酸性染料比色法測(cè)定苦參藥材中總生物堿的含量

1、酸性染料比色法測(cè)定苦參藥材中總生物堿的含量         【摘要】  目的：建立酸性染料比色法測(cè)定苦參藥材中總生物堿的含量。方法：將苦參的酸水提取液用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至中性后，依次加入pH=7.6緩沖溶液，溴代麝香草酚藍(lán)指示液、氯仿混合振搖，靜置分層，于413 nm波長(zhǎng)處測(cè)定氯仿層吸收度。結(jié)果：苦參堿檢測(cè)濃度在0.004mg/mL0.02 mgmL范圍內(nèi)與吸收度線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為98.96%(RSD=1.59%)，并對(duì)實(shí)際藥材進(jìn)行了含量測(cè)定。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于苦參藥材的質(zhì)量控

2、制。 【關(guān)鍵詞】  酸性染料比色法苦參堿含量測(cè)定   Abstract  Objective：To establish a method to determine total alkaloids in radix Sophora lavescens by acid dye colorimetryMethods：total alkaloids of radix Sophora lavescens were extracted by acidified water，then adjusted to neutral by sodium hydroxide so

3、lution, dissolved with buffer solution，then were mixed with 0.025 of  bromothymol solution and chloroform，and then the mixture was shaken，standing and demixed，the absorbability of chloroform layer was detected at the wavelength of 413nmResults：The detection concentration of matrine showed good

4、linearity with its absorbability within the range of 0.004 mg/mL0.20 mgmL(r=0.9992)，the average recovery was 98.96(RSD=1.59)three radix Sophora lavescens from different source were determined with this method.Conlusion：The established method is simple and accurate，which can be used for quality contr

5、ol of Radix Sophora flavescentis.   Key words  Acid dye colorimetry；Matrine；Content determination   中藥苦參是豆科植物苦參Sophora flavescens Ait.的干燥根，所含有的生物堿是苦參藥理作用的主要有效成分，具有抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗心律失常、平喘、鎮(zhèn)咳、殺菌等作用，。生物堿含量的多少是評(píng)價(jià)苦參藥材質(zhì)量好壞的重要指標(biāo)之一。酸性染料比色法常用于制劑中生物堿的含量測(cè)定5，作者采用酸性染料比色法，以苦參堿為對(duì)照品，對(duì)不同產(chǎn)地來(lái)源的苦參中的

6、總生物堿成分，進(jìn)行了含量測(cè)定，建立了苦參藥材中總生物堿含量的測(cè)定方法，為苦參藥材的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。   1  儀器與試藥   756PL（IV）紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）；PHS-4CT型數(shù)字酸度計(jì)（上?？祪x儀器有限公司）?？鄥A標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），溴代麝香草酚藍(lán)和其余試劑均為分析純。   2  方法與結(jié)果   2.1  對(duì)照品溶液的制備   準(zhǔn)確稱取苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品適量，加50%乙醇制備成濃度為1 mg/mL的對(duì)照品溶液，備用。&

7、#160;  2.2  標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及測(cè)定方法   將“2.1”項(xiàng)下苦參堿對(duì)照品溶液稀釋至20 g/mL，各準(zhǔn)確量取1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，置于干燥的具塞三角瓶中，各加水至5 mL，分別加入pH=7.6緩沖液5 mL,再依次精密加入0.025%溴麝香草酚藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)液1.0 mL，氯仿10.0 mL，振搖1 min，倒入50 mL分液漏斗放置分層，靜置1 h，分取氯仿層。用分光光度計(jì)掃描、測(cè)定，結(jié)果顯示，苦參堿與溴代麝香草酚藍(lán)形成的復(fù)合物在413 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，故選擇413 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。另以同法操作(不加苦參堿對(duì)照品溶

8、液)的氯仿為空白在413 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。以濃度(C)為橫坐標(biāo)，吸收度(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程C=5.362X-0.012(=0.9992)，結(jié)果表明，苦參堿檢測(cè)濃度在0.004 mg/mL0.02mgmL范圍與吸收度線性關(guān)系良好。   2.3  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)   取20.0 g/mL對(duì)照品溶液3.0 mL 按2.2 方法制備標(biāo)準(zhǔn)品供試液和空白對(duì)照液，在波長(zhǎng)413 nm 處進(jìn)行測(cè)定。并在室溫下每隔1 h測(cè)定1次含量，連續(xù)測(cè)定8次，結(jié)果表明，待測(cè)液在8 h內(nèi)穩(wěn)定，其RSD=0.47% (n=8) 。   2

