了哥王中西瑞香素提取工藝的正交實驗設(shè)計優(yōu)選

1、了哥王中西瑞香素提取工藝的正交實驗設(shè)計優(yōu)選郭君陽，郝桂彤，孫立新【摘要】 目的優(yōu)選了哥王中西瑞香素的最正確提取工藝。 方式以西瑞香素含量為考察指標(biāo)，采納 L9（34）正交設(shè)計的方式優(yōu)選了哥王中西瑞香素的最正確提取條件。結(jié)果了哥王中西瑞香素的最正確提取工藝為： 75%乙醇加熱回流提取 4 次，2 h/ 次。結(jié)論此提取工藝簡便合理可行，適用于了哥王中西瑞香素的提取。【關(guān)鍵詞】了哥王；西瑞香素；正交設(shè)計；提取工藝了哥王學(xué)名南嶺蕘花Wikstroemia indica (L.)C. A. Mey，為瑞香科蕘花屬植物，其根、莖葉和果實都可入藥，盛產(chǎn)于廣東、浙江、廣西等地。了哥王始載于嶺南采藥錄 ，其性味

2、苦寒，微辛，有毒，入肺肝經(jīng)，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、通經(jīng)利水等功效。了哥王要緊有香豆素類、黃酮類、木脂素類、揮發(fā)油類、甾體類、皂苷等成份，文獻報導(dǎo)具有抑菌、抗病毒、抗炎鎮(zhèn)痛、止咳祛痰、抗癌等作用 1。西瑞香素（daphnoretin ）為香豆素類化合物， 在了哥王中含量較大2，具有抗病毒 3、抗腫瘤 4等作用。了哥王中西瑞香素的提取，文獻中采納甲醇為提取溶劑，但甲醇毒性較大，且提取工藝未經(jīng)優(yōu)化5，6。本實驗采納乙醇提取， 通過正交實驗考察了阻礙西瑞香素提取工藝的乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時刻、提取次數(shù)，優(yōu)選了哥王中西瑞香素的最正確提取工藝，為工業(yè)化生產(chǎn)提供實驗參考依據(jù)。1 儀器 試劑與藥材儀器島津 L

3、C-6A 高效液相色譜儀（日本 SHIMADZU），ANASTAR色譜工作站（天津奧特塞恩斯儀器） ，分析天平（十萬分之一， 湘儀天平儀器廠），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（RE-52AA，上海亞榮生化儀器廠），SHZ-型循環(huán)水真空泵（鄭州長城科工貿(mào)），KQ-100 超聲機（昆山市超聲儀器），恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器） 。試藥西瑞香素對照品（廣州來普達克生物技術(shù)，純度為 %），了哥王（購自河北安國市童鈴藥材，產(chǎn)地是廣東，批號： 080522）；甲醇（色譜純， 山東禹王實業(yè)禹城化工廠） ，純凈水（杭州娃哈哈集團），無水乙醇、磷酸為分析純；了哥王藥材由沈陽藥科大學(xué)孫啟時教授鑒定為 Wikstroemia ind

4、ica (L.)C. A. Mey。2 方式與結(jié)果西瑞香素的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗色譜柱：Diamonsil C18 (250 mm× mm, 5 m)；流動相：甲醇%磷酸水溶液 (49 51，V/V) ；流速ml·min-1 ；檢測波長： 345 nm；柱溫： 40。在上述色譜條件下，理論板數(shù)按西瑞香素計不低于 3 000 。西瑞香素與相鄰峰的分離度均大于，拖尾因子均在之間。色譜圖見圖 1。對照品溶液的制備取西瑞香素對照品約 mg，周密稱定，置于 100 ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得 g·ml-1 儲蓄液。供試品溶液的制備取了哥王藥

5、材約 10 g ，周密稱定，置于圓底燒瓶內(nèi)，加 75%乙醇浸泡留宿，藥材溶劑 =110，第二天于 80° 水浴中回流提取 4 次， 2 h/ 次，熱濾，歸并濾液，減壓蒸干，所得浸膏用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至 100 ml 量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，周密吸取 1 ml 于 50 ml 量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻， m濾膜過濾，取續(xù)濾液即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制依次周密吸取西瑞香素標(biāo)準(zhǔn)儲蓄液， ，ml ，別離置于 10 ml 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配成西瑞香素濃度別離為， g·ml-1 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取 20 l 上述溶液依次注入高效液相色譜儀中， 于 345 nm波優(yōu)勢測定峰面

