人參莖葉皂甙對鴨禽流感疫苗的免疫增強作用和抗氧化功能的影響.docx

1、DOI：10.14083/j.issn.1001-4942.2017.03.025人參莖葉皂忒對鴨禽流感疫苗的免疫增強作用和抗氧化功能的影響楊金保，張琳2，李兆華，李禹濤3,吳媛媛3,劉紅巖，吳家強2(1.山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學院，山東濰坊261061；2.山東省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所/山東省畜禽疫病防治與繁育重點實驗室，山東濟南250100；3.濰坊市農業(yè)科學院，山東濰坊261071；4,臨沂新程金鑼牧業(yè)有限公司，山東臨沂276000)摘要:為探討人參莖葉皂忒(GSLS)對鴨流感疫苗的免疫增強作用和抗氧化功能的影響,給鴨群飲水口服GSLS,同時接種食流感疫苗，通過檢測血清抗AIV特異性HI效價

2、、免疫器官指數(shù)、淋巴細胞增殖轉化指數(shù)、細胞因子和腸黏膜SlgA水平，評價GSLS的免疫增強作用；通過測定血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量，評價GSLS對機體抗氧化功能的影響。結果表明：在28和35日齡時，飲水口服中劑量GSLS組鴨血清抗AIV特異性H1效價顯著高于對照組(P0.05),1份+GSLS組鴨血清抗AIV特異性HI效價顯著提高(P0.05)；飲水口服GSLS能顯著增強鴨脾臟和法氏囊指數(shù)(P0.05).顯著提高受ConA刺激產生的脾淋巴細胞增殖轉化指數(shù)，顯著或不顯著提高脾淋巴細胞上清中IFN-7(Thl)和IL-4(Th2)水平，顯著提高鴨腸黏膜SlgA含量;飲水口服

3、中劑量GSLS組血清MDA和SOD含量分別顯著低于和高于對照組(P）分泌水平（免疫后2周和3周）；收集空腸，刮取腸黏膜，進行腸道SI-gA濃度測定（免疫后1周和2周）。免疫器官指數(shù)和淋巴細胞增殖轉化指數(shù)測定參照相關文獻操作進行6-7oSIgAJL-4和IFN-7參照北京華英生物技術研究所試劑盒說明書進行操作。1.5數(shù)據(jù)處理試驗結果以平均值士標準偏差表示，采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行LSD統(tǒng)計分析，以0.05表示差異顯著。2結果與分析2.1不同濃度GSLS對鴨血清HI效價的影響不同濃度CSLS對鴨血清抗AIV特異性HI效價的影響結果見圖1,可以看出，在28.35日齡時,與對照組相比，口服中劑

4、量GSLS能顯著提高鴨血清抗A1V特異性HI效價（P0.05）o2.2口服GSIS對不同劑量疫苗免疫鴨血清HI效價的影響口服GSLS對不同劑量疫苗免疫鴨血清抗AIV特異性H1效價的影響結果見圖2,可以看出，在免疫后2、3和4周時，與1份疫苗組相比,1份+GSLS組鴨血清抗AIV特異性HI效價顯著升高（P0.05）；0.5份+GSLS組與0.25份+GSLS組血清抗AIV特異性HI效價顯著下降（P0.05）。日齡（天）組間不同字母表示差異顯著（P0.05）,下同。圖1不同濃度GSLS對鴨血清抗AIV特異性H1效價的影響免疫后時間（周）1份圖0.5份+GSLS1份+GSLS目0.25份+GSLS爬

5、0.75份+GSLS圖2口服GSLS對不同劑量AIV疫苗免疫鴨血清抗AIV特異性III效價彩響2.3口服GSLS對鴨脾臟淋巴細胞增殖轉化的影響口服GSIJS對鴨脾臟淋巴細胞增殖轉化的影響結果見圖3,可以看出，1份+GSLS組鴨脾臟淋巳細胞體外受ConA刺激產生的淋巴細胞增殖能力顯著高于對照組（0.05）,而受LPS刺激產生的淋巴細胞增殖能力與對照組比較差異不顯著2.4口服GS1S對鴨細胞免疫功能的影響口服GSLS對鴨細胞免疫功能的影響結果見表1,可以看出，1份+GSLS組鴨牌淋巴細胞體外受ConA刺激后血清IFN含量，在免疫后2周和3周，均顯著高于1份免疫組（P（）.05）,在免疫后3周，顯著

