結(jié)核病DNA疫苗的研究進(jìn)展.docx

1、肌內(nèi)注射免疫小鼠，然后用結(jié)核分枝桿菌攻擊，結(jié)果細(xì)胞免疫功能顯著增強(qiáng)，肝臟菌落形成單位顯著減少，表明DNA疫苗與常規(guī)卡介苗有相似的保護(hù)作用。從此.DNA疫苗成為防治結(jié)核病研究的新熱點(diǎn)。1998年隨若英國Sanger中心和法國Paeteur研究所科學(xué)家對結(jié)核分枝桿菌H37Rv株的全基因組測序工作的圓滿完成，為尋找結(jié)核DNA疫苗的研究提供了極好的機(jī)遇，0"o結(jié)核分枝結(jié)核病DNA疫苗的研究進(jìn)展張曉燕*，余琦L白雪娟'，梁艷'，李寧相（綜述），吳雪瓊）（審校）（I.中國人民解放軍第三O九醫(yī)院病理科，北京100091;2.鄭州金域臨床檢驗(yàn)中心.鄭州450000）中圖分類號:R52

2、文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1006-2084（20）4）11-J934-04doi：10.3%9/j.禎n.1006-2084.2014.11.006摘要：結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿蓄感染引起的世界性傳染病。我國是世界上緒核病發(fā)病率最高的22個(gè)國家之一，結(jié)核病患病人數(shù)僅次于印度，位居第二?？ń槊缡悄壳拔ㄒ粦?yīng)用于結(jié)核的預(yù)防性疫苗，但對于成人肺姑核的保護(hù)效力十分有限，再加上自身的不足以及外界因素的變化，研制新型的結(jié)核疫苗迫在眉蔑。該文將對緒核病傳統(tǒng)和新型的單價(jià)DNA疫苗的研究進(jìn)展進(jìn)行蹤迷。關(guān)鍵詞：卡介苗；結(jié)核?。籇NA疫苗ResearchDevelopmentofTuberculosisDNAVaccin

3、eZHANGXiao-yan1,2,YUQi',BAIXue-juan1,UANGYan1,UNing',WUXue-qiong】.(1.DepartmnniofPathology,PlA309/AHospital,Bfijing100091,China；2.ZhengzhouJinyuClinicalInspectionCenter,Zhengzhou450000,China)Abstract:Tuben*ulosis(TB)isaworldwideinfectiousdi#asecausedbyMycobacteriumtuberculosisinfection.China

4、isoneofthe22countrieswiththehighestincidenceofTBintheworld,andtheincidenceofthediseaserankedsecond,onlylowerthanIndia.BCGistheonlyappliedvaccineforTBcurrently,butitsprotectiveefficacyisverylimitedforadults,coupledwithilsownshortcomingsaswellaschangesofexternalfactors,itisparticularlyimportanttodevel

5、opnewTBvaccine.HerrreviewsthedevelopmentoftheconventionalandnewmonovalentDNAvaccine.Keywords:BacilleCalmette-Guerin；Tuberculosis；DNAVaccine全世界約20億人口感染結(jié)核分枝桿菌，每年結(jié)核病新增病例870萬，將近140萬人死于此病。隨著耐多藥結(jié)核病、廣泛耐藥結(jié)核病和人類免疫缺陷病毒感染患者的逐漸增多，結(jié)核病控制形勢越來越嚴(yán)峻。從1923年開始，卡介苗就已經(jīng)加入世界衛(wèi)生組織擴(kuò)大免疫計(jì)劃之中，至今卡介苗的接種給超過30億劑，并旦每年有將近1億的新生兒仍在接種此疫苗,

