全國藥品微生物檢驗重點實驗室建設(shè)介紹課件

1、2010.92010.9山東省藥品檢驗所時間事件結(jié)果2006年5月“齊二藥”亮菌甲素及其全線產(chǎn)品調(diào)查170批產(chǎn)品無菌檢查合格，證明與微生物污染無關(guān)2006年7月“欣弗事件”微生物污染2007年1月“克林霉素磷酸酯”及“阿奇霉素”擴大調(diào)查克林107批7批無菌不合格；阿奇 90批3批無菌不格。取締兩個品種的熱力滅菌大體積液體制劑生產(chǎn)。2007年4月注射用甲氨喋呤及時排除微生物污染2008年10月“刺五加事件”及全線產(chǎn)品調(diào)查微生物污染2008年11月“茵梔黃事件”與微生物污染無關(guān)2009年“雙黃連注射液”有無微生物污染？山東省藥品檢驗所2009年4月23日中檢所會同北京、天津、上海、黑龍江、江蘇、浙

2、江、廣州、四川、總后等九家藥檢所的主管業(yè)務所長及微生物檢驗部門負責人在浙江省杭州市首次對藥品檢驗所微生物檢驗重點實驗室的建設(shè)問題開展研討。 增強系統(tǒng)能力應對應急檢驗山東省藥品檢驗所2009年4月28日，中檢藥函2009809號全國藥檢所微生物檢驗重點實驗室建設(shè)研討會會議紀要；2009年5月10日，中檢藥函20091302號全國藥檢所微生物重點實驗室建設(shè)參考原則（草案）；2009年10月30日，中檢藥函20092028號微生物重點實驗室工作安排；2009年11月20日，中檢藥函20092132號關(guān)于參加藥品微生物實驗室能力驗證的通知；2009年12月25日，中檢函20092355號關(guān)于開展協(xié)同檢

3、驗模擬演練的通知；2010年2月2日，中檢藥函2010183號關(guān)于藥品微生物陽性檢出菌分析能力驗證匯總報告的函；2010年3月26日，中檢藥函2010562號關(guān)于參加藥品微生物實驗室能力驗證總結(jié)會議的通知。 山東省藥品檢驗所環(huán)境保證環(huán)境保證培養(yǎng)基保證培養(yǎng)基保證無菌性檢查無菌性檢查適用性檢查適用性檢查有效的方法有效的方法方法驗證方法驗證SOP操作操作有效的結(jié)果有效的結(jié)果可靠的結(jié)論可靠的結(jié)論結(jié)果判斷結(jié)果判斷山東省藥品檢驗所如何快速完成檢驗？如何快速完成檢驗？如何準確下結(jié)論？如何準確下結(jié)論？應急檢驗體系建設(shè)應急檢驗體系建設(shè)陽性檢出菌的綜合陽性檢出菌的綜合分析判斷能力建設(shè)分析判斷能力建設(shè)山東省藥品檢驗

4、所一、重點實驗建設(shè)的分階段目標 1、2009年內(nèi)完成第一階段目標，保證檢驗結(jié)果的準確性。 2、2010年內(nèi)完成第二階段目標，開展分子生物學工作，具備微生物追蹤溯源能力。山東省藥品檢驗所二、完成第一階段任務實驗室條件標準 1、人員標準（1）、應急檢驗組織保障 （2）、人員要求：一般實驗操作人員，中級實驗人員，高級實驗人員（3）、人員培訓 山東省藥品檢驗所二、完成第一階段任務實驗室條件標準 2、硬件標準（1）、實驗室標準：核心實驗區(qū)，緩沖輔助區(qū)，PII級生物安全區(qū)，一般實驗及準備區(qū) （2）、設(shè)備配置要求：檢驗操作設(shè)備，監(jiān)控設(shè)備，培養(yǎng)設(shè)備，鑒定分析設(shè)備，低溫保存設(shè)備（3）、消耗性實驗器材保障：常用器

