蔓九節(jié)中揮發(fā)油的化學(xué)成分研究 2007031198 謝俊鵬

1、 中藥學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）題目：蔓九節(jié)中揮發(fā)油的化學(xué)成分研究 年級(jí)專業(yè) 2007級(jí) 中藥學(xué)臨床方向?qū)I(yè)學(xué) 號(hào) 姓 名 謝俊鵬指導(dǎo)教師 張翠仙學(xué)歷職稱 博士、副教授教師單位 廣州中醫(yī)藥大學(xué)填表日期 2011年 5 月 4 日廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)位論文誠(chéng) 信 聲 明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)術(shù)論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名： 年 月 日目 錄封面1誠(chéng)信聲明2中文摘

2、要4英文摘要5前言6概述6蔓九節(jié)化學(xué)成分6蔓九節(jié)藥理作用6蔓九節(jié)鑒別7小結(jié)7研究部分. .8材料與方法.8GC-MS分析蔓九節(jié)揮發(fā)油. .8 蔓九節(jié)GC-MS分析結(jié)果9結(jié)果與結(jié)論.12參考文獻(xiàn) .12致謝 .13附圖一 .14蔓九節(jié)中揮發(fā)油的化學(xué)成分研究作者：謝俊鵬（2007級(jí)中藥學(xué)臨床方向 ）指導(dǎo)老師：張翠仙 （天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室）【摘要】目的 初步分析蔓九節(jié)中揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，為蔓九節(jié)新藥開(kāi)發(fā)提供基礎(chǔ)研究資料。方法 用水蒸汽蒸餾法提取蔓九節(jié)中的揮發(fā)油，通過(guò)GC-MS技術(shù)分析其主要成分。結(jié)果 通過(guò)GC-MS鑒定出蔓九節(jié)揮發(fā)油中含1,6-Octadien-3-ol,3,7-dimethyl-

3、、Bicyclo2.2.1heptan-2-ol,1,7,7-trimethyl-,(1S-endo)-、(+)-.alpha.-Terpineol (p-menth-1-en- 8-ol)、Methyl Salicylate、2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (Z)-等成分。結(jié)論 首次采用GC-MS對(duì)其揮發(fā)油進(jìn)行成分分析，所得化合物Bicyclo2.2.1heptan-2 -ol,1,7,7-trimethyl-,(1S-endo)-、(+)-.alpha.-Terpineol (p-menth -1-en-8-ol)、Methyl Salicylate、2

4、,6-Octadien-1-ol,3,7-dimethyl-,(Z)-、3,7,11-Trimethyl-3-hydroxy-6,10-dodecadien-1- ylacetate、2,6-Octadien-1-ol,3,7-dimethyl-,(E)-、Tetradecanoic acid首次從此屬植物中得到，化合物1,6-Octadien-3-ol, 3,7-dimethyl-、Naphthalene,2-methyl-、3-Buten-2-one,4-(2,6,6 -trimethyl-2-cyclohexen-1-yl)-, (E)-等首次從此植物中得到。 【關(guān)鍵詞】蔓九節(jié)；揮發(fā)油；

5、GC-MS，化學(xué)成分The chemical constituents of volatile oil from Psychotria serpens L.Candidate: Jun-Peng Xie Supervisor: Cui-Xian Zhang【Abstract】 Objective: To analyze with Components of volatile oil from Psychotria serpens L. Methodology: Extract volatile oil Psychotria serpens L. respectively by steam di

6、stillation, and analyze their major ingredients by GC-MS .Results: Several constituents of the volatile oil of the Psychotria serpens L. were 1,6-Octadien-3-ol,3,7-dimethyl-、Bicyclo2.2.1heptan-2-ol,1,7,7-trimethyl-, (1S-endo)-、(+)-.alpha.-Terpineol (p-menth-1-en-8-ol)、Methyl Salicylate、2,6-Octadien-

7、1-ol, 3,7-dimethyl-, (Z)-, etc. Conclusion: It is the first time when GC-MS was applied in component analysis of essential oil of Psychotria serpens L., and it isolated a variety of different chemical composition from the Psychotria serpens L.【Keywords】 Psychotria serpens L.; Volatile Oil; GC-MS; ch