6、這使其成為臨床應(yīng)用最為廣泛的結(jié)核疫苗，也是目前唯-可用于人類預(yù)防結(jié)核病的疫苗。卡介苗可以有效預(yù)防新生兒及兒童嚴(yán)更的結(jié)核?。ㄈ缃Y(jié)核性腦膜炎和粟粒性結(jié)核），但對于成人肺結(jié)核疾病的預(yù)防效果非常弱，其免疫保護(hù)效率為0%80%心）。因此,研發(fā)新型的結(jié)核疫苗以替代或加強(qiáng)卡介苗勢在必行。1 DNA疫苗的優(yōu)點(diǎn)DNA疫苗是一種最常見的基因疫苗，將含編碼某種外源蛋白基因的質(zhì)粒DNA直接導(dǎo)入動(dòng)物組織機(jī)體內(nèi)，外源基因于體細(xì)胞中表達(dá)，其表達(dá)產(chǎn)物為病原體的有效抗原成分,可剌激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞,分別介導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答。DNA疫苗作為第三代疫苗，與第一代疫苗（減毒、火活疫苗）及第二代疫苗（亞單位

7、疫苗）相比，具有以下優(yōu)勢句：制備簡便，成本低廉；穩(wěn)定性及安全性更好；可將編碼不同抗原的基因構(gòu)建在同一個(gè)質(zhì)粒中或?qū)⒉煌目乖虻亩喾N重組質(zhì)粒聯(lián)合應(yīng)用,制備多價(jià)核酸疫苗;可持續(xù)誘導(dǎo)體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答;預(yù)防和治療作用兼顧。2 結(jié)核病DNA疫苗1994年英國Lowrie等首先報(bào)道將編碼麻風(fēng)分枝桿菌熱激蛋白（heatshockproteins,HSP）65基因的重組質(zhì)粒DNA基金項(xiàng)目：國家重大傳染病專項(xiàng)資助（2012ZX-10003-008-002）桿菌全基因組序列由4411529bp組成，包括4411個(gè)基因，具有潛在編碼能力的基因約有3977個(gè)，約占90.2%。結(jié)核DNA疫苗所插入的R的基因應(yīng)選擇具

8、有免疫保護(hù)性的抗原序列，從中篩選保護(hù)力強(qiáng)的作為候選基因。在這二十幾年中，有許多結(jié)核病DNA疫苗在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中獲得了較理想的效果，主要包括Ag85復(fù)合物、6x1。3早期分泌性抗原犯（6x10Daearlysecretoryantigenictarget,ESAT6）、結(jié)核分枝桿藏分泌蛋白64（mycobacteriumtuberculosissecretedproteins64,MPT64）、HSP65.HSP70等。也有一些新型的結(jié)核病DNA疫苗取得了一定的成果。2.1傳統(tǒng)的結(jié)核病DNA疫苗2.1.1Ag85復(fù)合物Ag85復(fù)合物是結(jié)核分枝桿菌和卡介苗中的主要分泌性蛋白，在結(jié)核分枝桿菌H37Rv株

9、中占分泌蛋白總鼠的30%，是一組重要的分枝桿菌分泌蛋白。Ag85復(fù)合物是由Ag85A、Ag85B、Ag85C三個(gè)亞單位組成，有研究表明Ag85A和Ag85B的可誘導(dǎo)較強(qiáng)的Thl免疫反應(yīng),干擾素”白細(xì)胞介素2和腫瘤壞死因子a顯著升高，而Ag85C卻無此效應(yīng)。Ag85A是一種纖維連接蛋白，相對分子質(zhì)量是32xIO',三者中分泌雖較高。Wang等'在研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中表明，Ag85ADNA疫苗能誘導(dǎo)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng):型細(xì)胞因子（干擾素）和白細(xì)胞介素2）的顯著分泌，并且在調(diào)節(jié)大量免疫細(xì)胞激活及誘導(dǎo)細(xì)胞毒性細(xì)胞在清除病毒或者細(xì)筋中發(fā)揮重要的作用，本實(shí)驗(yàn)室用生理鹽水、空載體組、微卡菌苗、Ag85