5、皿，消毒劑及隔離器材，一次性實驗器材，培養(yǎng)基 山東省藥品檢驗所二、完成第一階段任務實驗室條件標準 3、軟件標準（1）、應急檢驗方案（2）、實驗室安全保障措施（3）、實驗室管理SOP （4）、設(shè)備操作SOP （5）、檢驗程序SOP山東省藥品檢驗所 編寫說明及批準頁 1 實驗室概況 1.1 實驗室簡介 1.2 實驗室通訊資料 1.3 實驗室認可項目/參數(shù)表 1.4 實驗室平面圖及功能區(qū)域 1.5 儀器設(shè)備總覽 1.6 常備試劑耗材一覽表 1.7 實驗室發(fā)展目標山東省藥品檢驗所2 管理規(guī)范2.1 安全管理2.2 業(yè)務流程2.3 人員管理2.4 樣品管理3 標準操作規(guī)程3.1 檢驗工作SOP3.2 儀

6、器操作SOP3.3 實驗記錄SOP4 實驗室保障4.1 實驗室設(shè)施、設(shè)備及消耗品供應商確定原則4.2 實驗室設(shè)施服務商4.3 實驗設(shè)備供應商4.4 實驗室消耗品供應商三、完成第二階段任務實驗室條件標準 完成第二階段任務實驗室條件主要是在第一階段實驗條件的基礎(chǔ)上增強對疑難微生物的鑒定能力，重點是建立分子生物學實驗室。 1、人員 2、硬件 3、軟件 山東省藥品檢驗所應急檢驗體系建設(shè)應急檢驗體系建設(shè)2009年12月25日，中檢函20092355號關(guān)于開展協(xié)同檢驗模擬演練的通知中檢所于2007年8月建立了微生物應急檢驗方案（NICPBP-JY-SOP-ACWSW-001藥品微生物檢查應急檢驗規(guī)程） 山

7、東省藥品檢驗所1、組織保障、組織保障 設(shè)立專門的藥品微生物檢查應急處理小組，負責組織實施藥品微生設(shè)立專門的藥品微生物檢查應急處理小組，負責組織實施藥品微生物檢查應急事件。物檢查應急事件。2、應急準備、應急準備 保證微生物檢查中所需的各種實驗條件時時處于有效、合格的狀態(tài)，保證微生物檢查中所需的各種實驗條件時時處于有效、合格的狀態(tài)，做到樣品隨到隨檢，是加快應急事件反應速度的關(guān)鍵。無菌室及設(shè)做到樣品隨到隨檢，是加快應急事件反應速度的關(guān)鍵。無菌室及設(shè)施運行正常；建立實驗室日常監(jiān)測菌株庫；無菌室小型設(shè)備、實驗施運行正常；建立實驗室日常監(jiān)測菌株庫；無菌室小型設(shè)備、實驗器材、培養(yǎng)基、沖洗液等齊備，器材、培養(yǎng)

8、基、沖洗液等齊備，24小時隨時處于可應用狀態(tài)；兩小時隨時處于可應用狀態(tài)；兩個雙人實驗小組，在不同實驗區(qū)域平行同步實驗個雙人實驗小組，在不同實驗區(qū)域平行同步實驗。山東省藥品檢驗所應急檢驗專用應急檢驗專用滅菌氣密包裝滅菌氣密包裝應急檢驗用一次性薄膜過濾培養(yǎng)器原位輻射劑量原位輻射劑量化學指示劑化學指示劑內(nèi)含式生內(nèi)含式生物指示劑物指示劑山東省藥品檢驗所 理化分析（參考化學對照品建立的某些原則） 生物學評價（MPN、回收率、生長曲線、生態(tài)學）硫乙醇酸鹽流體對照培養(yǎng)基改良馬丁對照培養(yǎng)基山東省藥品檢驗所3 、樣品確認、樣品確認按程序確認樣品的來源、信息和完整性，收集背景資料。按程序確認樣品的來源、信息和完整

9、性，收集背景資料。4 、方法確定、方法確定合理的檢驗方法是結(jié)果判斷的保證。在處理緊急任務時，可以通過下合理的檢驗方法是結(jié)果判斷的保證。在處理緊急任務時，可以通過下面面3個方式快速確定檢驗方法，加快檢驗進程：個方式快速確定檢驗方法，加快檢驗進程：（1）、聯(lián)系其他先期介入該緊急事件的單位和人員，或者從本實驗室）、聯(lián)系其他先期介入該緊急事件的單位和人員，或者從本實驗室的檔案中尋找成熟的檢驗方法，以陽性對照的方式驗證，快速開展的檔案中尋找成熟的檢驗方法，以陽性對照的方式驗證，快速開展檢驗工作；檢驗工作；（2）、采用預實驗快速確立檢驗方法：以金黃色葡萄球菌和白色念珠）、采用預實驗快速確立檢驗方法：以金黃

