621120330240033192122733146010042133433211001017220213331100+1021122128    1031522235    110722342