8、emical constituents前言九節(jié)屬（Psychotria）植物是我國(guó)南方常用中草藥。文獻(xiàn)調(diào)研表明，我國(guó)境內(nèi)本屬植物少見(jiàn)其相關(guān)化學(xué)成分研究。為進(jìn)一步深入研究我國(guó)此屬植物現(xiàn)對(duì)目前國(guó)內(nèi)外此屬植物的化學(xué)成分及藥理作用進(jìn)行綜述，有利于我國(guó)中草藥的充分利用和天然藥物深入開(kāi)發(fā)。本課題在前期文獻(xiàn)研究、預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上擬對(duì)市售的茜草科九節(jié)屬的蔓九節(jié)（Psychotria serpens L.）揮發(fā)油進(jìn)行化學(xué)成分研究。采用水蒸汽蒸餾法提取蔓九節(jié)的揮發(fā)油，通過(guò)GC-MS技術(shù)對(duì)其中的成分進(jìn)行分析，為正確認(rèn)識(shí)蔓九節(jié)的藥用價(jià)值提供物質(zhì)基礎(chǔ)，從而更好闡述蔓九節(jié)的藥效機(jī)制，對(duì)我國(guó)中草藥資源深入開(kāi)發(fā)具有指導(dǎo)性意義。

9、概述我國(guó)傳統(tǒng)中草藥歷經(jīng)數(shù)千年的臨床驗(yàn)證，具有多靶點(diǎn)作用機(jī)制、毒副作用低、無(wú)耐藥性等優(yōu)點(diǎn)使它表現(xiàn)出誘人的應(yīng)用前景。中藥穿根藤為民間習(xí)用草藥，用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、手足麻木、腰肌勞腡、坐骨神經(jīng)痛、多發(fā)性癰腫、骨結(jié)核、跌打損傷、骨折、毒蛇咬傷等1。中藥大辭典等文獻(xiàn)記載中藥穿根藤的的原植物為茜草科九節(jié)屬蔓九節(jié)（又稱匍匐九節(jié)）1，其別名眾多，有春根藤2、木頭疳3、石邦子3，味苦辛、性平，具祛風(fēng)濕、舒筋活絡(luò)、消腫止痛的作用，臨床上用于治療濕關(guān)節(jié)痛、手足麻木、腰肌勞腡、坐骨神經(jīng)痛、多發(fā)性癰腫、骨結(jié)核、跌打損傷、骨折、毒蛇咬傷等癥1。廣東地區(qū)多作絡(luò)石藤的習(xí)用藥45，民間組方較多，多以水煎、搗汁或浸酒服用，亦有制

10、作中成藥服用的例子6。1、蔓九節(jié)化學(xué)成分綜述近幾十年的文獻(xiàn)，蔓九節(jié)除臺(tái)灣對(duì)其化學(xué)成分及藥理作用略有研究外，在內(nèi)地鮮見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道7。通過(guò)查閱中藥大辭典得知穿根藤的化學(xué)成分中含有熊果酸(ursolic acid)，豆甾醇(stigmasterol)，-谷甾醇(-sitosterol)，高級(jí)脂肪酮(higher aliphatic ketone)，烏楠醌(tectoquinone)等。2、蔓九節(jié)藥理作用從穿根藤全草中提出的熊果酸在體外對(duì)人鼻咽癌(KB)細(xì)胞的ED50為6.6g/ml，對(duì)人肺癌A549ED50為4.0g/ml，對(duì)回盲腸癌HCT-8的ED50為4.5g/ml，對(duì)乳腺癌MCF-7的ED50為

11、4.9g/ml5。黃煒、黃濟(jì)群、張東方等對(duì)熊果酸抗人肺癌細(xì)胞（PGCL3）侵襲作用進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)處理96h 均可降低PGCL3 細(xì)胞增殖能力并呈劑量依賴性, 均能抑制PGCL3 細(xì)胞的侵襲能力( P< 0101) 且有劑量依賴性。抗侵襲作用機(jī)理的分析結(jié)果顯示上熊果酸對(duì)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、粘附能力及組織蛋白酶B分泌均有明顯的抑制作用( P < 0105 和P < 0101)，軟瓊脂集落形成率也顯著降低( P < 0101)。8藤類藥常用于治療肢體經(jīng)絡(luò)、筋脈病變，臨床上神經(jīng)科應(yīng)用較為廣泛，治療中風(fēng)病用以緩解偏癱、麻木、僵直等癥，療效顯著。9周好田應(yīng)用通絡(luò)止痛湯治療痹證32例，療效顯