10、色葡萄球菌和白色念珠菌進行測試，若菌進行測試，若24小時后金黃色葡萄球菌管長菌、小時后金黃色葡萄球菌管長菌、48小時候后白小時候后白色念珠菌管長菌，表明方法可行。色念珠菌管長菌，表明方法可行。（3）、采用薄膜過濾法去除抑菌活性，無菌檢查按）、采用薄膜過濾法去除抑菌活性，無菌檢查按500ml/膜沖洗，在膜沖洗，在開展檢驗的同時進行陽性對照實驗。開展檢驗的同時進行陽性對照實驗。具體實施根據(jù)方式（具體實施根據(jù)方式（1）、（）、（2）、（）、（3）的順序啟動。）的順序啟動。山東省藥品檢驗所5 5、 實驗要點實驗要點（1 1）、確定無菌檢查實驗方法；）、確定無菌檢查實驗方法；（2 2）、清潔無菌室，并對

11、無菌室中的浮游菌、表面菌進行監(jiān)測；）、清潔無菌室，并對無菌室中的浮游菌、表面菌進行監(jiān)測；（3 3）、按無菌操作規(guī)程著裝、進場、消毒，監(jiān)控手部所帶入的微生物；）、按無菌操作規(guī)程著裝、進場、消毒，監(jiān)控手部所帶入的微生物；（4 4）、樣品外表面消毒，監(jiān)控樣品取樣口可能污染的微生物；）、樣品外表面消毒，監(jiān)控樣品取樣口可能污染的微生物；（5 5）、實驗用到的器材、培養(yǎng)基、沖洗液等分別進行陰性對照實驗；）、實驗用到的器材、培養(yǎng)基、沖洗液等分別進行陰性對照實驗；（6 6）、如果樣品量允許，設(shè)置對應的陽性對照組；）、如果樣品量允許，設(shè)置對應的陽性對照組；（7 7）、結(jié)果觀察：自培養(yǎng)開始，應逐日觀察諸培養(yǎng)管的渾

12、濁情況，如發(fā)）、結(jié)果觀察：自培養(yǎng)開始，應逐日觀察諸培養(yǎng)管的渾濁情況，如發(fā)現(xiàn)任何一管的培養(yǎng)物變渾濁，現(xiàn)任何一管的培養(yǎng)物變渾濁，1 1）立即轉(zhuǎn)接）立即轉(zhuǎn)接2ml2ml該培養(yǎng)物至相同的培養(yǎng)該培養(yǎng)物至相同的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)；基中繼續(xù)培養(yǎng)；2 2）?。┤? 5支凍存管，每管分裝支凍存管，每管分裝1ml1ml渾濁培養(yǎng)物，渾濁培養(yǎng)物，-80-80保保存；存；3 3）取渾濁培養(yǎng)物在）取渾濁培養(yǎng)物在TSATSA平板上劃線，分離污染微生物；平板上劃線，分離污染微生物；4 4）如果發(fā)）如果發(fā)現(xiàn)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)管變渾濁，還應增加血平板劃線，并在厭氧條現(xiàn)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)管變渾濁，還應增加血平板劃線，并在厭氧條件下培

13、養(yǎng)分離厭氧菌。由平板分離到的菌落應進一步鑒定分析，并逐件下培養(yǎng)分離厭氧菌。由平板分離到的菌落應進一步鑒定分析，并逐一保藏。一保藏。山東省藥品檢驗所6、結(jié)果判斷與報告、結(jié)果判斷與報告（1）、如果陽性對照管）、如果陽性對照管48小時仍無細菌生長，提示樣品具有較強調(diào)抑小時仍無細菌生長，提示樣品具有較強調(diào)抑菌作用，應立即重新實驗，并改進去除樣品抑菌活性的方法；菌作用，應立即重新實驗，并改進去除樣品抑菌活性的方法；（2）、如果所有陰性對照均無菌生長，陽性對照生長正常，供試品管）、如果所有陰性對照均無菌生長，陽性對照生長正常，供試品管培養(yǎng)培養(yǎng)14天后不發(fā)生渾濁，可判無菌檢查合格；天后不發(fā)生渾濁，可判無菌檢