6、高于1份免疫組（F0.05）表1口服GSLS對鴨細胞免疫功能的影響（昭/mL）縱邸子2周3周1份1份+GSIS】份1份+GSLS128.55*1.89b132.1512.70a138.083.25b141.8713.15a1L-4(TH2)173.68110.60a180.6210.99a181.282.18b187.892.69a注:組間不同字母表示差異顯著（P0.05）,下同。2.5口服GSLS對鴨免疫器官指數(shù)變化的影響口服GSLS對鴨免疫器官指數(shù)的影響結果見表2,可以看出，1份+GSLS組鴨脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著高于1份疫苗組（0.05）。表2口服GSIS對鴨免疫器官指數(shù)變化的影響處理

7、胸腺脾臟法氏囊1份4.88土0.67a0.870.14b1.660.13b1份+GSIS5.090.53a0.900.24a1.840.08a注：同列不同字母表示差異顯著（P0.05）；在免疫后2周，飲水口服GSLS組鴨腸黏膜SIgA含量顯著高于對照組（P圖4口服GSIS對鴨腸黏膜SIgA含:變化2.7口服GSLS對鴨抗氧化功能的影響口服GSLS對鴨抗氧化功能的影響結果見表3,可以看出，飲水口服中劑量GSLS組鴨血清MDA濃度(MDA含量)顯著降低(P0.05),SOD濃度(SOD活力)顯著升高(P0.05)。衰3口服GSLS對鴨抗氧化功能的影響指標對照組高劑量組中劑量組低劑量組MDA(nmo

8、l/mL)6.220.72a6.460.82a5.420.63b6.210.49aS0D(U/mL)78.722.02b83.08”.77b92.633.47a82.142.08b3討論與結論體液免疫應答是由機體B細胞產生的以抗體為主要效應分子的免疫應答,血清抗A1V特異性HI效價高低直接反映鴨抵抗流感病毒感染能力的高低。在家禽養(yǎng)殖業(yè)中，廣泛采用給易感動物接種AI疫苗刺激機體產生特異性抗病毒抗體來防控AI發(fā)生。本研究結果表明，飲水口服中劑量GSLS能顯著提高鴨血清抗AIV特異性HI效價,說明飲水口服GSLS能提高機體體液免疫應答，增強鴨群抗AIV感染能力，表現(xiàn)出良好的口服免疫增強作用。AI是一

9、種人畜共患傳染性疾病，對鴨等易感動物采用抗體合格率來判定A1疫苗免疫合格的主要評判指標，而臨床調研發(fā)現(xiàn),抗體合格率不高已成為導致AI頻發(fā)的重要因素之一。而本研究發(fā)現(xiàn)的口服GSLS能提高鴨群血清抗AIV特異性HI效價恰好證實其能提高抗體合格率，說明GSLS能作為一種免疫佐劑有效提高鴨群抗AIV感染能力。在獸用疫苗生產中，抗原劑量是影響疫苗免疫效果和關系疫苗生產成本的重要因素。低劑量抗原的疫苗不能誘導機體產生有效的免疫應答，血清特異性抗體效價低、抗體合格率低，仍然會造成傳染病的頻發(fā);反之，高劑量抗原的疫苗會導致疫苗生產成本大幅增加，間接導致養(yǎng)殖成本增加，降低養(yǎng)殖利潤免疫佐劑能增強機體對疫苗抗原的免

10、疫應答，具有降低疫苗抗原用量的效果，成為評價疫苗免疫佐劑的一個重要指標H。本研究結果表明,0.75份+GSLS組鴨血清抗AIV特異性HI效價與1份疫苗原組鴨血清抗A1V特異性HI效價相比，統(tǒng)計學顯示差異不顯著。疫苗抗原劑量減少0.25份,GSLS仍能刺激鴨群產生與1份疫苗抗原誘導機體產生相同水平的血清抗AIV特異性HI效價,說明飲水口服GSLS具有一定降低疫苗抗原用量的作用。淋巴細胞增殖指數(shù)是反映機體細胞免疫應答水平的指標之一。一般來說，淋巴細胞增殖轉化能力高，機體的特異性細胞免疫應答能力則強。本研究結果表明，口服GSE能顯著提高鴨脾臟淋巴細胞受ConA刺激后的淋巴細胞增殖轉化指數(shù)，說明口服G

