安捷倫HPLC1260

1、Agilent 1260 HPLC 工作原理工作原理及簡單操作及簡單操作 10-12-2012Agilent 1260 HPLC 工作原理及簡單操作工作原理及簡單操作 培訓(xùn)目的： 1.了解HPLC各模塊的原理； 2. 掌握HPLC各模塊日常維護的要點； 3. 掌握開機，關(guān)機。Agilent 1260 HPLC 工作原理及簡單操作工作原理及簡單操作 內(nèi)容： 一、 HPLC各模塊的原理及維護； 二、開機/關(guān)機操作； 三、討論； 四、評估。一一 、 HPLC各模塊工作原理及維護各模塊工作原理及維護 HPLC： 高效液相色譜儀（High Performances Liquid Chromatograp

2、hy）。 由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾個部分組成。 工作時儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)樣品進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。關(guān)于溶劑關(guān)于溶劑HPLC各模塊的工作原理及維護所有溶劑應(yīng)為HPLC級，水應(yīng)為二次超純水；所有溶劑應(yīng)經(jīng)過過濾。過濾水應(yīng)使用水相濾膜，過濾有機相應(yīng)使用有機相濾膜，不能混用。每一次濾

3、膜只能用一次，不能重復(fù)使用；如果沒有在線脫氣機，所有溶劑應(yīng)經(jīng)過超聲脫氣；水易滋生藻類，避免直接照射，過濾水最好使用不要超過兩天；如果條件允許可向溶劑中加入0.001-0.0001M的疊氮化鈉；注意溶劑的相容性，避免使用不相容的溶劑；避免使用強酸、強堿或有機氯等腐蝕性溶劑；在溶劑瓶中的溶劑過濾頭可能會堵塞，必要時小心拿下用強酸（35%硝酸）浸泡時，用水沖洗，但不要使用超聲處理。關(guān)于在線真空脫氣機關(guān)于在線真空脫氣機在線真空脫氣機的管路容量為12ml，壓力范圍為110Torr-190Torr。為保證脫氣機的良好使用性能，在下述情況下需要用注射器抽洗脫氣機管路，每個通道使用不低于30ml的異丙醇。1，

4、新的脫氣機或新的管路；2，更換了溶劑，尤其是緩沖鹽與有機相之間、兩個不相容流動相之間的互換時；3，輸液泵關(guān)閉了一段時間，或使用揮發(fā)性溶劑混合物。HPLC各模塊的工作原理及維護關(guān)于泵：（四元泵）關(guān)于泵：（四元泵）HPLC各模塊的工作原理及維護關(guān)于泵（泵頭組件）關(guān)于泵（泵頭組件）出口球閥BOV清洗閥Purge Valve柱塞桿Piston主動輸入閥AVHPLC各模塊的工作原理及維護活塞外框架Seal Wash組件泵頭密封墊泵腔更換過濾白頭更換過濾白頭在清洗閥中的過濾白頭需要更換，在清洗狀態(tài)下，設(shè)置流量為5ml/min，此時系統(tǒng)壓力如果超過10bar，則需更換過濾白頭。更換步驟：1，關(guān)閉泵電源；2，

5、用扳手去掉通往進樣器上的毛細管，拔掉廢液管；3，用專用扳手小心把清洗閥卸下來；4，輕輕去掉聚四氟乙烯密封墊和金密封墊，將過濾白頭拿出；5，更換新的過濾白頭，裝上聚四氟乙烯密封墊和金密封墊；6，裝上清洗閥；7，連接管路。過濾白頭聚四氟乙烯密封墊金密封墊清洗閥PurgeValveHPLC各模塊的工作原理及維護更換過濾白頭更換過濾白頭1，去掉毛細管，廢液管2，卸掉清洗閥3，更換過濾白頭4，更換白頭，裝好清洗閥HPLC各模塊的工作原理及維護泵的注意事項泵的注意事項1，溶劑的過濾、脫氣；2，避免使用腐蝕性溶劑；3，在滿足分析的前提下，盡可能使用較低的流速較低的系統(tǒng)壓力。4，更換過濾白頭；5，考慮溶劑的相

6、容性；6，盡可能使用新鮮的水；7，使用0.01M以上濃度的緩沖溶液要選配柱塞清洗組件，清洗液不能干涸。8，使用正相溶劑比如環(huán)己烷時，建議使用聚乙烯密封墊，部件號為0905-1420，在0200Bar下使用聚乙烯密封墊比標(biāo)準(zhǔn)密封墊更耐磨損。四元泵： 四元泵多通道比例閥MCGV使用時注意，緩沖溶液要放在A、D通道，以避免鹽顆粒析出。建議A通道：水；B、C通道：有機溶劑；D通道：緩沖溶液。HPLC各模塊的工作原理及維護樣品準(zhǔn)備樣品完全溶解在流動相中樣品沒有完全溶解過濾樣品，確保樣品中不含固體顆粒用流動相或比流動相弱的溶劑溶解樣品進樣量盡量小關(guān)于進樣器HPLC各模塊的工作原理及維護關(guān)于進樣器準(zhǔn)備位置準(zhǔn)