14、查合格；（3）、如果個別陰性對照管有菌生長，陽性對照管生長正常，供試品）、如果個別陰性對照管有菌生長，陽性對照管生長正常，供試品管培養(yǎng)管培養(yǎng)14天后不發(fā)生渾濁，可判無菌檢查合格，但應對陰性對照管天后不發(fā)生渾濁，可判無菌檢查合格，但應對陰性對照管中的細菌進行分離鑒定，查找污染原因；中的細菌進行分離鑒定，查找污染原因；（4）、任何情況下供試品管長菌，并經(jīng)分離、鑒定，確定該菌株與實）、任何情況下供試品管長菌，并經(jīng)分離、鑒定，確定該菌株與實驗室及實驗過程監(jiān)控各環(huán)節(jié)檢測到的細菌沒有相似性，可判無菌檢驗室及實驗過程監(jiān)控各環(huán)節(jié)檢測到的細菌沒有相似性，可判無菌檢查不符合規(guī)定；查不符合規(guī)定；（5）、如果出現(xiàn)供試

15、品管長菌，但從該培養(yǎng)物中分離出的菌株經(jīng)鑒定）、如果出現(xiàn)供試品管長菌，但從該培養(yǎng)物中分離出的菌株經(jīng)鑒定與實驗室或?qū)嶒炦^程監(jiān)控各環(huán)節(jié)檢測到的細菌有一定的相似性，或與實驗室或?qū)嶒炦^程監(jiān)控各環(huán)節(jié)檢測到的細菌有一定的相似性，或回顧實驗過程發(fā)現(xiàn)實驗存在明顯疏漏，樣品在實驗中存在的污染可回顧實驗過程發(fā)現(xiàn)實驗存在明顯疏漏，樣品在實驗中存在的污染可能，則判此次無菌檢查實驗無效，應按藥典規(guī)定盡快重新實驗。能，則判此次無菌檢查實驗無效，應按藥典規(guī)定盡快重新實驗。（6）、無菌檢查重試實驗結(jié)果判斷同上述（）、無菌檢查重試實驗結(jié)果判斷同上述（1）（）（5）。）。山東省藥品檢驗所如何快速完成檢驗？如何快速完成檢驗？如何準確

16、下結(jié)論？如何準確下結(jié)論？應急檢驗體系建設(shè)應急檢驗體系建設(shè)陽性檢出菌的綜合陽性檢出菌的綜合分析判斷能力建設(shè)分析判斷能力建設(shè)山東省藥品檢驗所 以國內(nèi)某微生物檢驗實驗室近期的一次實驗室污染實例，該實驗室在對不同產(chǎn)地的兩個品種進行無菌檢查時，短期內(nèi)多次出現(xiàn)無菌陽性結(jié)果，對這些陽性培養(yǎng)結(jié)果進行分離，得到18株藥品檢出陽性菌。要求：中檢所提供18株藥品陽性檢出菌，均為凍存管分裝的TSA半固體培養(yǎng)物，編號為118（見管壁標記），各編號注釋見下表1-1。各所收到菌株后進行轉(zhuǎn)種、培養(yǎng)，并通過鑒定或比較分析鑒定或比較分析等方法技術(shù)手段判斷判斷無菌檢查出現(xiàn)的陽性結(jié)果確系樣品污染確系樣品污染或系實驗過程污染或系實驗過

17、程污染。山東省藥品檢驗所 2010年4月2日，在上海召開了藥品微生物實驗室能力驗證總結(jié)會議。山東省藥品檢驗所對于藥品微生物檢驗重點實驗的建設(shè)工作，一年來重點促進了三項工作的發(fā)展：1、實驗室裝備水平大力提高；2、應急檢驗能力及陽性檢出結(jié)果的分析意識和能力加強；3、重點微生物實驗室建設(shè)理念逐漸深入人心 山東省藥品檢驗所在重點實驗室建設(shè)之初，各所微生物檢驗設(shè)備整體較差缺乏大型的、較為先進的設(shè)備，2009年4月調(diào)查各所的主要設(shè)備表明，僅有上海、廣州、天津所的條件稍好一些。山東省藥品檢驗所20092009年年4 4月調(diào)查各所的主要設(shè)備月調(diào)查各所的主要設(shè)備生物安全柜生物安全柜超凈工作臺超凈工作臺百級層百級