10、ADNA疫苗分別肌內(nèi)注射免疫小鼠，酶聯(lián)免疫吸附測定法測定產(chǎn)生的干擾素y高于其他組，白細(xì)胞介素4最低°Uang等通過構(gòu)建多重耐藥結(jié)核病菌株的小鼠模型，用不同組疫苗治療，最后單獨(dú)使用Ag85ADNA疫苗組與利福平或毗嗪酰胺聯(lián)合治療組降低了肺、脾的細(xì)茜載量，表明Ag85ADNA疫苗對多重耐藥結(jié)核病菌株也有一定的治療作用。Ag85B抗原具有較高的免疫原性，免疫接種Ag85B抗原,可以保護(hù)小鼠和豚鼠避免結(jié)核分枝桿菌引起的相關(guān)炎性反應(yīng)用Ag85BDNA疫苗免疫小鼠，結(jié)果顯示由CD?T細(xì)胞產(chǎn)生的干擾素）顯著增高，并且控制了巨噬細(xì)胞內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌的增長，對感染結(jié)核分枝桿曲的小鼠起到了保護(hù)性作用ES

11、AT-6.MPT64ESAT6和MPT64都是結(jié)核分枝桿菌早期分泌濾液蛋白中的主要成分，也是重要的T細(xì)胞抗原。Kamath等此將MPT64、Ag85B和ESAT-6這3種分泌性抗原基因分別導(dǎo)入PJW4303載體中，構(gòu)建成pJI23（DNA04）、pJI30（DNA85B）和pJlE6（DNA-E6）改組質(zhì)粒，并且以PBS、PJW4303載體和卡介苗作為對照組，分別肌內(nèi)注射免疫C57BI76J鼠3次，每3周1次，MPT64、Ag85BDNA疫苗組的小鼠脾淋巴細(xì)胞明顯增殖并產(chǎn)生高水平干擾素、，但不產(chǎn)生白細(xì)胞介素4,隨后第3次免疫小鼠后4周用結(jié)核分枝桿幽旬霧攻擊后,小鼠肺菌落計(jì)數(shù)顯示，Ag85BDN

12、A疫苗的保護(hù)力最強(qiáng)，其次為ESAT6DNA疫苗,MPT64DNA疫苗次之，但三者均比卡介苗的保護(hù)力差。吳雪瓊等用生理鹽水（A）、載體JW4303質(zhì)粒（B）和卡介苗（C）為對照.MPT64DNA疫苗組（D）和ESAT6DNA（E）疫苗組免疫小鼠，最后1次DNA免疫后3周腹腔內(nèi)注射結(jié)核分枝桿菌H37Rv株菌懸液，結(jié)核分枝桿菌攻擊5周后,B、C、D和E組脾菌落數(shù)均顯著少于A組;結(jié)核分枝桿菌攻擊10周后，從肺菌落數(shù)由低到高依次是C<D<E；肝菌落數(shù)由低到高依次是E<C<D；脾用落數(shù)由低到高依次是C<E,而D組卻平均高于對照組，表明這兩種DNA疫苗盡管都可誘導(dǎo)不同程度的保護(hù)

13、性，但保護(hù)力均不如卡介苗。2.1.2 HSP65、HSP70HSP65、HSP70都旭于HSP家族，在結(jié)構(gòu)上都是高度保守的蛋白質(zhì),并且在結(jié)核分枝桿菌感染過程中，是機(jī)體對抗其入侵的重要的免疫保護(hù)性抗原，它們既能增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答，又保持了分枝桿菌抗原特性與免疫佐劑的作用，并且還具有分子伴侶的作用,可協(xié)助表達(dá)蛋白質(zhì)的折疊，在結(jié)核分枝桿菌感染的后期發(fā)揮作用。Lowrie等最先報(bào)道以麻風(fēng)分枝桿菌HSP65質(zhì)粒DNA免疫小版，然后用結(jié)核分枝桿菌或卡介苗攻擊，結(jié)果顯示,HSP65質(zhì)粒DNA能顯著增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能，肝臟菌落計(jì)數(shù)顯著減少。Lowrie等頃首次將HSP65.HSP70DNA疫苗用于治療BALB/