6、積。 以西瑞香素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 ( g·ml-1) 為橫坐標(biāo) (X) ，峰面積 (A) 為縱坐標(biāo) (Y) ，進行線性回歸。所得回歸方程為Y = ×104 X + × 103， r = 9 (n = 6)。結(jié)果說明，西瑞香素在g·ml-1 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。周密度實驗取同一對照品溶液， 按上述色譜條件， 重復(fù)進樣 6 次，20 l/ 次。測定西瑞香素峰面積，其 RSD為%，說明該方式的周密度良好。穩(wěn)固性實驗取同一供試品溶液，別離于 0，2，4，8，16，24 h 按上述色譜條件，進樣 20 l 測定西瑞香素峰面積， RSD為%，說明西瑞香素在 24

7、h 內(nèi)穩(wěn)固。重復(fù)性實驗周密稱取了哥王藥材6 份，按“項下方式制備并測定，RSD為%，說明此方式的重復(fù)性良好。加樣回收率實驗稱取已知含量的了哥王藥材6 份，每份約 5 g ，周密稱定，別離定量加入西瑞香素對照品約20 mg，按“項下方式操作，計算回收率。平均回收率為 %，RSD為% 。提取工藝的優(yōu)化正交實驗設(shè)計考慮到大量提取時的實際條件，在預(yù)實驗的基礎(chǔ)上，選取提取溶劑的加入量為藥材的 10 倍量，阻礙了哥王中西瑞香素提取率的要緊因素為：乙醇的體積分?jǐn)?shù)、提取時刻、提取次數(shù)。因此選取上述 3 個因素為考察因素， 每一個因素設(shè)立 3 個水平（見表 1）采納 L9（34）正交設(shè)計表，以西瑞香素含量為指標(biāo)

8、進行實驗，實驗安排及結(jié)果見表23。表 1 因素水平，表2 正交實驗直觀分析結(jié)果，表3 方差分析結(jié)果（略）實驗方式及結(jié)果稱取了哥王藥材 9 份，每份約 10 g，周密稱定，按表 2 的設(shè)計浸泡留宿后回流提取，熱濾，歸并濾液，減壓濃縮至干，所得浸膏用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至 100 ml 量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，周密量取 1 ml 置 50 ml 量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，用 m濾膜過濾，取續(xù)濾液按西瑞香素含量測定項下測定。 9 次實驗結(jié)果見表 2。正交實驗結(jié)果分析由表23 可知，直觀分析說明，各因素對西瑞香素含量阻礙程度依次為：A>C>B ，最正確的工藝組合為A2B

9、2C3 。方差分析的結(jié)果說明， 3 個因素對西瑞香素含量阻礙均不顯著。以西瑞香素含量為要緊考察指標(biāo)，確信最正確提取工藝為 A2B2C3 ，即 75%乙醇，提取 4 次， 2 h/ 次。方式驗證明驗依照上述結(jié)果挑選的工藝進行實驗， 平行做 6 份，依照“項下制備供試品溶液，取 20 l 續(xù)濾液進樣分析。結(jié)果：平均西瑞香素含量為 mg·g-1 ，與表 2 結(jié)果比較可見本提取工藝合理。3 討論西瑞香素甲醇溶液于 200 400 nm 紫外區(qū)內(nèi)進行掃描，于 345 nm 處有最大吸收，因此本實驗采納 345 nm 為最大吸收波長。依照預(yù)實驗結(jié)果，了哥王藥材浸泡留宿提取的更完全。經(jīng)正交設(shè)計實驗

10、直觀和方差分析發(fā)覺阻礙了哥王中西瑞香素提取的因素依次為乙醇體積分?jǐn)?shù) > 提取次數(shù) > 提取時刻，最正確提取條件為A2B2C3，即：75%乙醇溶液提取 4 次，2 h/ 次。按此最正確工藝條件進行驗證明驗，結(jié)果說明該工藝具有重復(fù)性，說明該提取工藝穩(wěn)固，可為生產(chǎn)提供實驗參考?！緟⒖嘉墨I】1陳 揚，孫立新 . 中藥了哥王研究進展 J. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報， 2020，26（7）：587. 2熊友香，王顯武，尤志勉，等 . HPLC 測定不同產(chǎn)地了哥王藥材中西瑞香素含量 J. 中成藥， 2020，31（8）：附 18.a Protein Hepatitis3Chen HC, Chou CK, Kuo YH, et al.IdentificationofKinase C (PKC) Activator,Daphnoretin,That SuppressesB VirusGene ExpressioninHuman Hepatoma Cells J.Biochemical Pharmacology, 1996,52:1025. 4楊振宇，郭 薇，吳東媛，等 . 了哥王