血吸蟲病原學(xué)檢查

1、日日本本血血吸吸蟲蟲病病原原學(xué)學(xué)檢檢查查方方法法程程銀銀玲玲目 錄一、血吸蟲病原學(xué)查病方法種類二、詳細(xì)介紹毛蚴孵化法和改良加藤厚涂片法三、各種病原學(xué)方法查出的蟲卵及毛蚴涂片欣賞一、日本血吸蟲病原學(xué)查病方法種類一、日本血吸蟲病原學(xué)查病方法種類 從糞便中檢出血吸蟲蟲卵或孵出毛蚴是確定診斷和考核療效的最可靠的指標(biāo)。糞檢蟲卵方法簡便易行，但在輕度感染者、晚期患者和經(jīng)治療未愈者糞便中蟲卵數(shù)很少，檢出率不高，故糞檢蟲卵陰性不能排除血吸蟲感染。糞檢蟲卵（毛蚴）有定性檢查法和定量檢查法。 1.1.糞糞 檢檢定性檢查定性檢查： A 直接涂片鏡檢法 B 集卵鏡檢法 C 孵化法 1.1.糞糞 檢檢自然沉淀法尼龍袋集

2、卵法 定量檢查：定量檢查： 改良加藤厚涂片法改良加藤厚涂片法 1.1.糞糞 檢檢 用乙狀結(jié)腸鏡或直腸鏡觀察直腸粘膜的病變；急性期以腸粘膜充血、水腫為主，慢性期時腸粘膜蒼白、肥厚及癱痕形成。各期均可見典型的小斑點(diǎn)或小結(jié)節(jié)。將夾取疑有蟲卵結(jié)節(jié)的米粒大小粘膜組織，壓于兩載玻片之間鏡檢。本法檢出血吸蟲卵的陽性率很高。對未經(jīng)治療的病人，檢出的蟲卵不論死、活卵均有確定診斷價值；對經(jīng)特效藥物治療過的病人，則只有檢出活卵或近期變性卵才有診斷、治療意義。活檢時要細(xì)心操作，以防發(fā)生腸大出血或腸穿孔，尤其對晚期血吸蟲病患者更應(yīng)小心操作。 2.2.直腸粘膜活組織檢查直腸粘膜活組織檢查二、詳細(xì)介紹毛蚴孵化法和改良加藤厚

3、涂片法毛毛 蚴蚴 孵孵 化化 法法 基本原理基本原理： 血吸蟲病患者糞便中蟲卵較少，直接涂片法不易檢出，毛蚴孵化法最常與自然沉淀法或尼龍篩集卵法聯(lián)用于血吸蟲感染的診斷。血吸蟲卵內(nèi)毛蚴在溫度2528，pH7.57.8的清水中，能在短時間內(nèi)孵化，孵出后毛蚴接近水面呈直線運(yùn)動。由于此法將較大量糞便經(jīng)水洗自然沉淀法或用尼龍絹篩集卵法濃集，再行毛蚴孵化，使之檢出率較一般方法顯著提高。 器材準(zhǔn)備器材準(zhǔn)備： a.120目尼龍袋 ,40目銅絲篩 b.孵化瓶或三角燒瓶 c.pH7.4的無氯清水 d.帶光源的恒溫箱 e.放大鏡 f.玻璃吸管 g.觀察毛蚴日光光源毛毛 蚴蚴 孵孵 化化 法法 操作方法操作方法： 將

4、自然沉淀法或尼龍篩集卵法收集的糞便沉渣，倒入孵化瓶內(nèi)，加調(diào)試好pH的清水（約30水溫）置瓶頸處，既后將孵化瓶移放在25有光照的條件下孵化毛蚴。孵育約48小時后取出檢查毛蚴，若為陰性，繼續(xù)孵化，于810小時及2024小時左右各再檢查一次，仍為陰性，則報告為陰性。檢查時面向光源，將孵化瓶移置在黑色背景下，用肉眼或擴(kuò)大鏡觀察，雙目平視，注意尋找接近水面1厘米水域處快速運(yùn)動的小白點(diǎn)，如見針尖大小、菱形、乳白色、半透明小白點(diǎn)，同時仔細(xì)觀察這些小白點(diǎn)的運(yùn)動特點(diǎn)（直線游動，碰壁迅速拐彎），即可能是毛蚴。且應(yīng)特別注意與水中其他原生動物（如草履蟲）相鑒別。若肉眼觀察鑒別困難，可用吸管吸出運(yùn)動的小白點(diǎn)，置于載玻片

5、上，用低倍鏡進(jìn)行鑒別，其基本形態(tài)特征是：梨形，體表有纖毛。如未發(fā)現(xiàn)毛蚴，可將孵化瓶中糞渣經(jīng)260目過篩濃集，用吸管吸取糞渣涂片在鏡下尋找蟲卵，這樣做可顯著提高檢出率（可能有部分蟲卵內(nèi)毛蚴發(fā)育不良而不能孵化出的緣故）。毛毛 蚴蚴 孵孵 化化 法法毛毛 蚴蚴 促促 孵孵 法法 將洗凈的糞渣用以下3種方法中的任意一種處理 a.糞便沉渣不加水，置2530環(huán)境中10h。 b.將糞便沉渣擠去多余水分，保持含水量80%左右，防止干燥，30保存24h。 c.糞便沉渣加生理鹽水，30避免保存2024h后濾去鹽水。 收集的糞渣放入三角瓶內(nèi)，或?qū)⒓S便置于吸水紙上，放在2030溫箱中過夜。檢查時，加熱水，2小時后就見