9、.4  精密度實(shí)驗(yàn)   取20.0 g/mL標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液3.0 mL，按2.2 下方法制備標(biāo)準(zhǔn)品供試液和空白對(duì)照液，在413 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定，重復(fù)測(cè)定5次。結(jié)果RSD=0.23%。            2.5  加樣回收實(shí)驗(yàn)   精密稱取已知總生物堿含量的苦參藥材5份，每份約0.08 g，分別準(zhǔn)確加入28.5 g/mL苦參堿對(duì)照液1.6 mL，按2.2項(xiàng)制備樣品供試液和空白對(duì)照液，在波長(zhǎng)413 nm處測(cè)定。結(jié)果樣品的平均回收率為98.

10、96 %，RSD=1.59%(n=5)。   表1  中藥材苦參含量測(cè)定結(jié)果   批次產(chǎn)地總生物堿含量(mg/g)1河北安國(guó)1.03  2安徽亳州2.26  3山西長(zhǎng)治1.89   2.6  苦參總生物堿的含量測(cè)定      將三種不同產(chǎn)地來(lái)源的苦參藥材粉碎后，分別精密稱取干燥至恒重的通過(guò)60目篩的生藥粉0.1550 g ,加0.1%鹽酸10 mL,冷浸4 h后，超聲提取1 h，濾過(guò)，濾液用1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至中性，取調(diào)節(jié)至中性的濾液5.0 m

11、L置分液漏斗中，依次精密加入pH=7.6緩沖溶液5 mL、0.025%溴麝香草酚藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)液1.0 mL，氯仿10.0 mL，振搖1 min，放置分層，靜置1 h，分取氯仿層。在413 nm波長(zhǎng)處，以不加藥材，同法操作的氯仿為空白，測(cè)定吸光度。將測(cè)得的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線可以計(jì)算求得苦參藥材中生物堿的含量。    3  討論   3.1  由于苦參藥材含有的生物堿成分都易溶于酸水溶液，因此在藥材含量測(cè)定中采用0.1%鹽酸作為提取液，冷浸結(jié)合超聲提取的方法，可以保證生物堿成分的提取完全。   3.2 

12、 本實(shí)驗(yàn)采用酸性染料比色法，是根據(jù)在一定pH介質(zhì)中，生物堿類與氫離子生成陽(yáng)離子，一些酸性染料在此條件下可解離成陰離子而與上述陽(yáng)離子定量結(jié)合成有色絡(luò)合物，可被有機(jī)溶劑定量提取的原理，用苦參堿作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在pH=7.60的條件下與溴麝香草酚藍(lán)定量顯色，苦參藥材中的生物堿在此條件下凡能與溴麝香草酚藍(lán)顯色的均可被測(cè)出，從而求得相對(duì)總生物堿的含量。該法靈敏度高，結(jié)果穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)便，易于在生產(chǎn)單位，藥材經(jīng)營(yíng)等基層單位推廣應(yīng)用，用于苦參藥材的質(zhì)量控制。   3.3  溴麝香草酚藍(lán)溶液濃度的選擇，取溴麝香草酚藍(lán)配制成0.010%、0.025%、0.050%、0.075%、0.10

13、0% 5個(gè)不同濃度的溶液，取1.0 mL 溴麝香草酚藍(lán)顯色劑，按2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)量，結(jié)果表明顯色劑的濃度對(duì)測(cè)定結(jié)果有干擾。在保證測(cè)定樣品中苦參堿完全與顯色劑結(jié)合的前提下，經(jīng)篩選試驗(yàn)，最佳顯色條件應(yīng)為0.025%的溴麝香草酚藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)液加1 mL進(jìn)行顯色。   3.4.  在實(shí)驗(yàn)對(duì)新鮮配制和放置1個(gè)月的顯色劑對(duì)結(jié)果的影響進(jìn)行了考察。樣品按2.2項(xiàng)下方法分別加入兩種顯色劑進(jìn)行測(cè)量，結(jié)果顯示放置1 個(gè)月的顯色劑的測(cè)量結(jié)果明顯偏小，說(shuō)明顯色劑放置一段時(shí)間后不穩(wěn)定。所以，試驗(yàn)所用顯色劑應(yīng)在使用時(shí)新鮮配制。【參考文獻(xiàn)】  李廣勛中藥藥理與臨床第1版，天津：科技翻譯出版公司，1992：6364. 李金陵，程愛(ài)民，荊宇紅，等重要苦參抗腫瘤作用的