水產(chǎn)品中己烯雌酚快速檢測(cè)方法試驗(yàn)分析

1、水產(chǎn)品中己烯雌酚快速檢測(cè)方法試驗(yàn)分析    摘要對(duì)一種快速檢測(cè)水產(chǎn)品中己烯雌酚殘留量ELISA方法進(jìn)行試驗(yàn)分析,結(jié)果表明:在0.159.00ng/mL濃度范圍內(nèi),回歸方程y=-13.141Ln(x)+43.52,相關(guān)系數(shù)R2=0.994 8;相對(duì)平均偏差為3.0%11.6%;回收率為73%96%;樣品檢測(cè)下限為0.075ng/g;定量下限為0.25ng/g;操作過程簡(jiǎn)單,檢測(cè)成本低,檢測(cè)時(shí)間短,因而該方法適用于大批量水產(chǎn)品中己烯雌酚殘留量快速檢測(cè)。 關(guān)鍵詞水產(chǎn)品;己烯雌酚;ELISA;快速檢測(cè) 中圖分類號(hào) S912 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-573

2、9(2009)15-0347-01 己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES)是一種人工合成的雌性激素,應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中能夠促進(jìn)蛋白質(zhì)同化,提高飼料轉(zhuǎn)化率,同時(shí)促進(jìn)魚蝦類生長(zhǎng)。但因其在水產(chǎn)動(dòng)物中代謝較慢且作用頑強(qiáng),極小的殘留都會(huì)對(duì)人體生理功能產(chǎn)生影響,主要危害是擾亂人體激素平衡,并具有致癌性,現(xiàn)已被禁止應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中,規(guī)定水產(chǎn)品中不得檢出己烯雌酚1。為此,從2002年開始我國(guó)要求水產(chǎn)品中己烯雌酚殘留量的檢出限為0.6 g/kg,歐盟要求以2g/kg為陽性下限。目前,己烯雌酚常用的檢測(cè)方法有高效液相色譜法(HPLC)和酶聯(lián)免疫法(ELISA),但是HPLC法2在檢出限上不能滿足要

3、求;ELISA法3是目前水產(chǎn)品中DES殘留檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)方法,但也存在樣品處理過程復(fù)雜、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、成本高等不足。為了尋求一種經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、靈敏、特異性強(qiáng)的測(cè)定方法,筆者對(duì)一種快速檢測(cè)水產(chǎn)品中己烯雌酚殘留量的ELISA方法進(jìn)行試驗(yàn)分析,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。 1材料與方法 1.1儀器與試劑 Lab system MK3型酶標(biāo)儀、METTLER PB602-N電子天平、N- EVAP氮吹儀、LRH-150S恒溫培養(yǎng)箱、移液器(10L、20L、100L和1mL各1支)、多道移液器(50300L)。 美國(guó)Bioo MaxSignalTM己烯雌酚ELISA試劑盒、乙酸乙酯、正己烷、無水CaCl2。 1.2測(cè)定方

4、法 2結(jié)果與分析 2.1線性范圍 分別計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控和樣品的平均吸光度值和相對(duì)吸光度值:相對(duì)吸光度值(%)=(標(biāo)準(zhǔn)或樣品吸光度值/零標(biāo)準(zhǔn)吸光度值)×100;以相對(duì)吸光度值為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖1)。 2.2精密度和回收率 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取質(zhì)控和樣品的濃度值,計(jì)算南美白對(duì)蝦和湖蟹樣品的精密度和回收率(見表1、表2)。 2.3檢測(cè)限 從圖1可知,0.159.00ng/mL濃度范圍內(nèi),標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)最低濃度0.15ng/mL,計(jì)算樣品檢測(cè)下限=0.15ng/mL×1mL×6mL/(4mL×3g)=0.075

5、ng/g;根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)次低濃度為0.5ng/mL,計(jì)算樣品定量下限=0.5ng/mL×1mL×6mL/(4mL×3g)=0.25ng/g。 2.42種方法檢測(cè)DES比較 2種方法檢測(cè)DES的成本、時(shí)間比較見表3。 3結(jié)論與討論 通過以上試驗(yàn)可知,快速檢測(cè)水產(chǎn)品中己烯雌酚的方法在檢測(cè)限、定量范圍、精密度、回收率(73%96%>70%)等技術(shù)指標(biāo)上都滿足標(biāo)準(zhǔn)3規(guī)定的要求;將其與德國(guó)r-biopharm己烯雌酚ELISA試劑盒相比,操作過程簡(jiǎn)單,檢測(cè)成本低,檢測(cè)時(shí)間短,因而該方法非常適于大批量檢測(cè)水產(chǎn)品中己烯雌酚殘留含量。同時(shí),在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)中華絨螯蟹樣品的回收率比南美白對(duì)蝦低,而在相同濃度下的相對(duì)平均偏差卻較高。這可能與中華絨螯蟹樣品脂肪含量相對(duì)較高,提取物經(jīng)過2次凈化有關(guān)。 4參考文獻(xiàn) 1 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.NY5070-2002 無公害食品、水產(chǎn)品中魚藥殘留限量S.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2002. 2 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB/T 5009.108-2003 畜禽肉中己烯雌酚的測(cè)定S.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2002. 3 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.SC/T 3020-2004 水產(chǎn)品中己烯雌酚殘