微生物室室內(nèi)項目操作

1、微生物室室內(nèi)質(zhì)控沈陽醫(yī)學院奉天醫(yī)院檢驗科王宇微生物操作程序接種接種培養(yǎng)培養(yǎng)鑒定鑒定藥敏藥敏何謂臨床微生物學檢驗質(zhì)量控制? 臨床微生物學檢驗的質(zhì)量控制是保證細菌的直接涂片、培養(yǎng)、鑒定、藥敏試驗及血清學試驗等的準確性,避免因操作變化導(dǎo)致檢驗結(jié)果錯誤,造成誤診。當前臨床細菌檢驗主要是定性試驗,以手工操作為主,采用自動化儀器少,加之研究對象是活的細菌,會受各種因素影響,因此必須控制各個環(huán)節(jié)的可變因素,使細菌檢驗保持在穩(wěn)定水平。微生物學檢驗的室內(nèi)質(zhì)量控制主要包括哪幾個方面?1對細菌檢驗人員的要求;2操作手冊;3儀器設(shè)備的功能監(jiān)測;4培養(yǎng)基的質(zhì)量控制;5試劑、染色液及抗血清的質(zhì)量控制;6標本檢驗的質(zhì)量控制

2、;7標準菌株的來源和保存及室內(nèi)質(zhì)量的全面控制 臨床微生物室儀器設(shè)備的質(zhì)量控制標準? 臨床微生物室需要借助很多儀器設(shè)備對細菌進行培養(yǎng)、保存和鑒定,對這些儀器設(shè)備是否處于正常運行狀態(tài)需要進行質(zhì)量控制。 微生物室常用儀器質(zhì)量標準 設(shè)備 控制標準 允許范圍 高壓滅菌器 121 121 孵育箱 35 1 溫箱 37 土0.5 冰箱 4 土2 低溫冰箱 -20 5 CO2 5%-10% 10% 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制包括哪些方面?1配制記錄:應(yīng)注明培養(yǎng)基原料的開封日期、儲存條件、有效期、有否受潮結(jié)塊等。在配制每批培養(yǎng)基時應(yīng)作配制記錄,內(nèi)容包括培養(yǎng)基的名稱、數(shù)量、配方、滅菌、分裝、貼標簽、配制日期、有效期等;2培

3、養(yǎng)基外觀的檢查:觀察顏色和透明度是否正常,液體培養(yǎng)基是否澄清,固體培養(yǎng)基是否干裂及細菌生長,pH是否在規(guī)定的土0.2之內(nèi);3無菌試驗:凡以無菌手續(xù)分裝的培養(yǎng)基均應(yīng)在35培養(yǎng)24h,無菌生長者方可使用;4性能試驗:對所制備的各種培養(yǎng)基須用適當?shù)臉藴示赀M行預(yù)測,符合要求者方可使用。 常用固體培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標準有哪些? 培養(yǎng)基 質(zhì)控菌株 鑒定標準營養(yǎng)瓊脂 福氏志賀菌ATCC12022 中度到大量生長血瓊脂 金黃色葡萄球菌ATCC25923 中度到大量生長 化膿性鏈球菌ATCC19615 生長,-溶血 肺炎鏈球菌ATCC6305 生長,-溶血 大腸埃希菌ATCC25922 生長巧克力瓊脂 淋病奈瑟

4、菌ATCC43069 生長 腦膜炎奈瑟氏菌ATCC13090 生長 流感嗜血桿菌ATCC10211 生長麥康凱瓊脂 大腸埃希菌ATCC25922 生長,無色菌落 傷寒沙門菌ATCC14028 生長,紅色菌落SS瓊脂 傷寒沙門菌ATCC14028 生長,無色菌落 福氏志賀菌ATCC12022 生長,無色菌落沙保羅瓊脂 白色念珠菌ATCC10231 生長 大腸埃希菌ATCC25922 部分或完全抑制 臨床微生物實驗室所用試劑、染色液質(zhì)量控制的要求? (1)微生物實驗室所用各種試劑和染色液配制好后,應(yīng)標明試劑或染色液的名稱、配制日期、失效日期和配制者。 (2)每配一批試劑或染色液均應(yīng)做質(zhì)控試驗。包括

5、已知陽性和已知陰性標準菌株的測試符合要求方可使用。 (3)根據(jù)試劑或染色液本身的穩(wěn)定性和使用頻數(shù)定期核查核對,對較穩(wěn)定的試劑如靛基質(zhì)試劑應(yīng)在配制時及每周予以檢測核對,凡不穩(wěn)定的試劑如氧化酶試驗用的鹽酸四甲基(或二甲基)對苯二胺溶液或觸酶試驗用H202溶液,每天使用時均應(yīng)檢測,合格后才能使用。 (4)對不穩(wěn)定的試劑要注意保存方法,如三氯化鐵試劑避光保存,氧化酶試劑應(yīng)避光低溫保存。此外,觸酶試劑、血漿、各種生物制品應(yīng)置4冰箱保存。使用細菌診斷血清應(yīng)注意什么? 細菌診斷血清對鑒定確認細菌種類是一種很重要的試劑,其有效質(zhì)量保證是關(guān)鍵。為此,對使用的診斷血清應(yīng)有一套嚴格的管理措施。具體注意事項如下: (