7、備位置調(diào)用樣品瓶調(diào)用樣品瓶吸樣品吸樣品進樣和運行位置進樣和運行位置標(biāo)準(zhǔn)進樣過程標(biāo)準(zhǔn)進樣過程 .HPLC各模塊的工作原理及維護自動進樣器自動進樣器樣品要干凈、經(jīng)過過濾。樣品要干凈、經(jīng)過過濾。l洗針：把樣品殘留降低到最洗針：把樣品殘留降低到最小限度，可降低進樣的記憶小限度，可降低進樣的記憶效應(yīng)，洗針瓶最好不要加瓶效應(yīng)，洗針瓶最好不要加瓶墊。墊。l多次吸液多次吸液用于進樣量大于用于進樣量大于100100ululHPLC各模塊的工作原理及維護關(guān)于恒溫柱箱關(guān)于恒溫柱箱控制范圍：最高80C，低溫低于室溫10C。預(yù)熱塊體積左面為3ul，右面為6ul，除非有特殊要求，左右溫度應(yīng)保持一致。一定要關(guān)閉前面板。HP

8、LC各模塊的工作原理及維護關(guān)于原理關(guān)于原理HPLC各模塊的工作原理及維護關(guān)于色譜柱保護關(guān)于色譜柱保護 過濾所有的溶劑和樣品過濾所有的溶劑和樣品 使用保護柱使用保護柱 儀器在使用完畢，要沖洗整個系統(tǒng)，移走系統(tǒng)中的緩沖液。儀器在使用完畢，要沖洗整個系統(tǒng)，移走系統(tǒng)中的緩沖液。 柱子在不使用時，兩端密封保存柱子在不使用時，兩端密封保存 在適當(dāng)?shù)娜軇┲斜４嬷釉谶m當(dāng)?shù)娜軇┲斜４嬷?注意色譜柱的注意色譜柱的pHpH值使用范圍值使用范圍 不要高壓沖洗柱子不要高壓沖洗柱子 不要高溫下過長時間使用硅膠鍵合相不要高溫下過長時間使用硅膠鍵合相HPLC各模塊的工作原理及維護檢測器檢測器DADDAD (Diode A

9、rray Detector)二極管陣列檢測器，是以光電二極管陣列作為檢測元件的UV-VIS檢測器.DAD的光源氘燈有一定的半衰期，一般為1000小時左右，所以在沒有樣品分析任務(wù)時要關(guān)閉氘燈，以延長氘燈的使用壽命,但是也不要頻繁的開關(guān),這樣也會影響壽命。同時，打開燈需要預(yù)熱10min 左右，燈使用時間越長，預(yù)熱的時間也要越長。流動池污染后，會造成靈敏度下降、噪聲加大，應(yīng)避免臟的樣品進入流動池。定期使用異丙醇沖洗系統(tǒng)對保持流動池性能有一定好處。HPLC各模塊的工作原理及維護檢測器檢測器DADHPLC各模塊的工作原理及維護檢測器檢測器FLDHPLC各模塊的工作原理及維護FLD(Fluorescenc

10、e Detector) 熒光檢測器：是利用某些溶質(zhì)在受到紫外光激發(fā)后，能發(fā)射可見光（熒光）的性質(zhì)來檢測的。FLD是一款具有高度靈敏度和高度選擇性的檢測器。其激發(fā)光源是氙燈，此燈不需要預(yù)熱。其流通池和DAD的一樣，也要定期用異丙醇沖洗，以保證性能。檢測器檢測器RIDHPLC各模塊的工作原理及維護二、二、 開機開機/關(guān)機操作關(guān)機操作Seal washComputerPowerChemstationPurge二、二、 開機開機/關(guān)機操作關(guān)機操作開機操作：1，打開計算機。2，打開LC各模塊的電源，等待儀器自檢完畢，1-2min。3，雙擊桌面上“Instrument 1 Online”圖標(biāo)，進入化學(xué)工作

11、站,在工作站打開各工作模塊。4，打開Seal Wash清洗液開關(guān)，清洗10min。5，打開清洗閥，排除系統(tǒng)中的氣泡，平衡差不多30min.6, 擰上清洗閥，將流量設(shè)為所需流速，平衡30min即可以打樣。關(guān)機操作：1，如果使用了緩沖溶液流動相應(yīng)先用水沖洗系統(tǒng)30min。2，用純有機相沖洗系統(tǒng)30min。3，在工作站上關(guān)閉各個模塊。4，退出工作站，關(guān)閉計算機。5，關(guān)閉LC各個模塊的電源。指示燈狀態(tài)指示燈狀態(tài)每個部件接通電源后LED燈顯示綠色關(guān)機 power off準(zhǔn)備進樣 power on沒準(zhǔn)備好Not Ready運行Run故障Error駐留ResidentBlink儀器LED狀態(tài)顯示電源開關(guān)顯示

12、黑Black黑Black黃Yellow綠Green紅Red黃閃爍Yellow blinking6種LED儀器狀態(tài)：開機/關(guān)機操作逆時針旋轉(zhuǎn)打開清洗閥，清洗閥打開時，液體從廢液管中流出，為清洗狀態(tài)。更換溶劑后，打開清洗閥，設(shè)置流量5ml/min，沖洗5-10 min.順時針旋緊清洗閥為關(guān)閉狀態(tài),此時流動相由毛細管流向進樣器.逆時針打開清洗閥順時針關(guān)閉清洗閥毛細管出口,流向進樣器廢液管,清洗閥打開時溶劑由此流向廢液瓶.開機/關(guān)機操作清洗閥清洗閥Purge Valve每次用過儀器后必須做每次用過儀器后必須做! !整臺液相色譜儀的維護整臺液相色譜儀的維護1. 在使用過含鹽緩沖液后必須清水沖洗泵15分鐘，此時 必須打開排放閥，不能使廢液進入色譜柱。2. 關(guān)上排放閥，用90%+10%的水、甲醇溶液沖