6、到孵出的毛蚴，采用此法，毛蚴孵出的時間較一致，數(shù)量也較多。處理后的糞渣，加水孵化，毛蚴便出現(xiàn)得早、齊、多，孵化8小時后，毛蚴孵化數(shù)量為孵化24小時毛蚴總數(shù)的98%左右，可提高檢驗(yàn)效果，這可能與蟲卵在外界進(jìn)一步發(fā)育成熟有關(guān)。 毛毛 蚴蚴 促促 孵孵 法法 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)： a. a.糞便必須新鮮，不能混有尿液。氣溫超過26時，糞便擱置24小時后，毛蚴孵出率大減，48小時后則不能孵出毛蚴。因此，若糞便不能及時孵化，可加生理鹽水，調(diào)成混懸液，置4冰箱內(nèi)12天，不影響孵出率。 b.毛蚴孵化的最適溫度為2528，10以下或30以上毛蚴不易孵出。 毛毛 蚴蚴 孵孵 化化 法法 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)： c.夏

7、秋季節(jié)溫度較高，為防止自然沉淀過程中，毛蚴過早孵出被倒掉，可用1.2%鹽水代替清水，以抑制毛蚴孵出，但最后孵化時仍需用去氯自來水。 d.河水、塘水中有原生動物，其形態(tài)及動態(tài)很像毛蚴，易于誤診，故做毛蚴孵化時，沉淀及孵化用水均需經(jīng)過處理殺滅水中原生動物。自來水中雖無原生動物，但往往有過多的余氯，對孵化不利，也需經(jīng)過測定余氯和脫氯處理。 毛毛 蚴蚴 孵孵 化化 法法 孵化用水的處理，一般將水至60以上便可殺滅水中原生動物。也可利用漂白粉或漂白粉精遇水后放出的游離氯殺滅水中原生動物。每100Kg水加漂白粉0.7g或漂白粉精0.34g，半小時測定水中氯含量，應(yīng)達(dá)0.71.0ppm，若低于此數(shù)值，應(yīng)補(bǔ)加

8、漂白粉精，如達(dá)到了上述標(biāo)準(zhǔn)，再作用1小時，便可殺死全部水中原生動物，已殺滅水中原生動物的水或自來水，使用前要測定余氯含量，若濃度在0.3ppm以上，則對毛蚴孵化不利，要脫去余氯方可使用，如貯水缸不加蓋。夏季經(jīng)6小時，冬季經(jīng)24小時，余氯便散逸殆盡。若急需應(yīng)用，每100Kg水中加硫代硫酸鈉約0.40.8g，攪勻，經(jīng)半小時后便可除去余氯，并進(jìn)一步沉淀澄清水質(zhì)。 毛毛 蚴蚴 孵孵 化化 法法 此法診斷血吸蟲病，查到毛蚴表明患者體內(nèi)有活的血吸蟲，是血吸蟲病原檢查最常用的方法，檢出率比自然沉淀法高。但操作較繁，費(fèi)時，且需有觀察和鑒別毛蚴的經(jīng)驗(yàn)，對于糞便中蟲卵較少的患者，有時需多次檢查才能查見毛蚴。毛毛

9、蚴蚴 孵孵 化化 法法日本血吸蟲毛蚴孵化法視頻 基本原理基本原理： 利用糞便定量或定性厚涂片，以增加視野中蟲卵數(shù)，可作蟲卵定量檢查。經(jīng)甘油和孔雀綠處理，使糞膜透明，從而使糞渣與蟲卵產(chǎn)生鮮明的對比，便于光線透過和鏡檢?？兹妇G則使視野光線變得柔和，以減少眼睛的疲勞。適用于檢查各種蠕蟲卵。方法簡便，操作過程中蟲卵不會散失。效果較好。過硬和過稀的糞便不宜使用本法。泡沫狀的糞便會在玻璃紙下形成許多微小氣泡，妨礙鏡檢。并可作蟲卵定量檢查。改改 良良 加加 藤藤 法法 材料準(zhǔn)備材料準(zhǔn)備： a.聚丙乙烯定量板（大小為40mm30mm1.37mm，?？诪?mm4mm）及刮棒 b.100目尼龍或金屬篩網(wǎng)片（約4c

10、m4cm） c.親水玻璃紙條（5cm2.6cm）浸泡于甘油孔雀綠溶液（3孔雀綠1ml加純甘油和水各100m1）中24小時 d.壓板 e.載玻片改改 良良 加加 藤藤 法法 操作方法操作方法： a.將篩網(wǎng)覆蓋在糞標(biāo)本上，刮取從篩孔擠溢出的糞便； b.將定量板緊貼于載玻片上，把刮棒上取得的糞便填滿?？?，刮去多余部分，掀起定量板，在糞樣上覆蓋含孔雀綠甘油的玻璃紙條，展平后用壓板加壓，糞樣即在玻璃紙和玻片之間鋪成橢圓形； c.3037溫箱中透明0.51h后鏡檢并作蟲卵計(jì)數(shù)； d.每克糞便蟲卵數(shù)（EPG）為每板蟲卵總數(shù)乘以24，再乘以糞便性狀系數(shù)。改改 良良 加加 藤藤 法法注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)： a.糞膜要均勻鋪開，不宜過厚； b.透明時間要適度（尤對鉤蟲卵檢查，透明時間宜短，不要超過30分鐘）。若糞膜過厚，透明時間短，蟲卵難以發(fā)現(xiàn)，若透明時間過長，蟲卵則變形，也不易辨認(rèn)?；蛞蛳x卵也透明了，鏡檢時易漏檢。 c.在定量應(yīng)用中，為提高檢出率，要求每一樣本作3張加藤片。改改 良良 加加 藤藤 法法注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： 玻璃紙制備 將玻璃紙剪成大小約22mm30mm的小片，浸于甘油-孔雀綠溶液（含純甘油100ml，水100ml和3%孔雀綠1