6、1)用于診斷的各種抗血清購入時應(yīng)記錄收到日期。觀察抗血清的透明度與色澤,如有混濁或絮狀沉淀,表示已被污染不能使用。 (2)使用各種抗血清時都應(yīng)注意其效價和有效期,使用時先用已知陽性及陰性菌株檢查是否符合標準。 (3)使用期間每3個月用標準菌株檢測其敏感性及特異性。 (4)各種診斷血清均應(yīng)置冰箱中4保存。 標準菌株應(yīng)具備的條件及來源。 標準菌株必須是形態(tài)、染色反應(yīng)、生理生化及血清學特性典型而穩(wěn)定的菌株。實驗結(jié)果重復(fù)性好,極少發(fā)生變異,可用Bergey細菌鑒定手冊提供的典型特征來對照。 標準菌株可由專門機構(gòu)供應(yīng),如美國典型菌種保藏中心ATCC (American Type Culture Coll

7、ection)、我國衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所菌種保藏中心。 標準菌株的保存方法有幾種?各有什么特點? 標準菌株保存方法:為了保持標準菌株的最大活性,避免和減少細菌變異的機會可采用以下方法保存: (1)冷凍干燥法:應(yīng)用冷凍干燥機凍干菌種的方法是最理想的保存方法?？杀３只钚院蜕飳W特性不變,但手續(xù)繁瑣。菌種保存中心均采用此法。 (2)冰凍保存法:此法較簡單,將細菌混懸于脫纖維羊血或脫脂牛奶中,置液氮或-4冰箱保存,但細菌經(jīng)多次轉(zhuǎn)種,性狀可能發(fā)生變異。 (3)培養(yǎng)基保存法:是最簡易方便的方法,但易發(fā)生變異,有以下幾種方法:1普通瓊脂斜面保存法:適于一般細菌的保存,置4冰箱可保存1個月;2血瓊脂斜面保

8、存法:適于鏈球菌和肺炎鏈球菌,可半月移種一次。腦膜炎奈瑟氏菌應(yīng)用巧克力斜面,若加液體石蠟,可延長保存期。3雞蛋斜面保存法:適于保存含Vi抗原的沙門菌及其他含表面抗原的細菌。保存期1個月,加液體石蠟可保存3-6個月;4半固體穿刺法:穿刺培養(yǎng)基并加液體石蠟,置4冰箱可保存3-6個月。藥敏實驗的質(zhì)量控制有哪幾個環(huán)節(jié)? 藥敏實驗質(zhì)控的主要環(huán)節(jié)是: (1)培養(yǎng)基應(yīng)選擇水解酪蛋白瓊脂,即Muller-Hinton(MH)培養(yǎng)基。要求pH為7.2-7.4,平板厚度為4mm。每批新的培養(yǎng)基須用質(zhì)控菌株檢測,合格方可使用。 (2)抗菌藥物紙片含量準確、合理使用和保存。 (3)菌量以麥氏管校正。 (4)以質(zhì)控菌株

9、來控制測定方法的準確性和精密度。指出分別用于藥敏試驗質(zhì)控的細菌 金黃色葡萄球菌ATCC25923:用于葡萄球菌和腸球菌; 大腸埃希菌ATCC25922:用于腸桿菌科細菌和弧菌; 銅綠假單胞菌ATCC27853:用于銅綠假單胞菌和不動桿菌; 肺炎鏈球菌ATCC49619:用于肺炎鏈球菌和其他鏈球菌; 流感嗜血桿菌ATCC49274、ATCC49766:兩株分別用于流感嗜血桿菌不同的抗生素; 淋病奈瑟菌ATCC4926:用于淋病奈瑟菌; 大腸埃希菌ATCC35218:用于加酶抑制劑抗生素藥敏質(zhì)控。什么是抑菌環(huán)質(zhì)控范圍? 質(zhì)控菌株對定量含藥紙片顯示一定大小的抑菌環(huán),其環(huán)的大小用某數(shù)值范圍來表示,即質(zhì)

10、控結(jié)果可能出現(xiàn)的最小和最大抑菌環(huán)直徑。此界限范圍有95%的可信性。抑菌環(huán)不允許超過界限范圍中間值上下二個標準差。一組質(zhì)控結(jié)果的抑菌環(huán)均值應(yīng)接近上下限的中間值。影響藥敏試驗擴散法的因素有哪些? (1)培養(yǎng)基:1培養(yǎng)基的組成;2培養(yǎng)基的pH、厚度及保存。 (2)抗菌藥物紙片:1藥物紙片的制備;2藥物紙片的質(zhì)控;3藥物紙片的保存。 (3)菌液的濃度。 (4)紙片放入時間的控制。 (5)培養(yǎng)條件、溫度及時間。 (6)閱讀結(jié)果時,對不典型的結(jié)果必須重復(fù)試驗來確定,如乙型溶血性鏈球菌A群對青霉素G應(yīng)是敏感的,如是耐藥則為不典型結(jié)果。臨床微生物學檢驗室間質(zhì)量評價的檢查項目有哪些? (1)儀器設(shè)備檢查：1各類儀器操作卡;2高壓滅菌器的生物和化學控制指標;3溫度控制圖使用及校正記錄;4保養(yǎng)及維修;5清潔度;6損壞記錄。 (2)培養(yǎng)基、試劑、診斷血清的檢查： 1配置方法、步驟、及注意點,配制日期,性能試驗、配制者、標記及記錄;2培養(yǎng)基:外觀的清晰度、干燥、龜裂、pH是否符合要求,無菌試驗,使用標準菌株檢測結(jié)果的記錄,各類培養(yǎng)基的儲存條件及方法,培養(yǎng)基的有效期;3診斷血清:各類診斷血清的效價、有效期、定期使用監(jiān)控菌株試驗敏感性及特異性的結(jié)果和保存