14、c小鼠結(jié)核病模型中，實(shí)驗(yàn)以生理鹽水、空質(zhì)粒載體和卡介苗為對照組，用pcDNA3.0-HSP65和pcDNA3.0-HSP70重組質(zhì)粒免疫小鼠,HSP65、HSP70DNA疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的y干擾素水平顯著高于對照組，產(chǎn)生的白細(xì)胞介素4也顯著低于其他各組（P<0.05）；從小鼠的脾、肺菌落計(jì)數(shù)來看HSP65DNA疫苗組最低.HSP70DNA疫苗次之,先將結(jié)核小鼠經(jīng)化療12周后做菌落計(jì)數(shù),再用生理鹽水、空載體質(zhì)粒、HSP65DNA疫苗間隔2周免疫小鼠3次，第24周用地塞米松治療1次,8周后再做菌落計(jì)數(shù)，結(jié)果顯示,HSP65DNA疫苗可使小鼠結(jié)核病化療后脾和肺內(nèi)殘余的菌數(shù)顯著減少。Silva等渺用

15、HSP65DNA疫苗結(jié)合化療藥物治療BALB/c小覦結(jié)核病，1個(gè)月就可顯著減少肺和脾結(jié)核分枝桿菌載量,6個(gè)月后肺中未檢測到結(jié)核分枝桿菌;同時(shí)還發(fā)現(xiàn)HSP65聯(lián)合化療藥物治療對結(jié)核分枝桿菌敏感株H37Rv和耐藥株同樣有效。2.2新型的結(jié)核病DNA疫苗2.2.1Rv3407結(jié)核分枝桿菌RV34O7基因由300bp組成，編碼一個(gè)由99個(gè)氨基酸蛆成的蛋白質(zhì)，分子質(zhì)量為11.0096xl05oRv3407蛋白是結(jié)核分枝桿菌在生長過程中分泌到細(xì)胞外的分泌蛋白，主要在結(jié)核分枝桿菌休眠期表達(dá)，是一種潛伏相關(guān)抗原,此抗原受兩種復(fù)蘇促進(jìn)因子的調(diào)控Schuck等研究35個(gè)結(jié)核潛伏期相關(guān)抗原和ESAT6/培養(yǎng)濾液蛋白

16、融合抗原、純蛋白衍生物刺激活動(dòng)性肺結(jié)核患者和結(jié)核潛伏感染者T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的免疫反應(yīng)和細(xì)胞因子，結(jié)果顯示，其中7種結(jié)核潛伏期相關(guān)抗原（Rv34O7、Rvl733c、Rv2OO3、Rv2005c、Rv0140、Rvl009和Rv2450c）能刺激T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生較強(qiáng)的反應(yīng)，尤其是Rv3407特異的T淋巴細(xì)胞反應(yīng)在結(jié)核潛伏感染患者中可廣泛檢出，而在活動(dòng)性肺結(jié)核患者中未檢出，在個(gè)體中檢測Rv3407特異的T淋巴細(xì)胞干擾索y反應(yīng)可有效地鑒別結(jié)核病患者和結(jié)核潛伏感染者，其一致率達(dá)83%。Mollenkopf等'坦對結(jié)核分枝桿菌H37Rv和卡介苗菌株的蛋白質(zhì)采用比較蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)進(jìn)行分析,從而挑選表達(dá)

17、不同的策白質(zhì)基因作為候選的DNA疫苗（至少60個(gè)蛋白在兩菌株中表達(dá)不同i），鑒定了其中36個(gè)基因作為候選的結(jié)核分枝桿菌DNA疫苗，通過應(yīng)用氣溶膠法制備的小鼠結(jié)核模型進(jìn)一步研究其保護(hù)效力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)候選者Rv34O7DNA疫苗具有強(qiáng)而的免疫保護(hù)效力，可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生高水平的干擾素*此外，通過卡介苗初免、Rv3407DNA疫苗加強(qiáng)的異源性初免加強(qiáng)策略,其產(chǎn)生的抗結(jié)核感染的免疫保護(hù)效力優(yōu)于卡介苗單獨(dú)免疫。劉蓉娜等S以基因重組卡介苗AERAS422基因組為模板，通過聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增獲得長300bp的Rv3407基因片段,成功地構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒pVAXl-Rv3407,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞48h后，采用免疫熒