12、著。10；竇立新的研究表明，應(yīng)用含有祛風(fēng)濕止痛的絡(luò)石藤的組方對(duì)治療類風(fēng)濕有明顯的療效11；隋德翠也應(yīng)用含絡(luò)石藤組方成功治療一例風(fēng)濕頑痹。12劉明霞的研究表明，復(fù)方絡(luò)石藤方對(duì)小兒急性扁桃體炎有顯著療效13。廣州植物志：“煎服或浸酒飲，壯筋骨，消風(fēng)濕?！?3、蔓九節(jié)鑒別林穎、黃恩等以穿根藤和正品絡(luò)石藤顯微特征對(duì)比，總結(jié)了穿根藤的顯微特征是： 莖橫 切面內(nèi)皮層明顯，特化成石細(xì)胞狀環(huán)帶狀的凱氏帶。 莖皮層、葉肉組織的薄壁細(xì)胞中可見(jiàn)草酸鈣針晶束。粉末中可觀察到淀粉粒、非腺毛、針晶束、石細(xì)胞及平軸式氣孔14；鄭善榮應(yīng)用外觀性狀區(qū)別，對(duì)正品絡(luò)石藤和穿根藤等混淆品進(jìn)行了鑒別15；張電光、羅集鵬利用紫外光譜法，

13、對(duì)絡(luò)石、石血、蔓九節(jié)和薜荔不育枝的水提液和氯仿提液在零階和一階的吸收光譜中進(jìn)行鑒別，結(jié)果發(fā)現(xiàn)零階光譜特征較少，一階光譜峰形尖銳，相似光譜的零交點(diǎn)和第一、二強(qiáng)谷的導(dǎo)數(shù)比值有較大差異，可作鑒別依據(jù)。164、小結(jié)目前對(duì)蔓九節(jié)（穿根藤）的研究中，多是其藥效、藥理作用，抑或是和正品絡(luò)石藤之間的鑒別，較少涉及其化學(xué)成分的研究。而同屬植物中，近年也只有山大顏（P. rubra）的化學(xué)成分分析研究獲得了11-O-丁香酰矮地茶素、巖白菜素、沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸甲酯四個(gè)首次發(fā)現(xiàn)的新成分7。而揮發(fā)油多具有止咳、祛痰、驅(qū)風(fēng)、鎮(zhèn)痛、解痙等功效17，故對(duì)蔓九節(jié)中揮發(fā)油成分進(jìn)行研究，對(duì)深入挖掘蔓九節(jié)價(jià)值、新藥開(kāi)發(fā)或增強(qiáng)藥效的

14、研究有一定的意義。研究部分本研究工作共包含兩部分工作：山大顏莖、葉的揮發(fā)油提??；揮發(fā)油成分分析。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及藥材藥材：蔓九節(jié)，廣東習(xí)稱穿根藤化學(xué)試劑及儀器：石油醚、藥材粉碎機(jī)，揮發(fā)油提取器，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，GC-MS聯(lián)用儀，GC-MS檢測(cè)儀。1.2 揮發(fā)油提取方法取200g蔓九節(jié)藥材，用藥材粉碎機(jī)粉碎至合適粒度，置圓底燒瓶中，加6倍量水，共1200ml，振搖，混合均勻后浸泡2h，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分，并溢流入燒瓶為止。置電熱套上緩緩加熱至沸，并保持微沸約6h，停止加熱，放置冷卻。將殘留在揮發(fā)油測(cè)定器里的水用乙醚萃取，得

15、總揮發(fā)油。將所得揮發(fā)油用GC-MS儀器檢測(cè)。2 GC-MS分析蔓九節(jié)揮發(fā)油： 圖表2-1.揮發(fā)油GC-MS分析條件parametervalueparametervalueIonization Mode:EI+Ion Energy Ramp (mV/amu):0Emission Current (µA):100Interface Temperature ():230Repeller Voltage (V):0.5Source Temperature ():200Electron Energy (eV):70Low Mass Resolution:14Lens 1 (V):5High M

16、ass Resolution:13.2Lens 2 (V):45Detector Voltage (V):400Ion Energy (eV):3.2Standby Time:0.50 (min)Post-run Time:0.00 (min)Value:4.50 ml/minSplit Flow:20.02.1 蔓九節(jié)GC-MS分析結(jié)果：圖1. 蔓九節(jié)揮發(fā)油總離子流圖表2-2.蔓九節(jié)揮發(fā)油GC-MS檢測(cè)結(jié)果（對(duì)應(yīng)附圖一）No.Apex RTHeightFormulaCompound120.0914386073C10H18O1,6-Octadien-3-ol, 3,7-dimethyl-224

17、.35212970120C10H18OBicyclo2.2.1heptan-2-ol,1,7,7-trimethyl-,(1S-endo)-325.9793111626C10H18O(+)-.alpha.-Terpineol (p-menth-1-en-8-ol)426.1332088483C8H8O3Methyl Salicylate528.789345747C10H18O2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (Z)-629.166539210C17H30O33,7,11-Trimethyl-3-hydroxy-6,10-dodecadien-1-yl acet

