β-Actin和GAPDH簡(jiǎn)介

1、伊Actinp-Actin 簡(jiǎn)介Actin 即肌動(dòng)蛋白”，是犯的一種重要骨架蛋白。同時(shí) Actin 在細(xì)胞分泌、吞噬、3-Actin移動(dòng)、胞質(zhì)流動(dòng)和胞質(zhì)分離等過(guò)程中起重要作用。Actin 在不同物種之間高度保守，以至于很難獲得較好的針對(duì) actin 的抗血清。Actin 大致可分為六種，其中四種是不同肌肉組織特異性的，包括紡 skeletalmuscleactin,o-cardiacmuscleactin,o-smoothmuscleactin,和smoothmuscleactin;其余兩種廣泛分布于各種組織中，包括&actin(-non-muscle)和 ynon-muscleact

2、in。不同的 actin 之間同源性大于 90%,但在 N-terminal 同源性?xún)H 50%-60%,因此 N-terminal 常被用作 actin 的抗里。伊 Actin 是橫紋肌肌纖維中的一種主要蛋白質(zhì)成分,也是肌肉細(xì)絲及細(xì)胞骨架微絲的主要成分。具有收縮功能，分布廣泛。p-Actin 用途&Actin 是 PCR 常用的內(nèi)參，SActin 抗體是 WesternBlot 很好的內(nèi)參指數(shù)。內(nèi)參即是內(nèi)部參照(InternalControl)，對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)來(lái)說(shuō)一般是指由管家基因編碼表達(dá)的蛋白。它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，在檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平變化時(shí)常用它來(lái)做參照物。常用

3、的蛋白質(zhì)內(nèi)參有細(xì)胞骨架蛋白 beta-actin 或 beta-tubulin 和GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase)等。因此 3-Actin 抗體、的 Tubulin 抗體以及GAPDH 抗體成為最常見(jiàn)的三個(gè)動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)參抗體。j-Actin 作為內(nèi)參是得到了公認(rèn)的，這是針對(duì)大多數(shù)組織和細(xì)胞來(lái)說(shuō)的，它廣泛分布于細(xì)胞漿內(nèi)，表達(dá)量非常豐富。Beta-actin由 375 個(gè)氨基酸組成，分子量大小為 42-43kDa 左右。aactin 的蛋白水平通常不會(huì)發(fā)生改變，因此被廣泛用于 Western 時(shí)上樣量是否一致的參照，也常被用于免疫染色觀(guān)察細(xì)

4、胞的微絲結(jié)構(gòu)。在用作 Western 的參照時(shí)，Actin 抗體和 Tubulin抗體的主要不同之處在于兩者所識(shí)別蛋白的分子量不同，這樣可以選擇合適的參照在同一塊膠同一張膜上實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測(cè)目標(biāo)蛋白和參照蛋白。應(yīng)用學(xué)科應(yīng)用學(xué)科：生物化學(xué)與分子生物學(xué)（一級(jí)學(xué)科）;氨基酸、多肽與蛋白質(zhì)（二級(jí)學(xué)科）定義 2：真核細(xì)胞中含量豐富，構(gòu)成肌動(dòng)蛋白絲的一種蛋白質(zhì)。以單體和多聚體兩種形式存在。應(yīng)用學(xué)科：細(xì)胞生物學(xué)（一級(jí)學(xué)科）；細(xì)胞化學(xué)（二級(jí)學(xué)科）GAPDH一概述 GAPDH 或 G3PDH 是甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase）的英文縮寫(xiě)。該酶是

5、糖酵解反應(yīng)中的一個(gè)酶，由 4 個(gè) 3040kDa 的亞基組成，分子量 146kDa。該酶基因?yàn)榭醇遥╤ousekeeping）基因，幾乎在所有組織中都高水平表達(dá)，在同種細(xì)胞或者組織中的蛋白質(zhì)表達(dá)量一般是恒定的，且不受含有的部分識(shí)別位點(diǎn)、佛波脂等的誘導(dǎo)物質(zhì)的影響而保持恒定，故被廣泛用作抽提 totalRNA,poly（A）+RNA,Westernblot 等實(shí)驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參。GAPDH吉構(gòu)圖常用的內(nèi)參有，ACTB（3-actin、伊肌動(dòng)蛋白）、GAPDH 或 18S 等。目的是在于避免RNA 定量誤差、加樣誤差以及各 PCR 反應(yīng)體系中擴(kuò)增效率不均一、各孔間的溫差等所造成的誤差、這些都是看

6、家基因，在各個(gè)組織中的表達(dá)量相對(duì)穩(wěn)定，其中 18S 同整個(gè)基因譜有關(guān)（負(fù)責(zé)裝配），它在總 RNA 中占的比例最高。轉(zhuǎn)染了GAPDHsiRNA.jpg轉(zhuǎn)染了GAPDHsiRNA的Hela細(xì)胞轉(zhuǎn)染了 GAPDH 相關(guān) siRNA 的 HeLa 細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后 48 小時(shí)后不斷增殖。紅：被標(biāo)記的 siRNA;藍(lán)：被染色的細(xì)胞核；綠色：GAPDH 蛋白；（這些 siRNA 銳博生物均可提供）陰性對(duì)照（scrambledsiRNA）的導(dǎo)入（左）對(duì) GAPDH 蛋白的表達(dá)沒(méi)有影響，不過(guò)若轉(zhuǎn)入一個(gè)以 GAPDH（右）為靶標(biāo)的 siRNA,則會(huì)導(dǎo)致 GAPDH 蛋白表達(dá)水平的急劇下降。二 GAPDF 作為內(nèi)參 GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）是參與糖酵解的一種關(guān)鍵酶，由 4 個(gè) 30-40kDa 的亞基組成，分子量 146kDa,檢測(cè)條帶大約在 36kDa。GAPDH 基因幾乎在所有組織中都高水平表達(dá)，廣泛用作 Westernblot 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參。因?yàn)?GAPDH 作為看家基因在同種