18、光法及蛋白質(zhì)印跡法檢測到Rv3407蛋白在293T細(xì)胞中有表達(dá)，表明該質(zhì)?？赏ㄟ^宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)表達(dá)蛋白抗原。Rv3407DNA疫苗能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答，為新型結(jié)核疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。22.2Rvl733cRvl733c是結(jié)核分枝桿菌在休眠期表達(dá)最比較高的一種保守的跨膜蛋白少。Gillian等【敏在南非、岡比亞和烏干達(dá)這三個(gè)結(jié)核高負(fù)擔(dān)國家中研究7個(gè)經(jīng)典的結(jié)核分枝桿菌重組蛋白抗原和51個(gè)休眠調(diào)節(jié)子編碼的結(jié)核分枝桿菌敢組蛋白抗原刺激人機(jī)體產(chǎn)生的免疫應(yīng)答情況，發(fā)現(xiàn)Rvl733c抗原是這三種人群中被識別頻率最高的一個(gè)潛伏相關(guān)蛋白抗原，并且應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測全血中分泌的干擾

19、素-y雖也較高。Bivas-Beniu等用PLGA-PEInP載人pVIJ.na-tPA質(zhì)粒載體中與Rvl733c連接，構(gòu)建了Rvl733cDNA疫苗,每間隔3周肌內(nèi)注射免疫BALB/c小鼠1次，共3次，第3次免疫后3周，再用Rvl733c蛋白加不完全弗氏佐劑進(jìn)行加強(qiáng)免疫一次，結(jié)果顯示,Rvl733cDNA疫苗組的脾淋巴細(xì)胞增殖顯著高于空載體組，干擾素7水平也顯著增加;并且在最后用蛋白加強(qiáng)免疫后脾淋巴細(xì)胞的增殖和干擾素7分泌都顯著增強(qiáng)。Roupie等將8個(gè)休眠調(diào)節(jié)子基因編碼的結(jié)核分枝桿菌抗原（Rvl733c、Rvl738、Rv2029c、Rv203lc、Rv2O32、Rv2626c、Rv262

20、7c和Rv2628)與DNA載體pVIJ.ns-tPA連接，分別肌內(nèi)注射免疫BALB/c和C57BI76J小鼠，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測Rv】733cDNA疫苗組小鼠血清中可產(chǎn)生較高水平的免疫球蛋白G抗體，但脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中分泌的型細(xì)胞因子千擾素)和白細(xì)胞介素2較少。Rvl733cDNA疫苗能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生較強(qiáng)的體液免疫應(yīng)答，而Thl瑕細(xì)胞免疫應(yīng)答的結(jié)果尚不一致，是否可作為新型結(jié)核疫苗的侯選者尚需進(jìn)一步研究。2.2.3Rv3872RD1(regionofdifference-!)區(qū)基因僅存在于致病性結(jié)核分枝桿痢基因組中，而在卡介菌中缺失。RD1區(qū)全長9.5kb,有9個(gè)開放讀碼框(Rv3871R

21、v3879c),共編碼9個(gè)蛋白質(zhì)，其中Rv3872編碼蛋白為PE35,是PE蛋白家族成員之一。PE蛋白質(zhì)家族是一個(gè)富含甘氨酸的蛋白質(zhì)家族，該家族蛋白質(zhì)在結(jié)核抗原變異中扮演著非常重要的角色。Hanif等:割將PE35基因克隆到DNA疫苗載體pUMVC6中，構(gòu)建成pUMVC6-PE35頁組質(zhì)粒，肌內(nèi)注射BALB/c小鼠，3周后最后一次免疫接種，將小鼠處死，進(jìn)行脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，結(jié)果顯示，PE35DNA疫苗組的脾淋巴細(xì)胞顯著增殖，并旦分泌大量型細(xì)胞因子干擾素、，而Th2型細(xì)胞因子白細(xì)胞介素5和抗炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素10未檢測到,此外，他們又合成6個(gè)不同的PE35多肽(P1-P6),對PE35T細(xì)胞表位