18、ate730.689308869C10H18O2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (E)-832.316272987C11H10Naphthalene, 2-methyl-941.074424665C13H20O3-Buten-2-one,4-(2,6,6-trimethyl-2-cyclohexen-1-yl)-, (E)-1042.936304257C13H22O5,9-Undecadien-2-one, 6,10-dimethyl-, (E)-1144.5961162482C13H20O3-Buten-2-one,4-(2,6,6-trimethyl-1-

19、cyclohexen-1-yl)-, (E)-1256.8581277605C17H36Heptadecane1361.067557009C14H28O2Tetradecanoic acid1464.1073349861C18H36O2-Pentadecanone, 6,10,14-trimethyl-1564.8124498515C16H22O41,2-Benzenedicarboxylic acid, bis(2-methylpropyl) ester1666.9961854817C16H22O4Dibutyl phthalate1767.51610802613C16H32O2n-Hexa

20、decanoic acid1869.27517955106C20H40OPhytol1969.7406101048C18H34O29-Octadecenoic acid, (E)-（1） （2）1,6-Octadien-3-ol, 3,7-dimethyl- Bicyclo2.2.1heptan-2-ol, 1,7,7-trimethyl-, (1S-endo)-（3） （4）(+)-.alpha.-Terpineol (p-menth-1-en-8-ol) Methyl Salicylate （5） （6）2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (Z)- 3,7,

21、11-Trimethyl-3-hydroxy-6,10-dodecadien-1-yl acetate（7） （8）2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (E)- Naphthalene, 2-methyl-（9） （10）3-Buten-2-one, 4-(2,6,6-trimethyl-2- 5,9-Undecadien-2-one, 6,10-dimethyl-, (E)-cyclohexen-1 -yl)-, (E)-（11） （12）3-Buten-2-one, 4-(2,6,6-trimethyl-1- Heptadecanecyclohexen-1

22、-yl)-, (E)-（13） （14）Tetradecanoic acid 2-Pentadecanone, 6,10,14-trimethyl-（15） （16）1,2-Benzenedicarboxylic acid, Dibutyl phthalatebis(2-methylpropyl) ester（17） （18）n-Hexadecanoic acid Phytol（19）9-Octadecenoic acid, (E)-4結(jié)果與結(jié)論：（1）從蔓九節(jié)揮發(fā)油中提取了1,6-Octadien-3-ol,3,7-dimethyl-、Bicyclo2.2.1 heptan-2-ol,1,7

23、,7-trimethyl-, (1S-endo)-、(+)-.alpha.-Terpineol (p-menth-1-en-8-ol)、Methyl Salicylate、2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (Z)-等19種成分，其中含芳樟醇（Linalool）、左旋冰片（L-borneol）、-松油醇（-Terpineol）、冬青油（Methyl Salicylate）、n-棕櫚酸（n-Hexadecanoic acid）、植醇（Phytol）等常見(jiàn)成分，占揮發(fā)油總成分71.11%.。（2） 周本杰、譚永恒等的研究表明，芳樟醇對(duì)正常人體心、肺功能具明顯抑制作用

24、19；冰片具消炎、抗菌等功效20；冬青油有消腫、消炎和鎮(zhèn)痛作用。（3） 蔓九節(jié)的揮發(fā)油含多種化學(xué)成分，其藥理上的作用以及在新藥開(kāi)發(fā)上的應(yīng)用，有待進(jìn)行進(jìn)一步的研究。參考文獻(xiàn)：1江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典,下冊(cè)M.上海:上?？茖W(xué)出版社.2003:17312廣州市衛(wèi)生局藥品檢驗(yàn)所,中國(guó)科學(xué)院華南植物研究所.廣東中藥M.廣州:廣東人民出版社.1963:138-1393國(guó)家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì),中華本草M.上海:上?？萍汲霭嫔?1998:23574羅景,馮耀南,劉明,劉儉.中藥商品知識(shí),中冊(cè)M.廣州：廣東省醫(yī)藥聯(lián)合總公司.1983:2835伍月紅,劉柏英.廣東習(xí)用中藥材品種鑒定和質(zhì)量分析J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2005,16(9):941-9426南麗紅.傷濕膠囊的藥效學(xué)和毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究D.福建:福建中醫(yī)學(xué)院.20027張翠仙,彭光天,何細(xì)新,林朝展,熊天琴,鄧潔薇,趙鐘祥,祝晨蔯.九節(jié)屬藥用植物Psychotria sp.化學(xué)成分分析J.中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版) ,2010,49(4):1488黃煒,黃濟(jì)群,張東方,張瑞玲,廖兆全.甘草酸、18B- 甘草次酸、熊果酸和齊墩果酸抗人肺癌細(xì)胞侵襲作用及其機(jī)理的研究J.中國(guó)中醫(yī)藥科技,2003,10(6):349-3509祝時(shí)祥.藤類藥治療中風(fēng)