18、層流流無菌隔無菌隔離器離器培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱厭氧培厭氧培養(yǎng)系統(tǒng)養(yǎng)系統(tǒng)COCO2 2培養(yǎng)培養(yǎng)箱箱其他其他黑龍江黑龍江1 1/ / / /6 61 1/ /自動臺式滅菌器自動臺式滅菌器北京北京3 37 7/ /1 11515/ /1 1酶標儀酶標儀上海上海10108 8/ / /16161 12 21 1、無菌操作手套箱、無菌操作手套箱2 2、梅里埃鑒定系統(tǒng)、梅里埃鑒定系統(tǒng)3 3、酶標儀（無菌室）、酶標儀（無菌室）江蘇江蘇1 19 9浙江浙江1 11 13 3/ /14141 1/ / /四川四川4 4/ /7 7/ /1 1總后總后/ /6 6/ / /7 7/ / /廣州廣州1 11 1/ /1 1

19、、APIAPI鑒定系統(tǒng)鑒定系統(tǒng)2 2、2 2臺微粒監(jiān)測儀臺微粒監(jiān)測儀天津天津1 14 4/ / / /厭氧袋厭氧袋/ /1 1、APIAPI鑒定系統(tǒng)鑒定系統(tǒng)2 2、塵埃粒子計數(shù)儀、塵埃粒子計數(shù)儀山東省藥品檢驗所經(jīng)過不到一年的時間，各所基本具備了從形態(tài)分析、生化鑒別、相似性分析、甚至分子生物學多層次的技術(shù)能力，基本達到重點實驗2009年的建設(shè)目標，可以在未來的應急檢驗中發(fā)揮積極作用。山東省藥品檢驗所單位單位形態(tài)分析形態(tài)分析生化鑒定生化鑒定相似性分析相似性分析分子生物學技術(shù)分子生物學技術(shù)上海所上海所顯微數(shù)碼成像顯微數(shù)碼成像APIAPI實驗條、梅里埃實驗條、梅里埃VITEK2VITEK2Bruker

20、 Tensor27Bruker Tensor2716sRNA16sRNA、杜邦、杜邦RiboprinterRiboprinter天津所天津所顯微數(shù)碼成像顯微數(shù)碼成像APIAPI實驗條、梅里埃實驗條、梅里埃VITEK2VITEK2Bruker Tensor27Bruker Tensor27杜邦杜邦RiboprinterRiboprinter（外包）（外包）浙江所浙江所顯微數(shù)碼成像顯微數(shù)碼成像梅里埃梅里埃VITEK2VITEK2Bruker Tensor27Bruker Tensor27分子生物學（外包）分子生物學（外包）江蘇所江蘇所顯微數(shù)碼成像顯微數(shù)碼成像梅里埃梅里埃VITEK2VITEK2杜邦

21、杜邦RiboprinterRiboprinter，MicroseqIDMicroseqID廣州所廣州所顯微數(shù)碼成像顯微數(shù)碼成像APIAPI實驗條、梅里埃實驗條、梅里埃VITEK2VITEK2杜邦杜邦RiboprinterRiboprinter（外包）（外包）黑龍江黑龍江顯微數(shù)碼成像顯微數(shù)碼成像梅里埃梅里埃VITEK2VITEK2（外包）（外包）Bruker Tensor27Bruker Tensor27北京所北京所顯微數(shù)碼成像顯微數(shù)碼成像APIAPI實驗條實驗條Bruker Tensor27Bruker Tensor27總后所總后所顯微數(shù)碼成像顯微數(shù)碼成像APIAPI實驗條實驗條Bruker Tensor27Bruker Tensor27四川所四川所顯微數(shù)碼成像顯微數(shù)碼成像APIAPI實驗條實驗條梅里埃梅里埃VITEK2VITEK2（外包）（外包）山東所山東所顯微數(shù)碼成像顯微數(shù)碼成像APIAPI實驗條實驗條山東省藥品檢驗所基本具備應急檢驗能力。很多單位逐漸形成了對陽性結(jié)果分離菌株進行形態(tài)觀察、生化鑒定、遺傳信息分析（16sRNA測序、DNA脈沖場電泳分析等）、FTIR相似性分析等多層次的比較分析程序，結(jié)合實驗監(jiān)控菌庫和過程監(jiān)控菌株進行實驗室排查分析，必要時結(jié)合臨床數(shù)據(jù)、現(xiàn)場調(diào)查數(shù)據(jù)和樣品與分離菌的關(guān)聯(lián)實驗等綜合分析，最