22、進(jìn)行了預(yù)測,結(jié)果顯示，多肽Pl、P3、P4和P5均可刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖，其中多肽P4(VSAQAATAFTSEGIQL-LASNAQD)脾淋巴細(xì)胞增殖最顯著；多肽P1.P3和P6可剌激小鼠脾淋巴細(xì)胞產(chǎn)生干擾素Y，其中多肽P6(GEAVQDVAR-TYSQIDDGAAGVFAE)產(chǎn)生的千擾素y最多;所有多肽剌激小鼠脾淋巴細(xì)胞均未檢測到白細(xì)胞介素5和白細(xì)胞介素10的分泌。這些結(jié)果表明,PE35DNA疫苗主要誘導(dǎo)Thl迥免疫,PE35不同的抗原表位可誘導(dǎo)產(chǎn)生不同強(qiáng)度的T細(xì)胞反應(yīng),PE35DNA疫苗可能作為一種新的結(jié)核病候選疫苗。3小結(jié)隨著耐多藥結(jié)核病及廣泛耐藥結(jié)核病患者逐漸增多，再加上高病死率

23、的人類免疫缺陷病毒感染，因此選擇一種有效地控制和預(yù)防結(jié)核病發(fā)生的具有安全、經(jīng)濟(jì)、高效的結(jié)核疫苗就顯得至關(guān)重要。雖然結(jié)核DNA疫苗以其無比的優(yōu)勢已成為研究熱點(diǎn)，包括多價(jià)的DNA疫苗、卡介苗初免DNA疫苗加強(qiáng)免疫、DNA疫苗與細(xì)胞因子聯(lián)合免疫等，但其仍存在一些不可避免的問題，如抗原基因的選擇、載體的構(gòu)建、免疫途徑和免疫程序的選擇、免疫佐劑的使用、安全性、免疫耐受性等。隨著對結(jié)核桿菌致病的免疫機(jī)制的進(jìn)一步研究和闡述，基因組學(xué)和蜀白質(zhì)組學(xué)研究的深入，相信這些何題都將解決,DNA疫苗會以其他疫苗無可比擬的優(yōu)勢給結(jié)核患者帶來希望。參考文獻(xiàn)1WorldHealthOrganization(WHO)R.Glo

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32、al.TherapyoftuberculosisinmicebyDNAvaccinationJ.Nature,1999,400(6741)；269-271.L19SilvaCI.,BonatoVL,Coelho-CasteloAA,etal.ImmunotherapywithplasmidDNAencodingmycobacteria)HSP65inassociationwithchemotherapyisamorerapidandefficientformoftreatmentfortuberculosisinmiceJj.GeneTher.2005,12(3)：281-287.20jKan

33、aBD,GordhanBG,DowningKJ,etal.TheresuscitationpromotingfactorsofMycobacteriumtuberculosisarcrequiredforvirulenceandresuscitationfromdormancybutarecollectivelydispensableforgrowthinvitroJ.MolMicrobiol,2008,67(3)：672-684.21SchuckSD,MuellerH,KunitzF,eto/.IdentificationofT-Cellantigensspecificforlatentmy

34、cobacteriumtuberculosisinfectionJ.PLOSOne,2009,4(5)：e5590.22MollenkopfHJ,GrodeL,MattowJ,etal.Applicationofmycobacterialproteomicstovaccinedesign:improvedprotectionbyMycobac-teriumbovi»BCGprime-Rv3407DNAboostvaccinationagainsttuberculosisJ.InfectImmun,2004,72(11)：6471-6479.(23MattowJJungblutPR.S