11、SLS能提高鴨群的細胞免疫應答水平,從而增強機體抵御病毒感染能力。細胞因子是免疫細胞受抗原或絲裂原刺激后產生具有清除機體病原體、調節(jié)免疫應答過程等作用的效應分子,是機體細胞免疫應答的主要效應分子，也是動物機體抗病毒感染中的重要輔助因素之一E,因此細胞因子分泌水平的高低反映機體細胞免疫應答能力的強弱。本研究結果表明，飲水口服GSLS能顯著提高鴨脾臟淋巴細胞受ConA刺激后上清IFN-、（Thl）和IL-4（Th2）水平（P0.05）,說明飲水口服GSLS能增強機體的Thl和Th2型細胞免疫應答。而Thl和Th2型細胞免疫在抗病毒感染和調節(jié)體液免疫應答中均發(fā)揮一定作用，本研究結果證實GSLS是一種

12、比較理想的免疫佐劑。胸腺、脾臟和法氏囊是家禽的重要免疫器官，參與機體全身的體液免疫應答和細胞免疫應答，是動物免疫系統(tǒng)執(zhí)行免疫功能的重要組織結構，其發(fā)育狀況直接決定家禽機體免疫應答水平的強弱，免疫器官重量成為評價動物機體免疫應答水平的指標之一。免疫器官指數(shù)是免疫器官重量與其體重的比值,是衡量免疫器官發(fā)育狀況方法之一，成為表征機體免疫應答水平高低的指標之一。一般來說，免疫器官指數(shù)越大，說明機體的免疫應答水平越強。本研究結果表明，飲水口服GSLS顯著提高鴨群的脾臟和法氏囊指數(shù)（P0.05）,說明GSLS具有增強機體免疫功能的作用，與本研究發(fā)現(xiàn)的飲水口服GS任能提高鴨血清抗AIV特異性HI效價和細胞免

13、疫應答水平結果相一致，說明GSLS是一種有效的口服免疫佐劑。動物機體的呼吸道、消化道和泌尿生殖道的黏膜中分布有豐富的免疫細胞，這些免疫細胞蛆成了機體黏膜免疫系統(tǒng)機體的黏膜免疫系統(tǒng)是病原微生物突破機體防御的主要屏障，也是機體免疫應答的重要組成部分,機體的體液免疫、細胞免疫應答都有黏膜免疫系統(tǒng)的參與。因此,黏膜免疫功能成為評價免疫佐劑的主要指標之一。SIgA是腸道黏膜免疫的主要效應分子，成為評價腸道黏膜免疫功能的指標從本研究結果可以看出，飲水口服GSLS后鴨群腸道SIgA含量顯著高于對照組(P0.05),說明GSLS具有增強機體腸道黏膜免疫功能的作用，表現(xiàn)出定的黏膜免疫佐劑潛質。有研究發(fā)現(xiàn)，黏膜免

14、疫能激活機體黏膜免疫和系統(tǒng)免疫應答見。而本研究發(fā)現(xiàn)飲水口服GSLS組鴨群的體液免疫應答水平升高，該結果恰好說明飲水口服GS1S通過增強機體黏膜免疫功能來激活機體體液免疫應答，可能是GSLS發(fā)揮口服免疫佐劑作用的機制之一。此外,GSLS發(fā)揮免疫佐劑效應還可能與GSLS中皂忒單體的構效關系、皂忒對免疫細胞的刺激作用有一定關系。在正常狀態(tài)下，動物機體內氧化與抗氧化過程保持動態(tài)平衡，當機體遭受病原微生物等外源性或內源性有害剌激時，氧自由基產生速度遠超抗氧化系統(tǒng)的清除能力，過量氧自由基破壞正常組織和細胞功能,導致機體處于氧化應激狀態(tài)，從而誘發(fā)動物出現(xiàn)多種疾病或加重疾病發(fā)展MDA是細胞膜多不飽和脂肪酸過氧

15、化物的降解產物，能反映機體脂質過氧化程度高低，成為表征機體過氧化損傷的指標之一。SOD是機體內一種自由基防御酶，能清除機體內的過氧化物，能反映機體抗氧化程度高低，成為表征機體抗氧化能力高低的指標之一”句。本研究結果表明,飲水口服GS1S能顯著降低血清MDA水平，顯著提高血清SOD水平，說明CSLS能夠調節(jié)鴨群體內氧化與抗氧化動態(tài)平衡,維持鴨群腸道氧化還原狀態(tài)，保持生物膜完整性，與相關資料報道的人參具有抗氧化功能相一致有研究發(fā)現(xiàn)，脂質過氧化能損傷機體免疫功能】。本研究結果說明，GSLS可能通過提高機體的抗氧化功能來增強機體免疫功能，可能是GS【S發(fā)揮免疫佐劑作用的機制之一O參考文獻：1 叢立新.

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