35、chaibleUE.eeal.IdentificationofproteinsfromMycobacteriumtuberculosismissinginattenuatedMycobacteriumbovisBCGstrainsJ.Electrophoresis,2001,22(14)：2936-2946.24劉蓉娜，方習(xí)時(shí)，張愛華，等.結(jié)核DNA疫苗質(zhì)粒pVAXI-Rv3407的構(gòu)建及體外表達(dá)J.中國生物制品學(xué)雜志,2012,25(2):137-139,147.25 張祗，柏銀蘭，康健，等.結(jié)核分枝桿菌持續(xù)感染期抗原Rvl733c的表達(dá)、純化和鑒定J.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2012,12(10

36、):1868-1871.26 BlackGF.lliieiBA,OtaM0,«al.ImmunogenicityofnovelDosRregulon-encodedcandidateantigensofMycobacteriumtuberculosisinthreehigh-burdenpopulationsinAfricaJ.ClinVaccineImmunol,2009,16(8)：1203-1212.27 Bivas-BenitaM,LinMY,BalSM,elal.PulmonaiydeliveryofDNAencodingMycobacteriumtuberculosisl

37、atencyantigenRvl733cassociatedtoPLGA-PEInanoparticlesenhancesTcellresponsesinaDNAprime/proteinboostvaccinationregimeninmiceJ.Vaccine,2009,27(30)：4010-4017.28 RoupieV,RomanoM,ZhangL,«al.Immunogenicityofeightdormancyregulon-encodedproteinsofMycobacteriumtuberculosisinDNA-vaccinaledandtubercuiosis

38、-infectedmicefJ.InfectImmun,2007,75(2):941-949.29 HanifSN,A1-AttiyahR,MustafaAS.CellularimmuneresponsesinmiceinducedbyM.tuberculosisPE35-DNAvaccineconstructJ.ScandJImmunol,2011,74(6)：554-56O.收稿日期：2O13-O5-27修回日期:2013X)9-04編輯：中重梅多態(tài)性有一定關(guān)系。TLR4是在1997年發(fā)現(xiàn)的一種Toll同源體，主要表達(dá)于免疫細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞以及樹突狀細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞、脂

39、肪細(xì)胞、腸上皮細(xì)胞亦有表達(dá)。TLR4外源性配體主要來自于病原微生物，如脂多糖;而內(nèi)源性配體來自宿主細(xì)胞在機(jī)體應(yīng)激或組織損傷時(shí)釋放的成分，如熱激蛋白、細(xì)胞外基質(zhì)降解成分等。TLR4在識別配體后發(fā)生Toll樣受體4與原發(fā)性高血壓的相關(guān)研究李愛玲(綜述)，修瑞娟，審校)(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院微律環(huán)研究所，北京100005)中圖分類號:R544.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1006-2084(2014)11-1937-03doi；10.3969/j.iMn.1006-2084.2014.11.007摘要:Toll樣受體(TLR)4是戴近發(fā)現(xiàn)的模式識別受體之一，其介導(dǎo)的先天及適應(yīng)性免疫反應(yīng)參與高血壓的慢性血管炎

40、性反應(yīng)。基礎(chǔ)性研究發(fā)現(xiàn),TLR4可能通過核因子kB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑調(diào)控多種炎性分子的表達(dá)，參與內(nèi)皮細(xì)胞炎性損傷、血管重墮等病理過程，與高血壓進(jìn)展及商血壓性心肌肥厚密切相關(guān)，有關(guān)該方面研究將為高血壓的臨床防治提供全新的思路。關(guān)詞:Toll樣受體；炎癥；高血壓；內(nèi)皮胡施TLR4andEssentialHypertensionUAi-ling,XIURuijuan.(InstiiuieofMicrocirculation.ChineeAcademycfMedicalSciences,Beijing】00005,China)Abstract:Toll-likereceptor4(TLR4),oneofthepatternrecognitionreceptora,isinvolvedinthechronicvascularinflammationofhypertensionbymediatingtheinnateandadaptiveimmunereaction.BasicresearchesindicateTLR4miitregulatet