食品理化檢驗(yàn)獸藥殘留

1、食品中獸藥殘留檢驗(yàn)食品中獸藥殘留檢驗(yàn) 一、概述一、概述 二、獸藥殘留的檢驗(yàn)二、獸藥殘留的檢驗(yàn) （一）獸藥和獸藥殘留的概念（一）獸藥和獸藥殘留的概念 【掌握掌握】典型的獸藥：典型的獸藥：是指用于預(yù)防和治療畜禽疾病的藥是指用于預(yù)防和治療畜禽疾病的藥物。但是，隨著集約化養(yǎng)殖生產(chǎn)的開展，一些化物。但是，隨著集約化養(yǎng)殖生產(chǎn)的開展，一些化學(xué)的、生物的藥用成分被開發(fā)成具有某些功效的學(xué)的、生物的藥用成分被開發(fā)成具有某些功效的動(dòng)物保健品或飼料添加劑動(dòng)物保健品或飼料添加劑，也屬于獸藥的范疇也屬于獸藥的范疇。獸藥的主要用途獸藥的主要用途：防病治病、促進(jìn)生長、提高生：防病治病、促進(jìn)生長、提高生產(chǎn)性能、改善動(dòng)物性食品的

2、品質(zhì)等。產(chǎn)性能、改善動(dòng)物性食品的品質(zhì)等。 一、概一、概 述述獸藥殘留：獸藥殘留：是指食品動(dòng)物用藥后，動(dòng)物性食品中含是指食品動(dòng)物用藥后，動(dòng)物性食品中含有的某種獸藥的原形或其代謝物以及與獸藥相關(guān)的有的某種獸藥的原形或其代謝物以及與獸藥相關(guān)的雜質(zhì)的殘留。雜質(zhì)的殘留。 獸藥殘留的來源：獸藥殘留的來源：v 治病用藥治病用藥v 飼料中加入的添加劑飼料中加入的添加劑v 動(dòng)物性食品保鮮動(dòng)物性食品保鮮另外，另外，休藥期休藥期( (是指自停止給藥到動(dòng)物獲準(zhǔn)屠宰或是指自停止給藥到動(dòng)物獲準(zhǔn)屠宰或其動(dòng)物性產(chǎn)品獲準(zhǔn)上市的間隔時(shí)間其動(dòng)物性產(chǎn)品獲準(zhǔn)上市的間隔時(shí)間) )過短，是造成過短，是造成動(dòng)物性食品獸藥殘留過量的另一個(gè)重要

3、原因。動(dòng)物性食品獸藥殘留過量的另一個(gè)重要原因。 (二二) 獸藥殘留的種類獸藥殘留的種類【掌握掌握】1.抗生素類藥物抗生素類藥物 這類藥物多為天然發(fā)酵產(chǎn)物，是臨床應(yīng)用最多的一類抗菌藥這類藥物多為天然發(fā)酵產(chǎn)物，是臨床應(yīng)用最多的一類抗菌藥物，如物，如青霉素類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、螺青霉素類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、螺旋霉素、鏈霉素、土霉素、金霉素等。旋霉素、鏈霉素、土霉素、金霉素等。青霉素類最容易引發(fā)過敏反應(yīng)，四環(huán)素類、鏈霉素有時(shí)也能青霉素類最容易引發(fā)過敏反應(yīng)，四環(huán)素類、鏈霉素有時(shí)也能引起過敏反應(yīng)：輕度時(shí)，短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)血壓下降、皮疹、身引起過敏反應(yīng)：輕度時(shí)，短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)血壓下

4、降、皮疹、身體發(fā)熱、血管神經(jīng)性水腫、血清病樣反應(yīng)等，嚴(yán)重者可能導(dǎo)體發(fā)熱、血管神經(jīng)性水腫、血清病樣反應(yīng)等，嚴(yán)重者可能導(dǎo)致過敏性休克甚至死亡。長期攝入含氨基糖苷類殘留超標(biāo)的致過敏性休克甚至死亡。長期攝入含氨基糖苷類殘留超標(biāo)的動(dòng)物性食品，可損害聽力及腎臟功能。動(dòng)物性食品，可損害聽力及腎臟功能。2.磺胺類藥物磺胺類藥物 主要用于抗菌消炎，主要用于抗菌消炎，如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺瞇、菌得清、新諾明等?；前凡[、菌得清、新諾明等。v 近年來，近年來，磺胺類藥物磺胺類藥物在動(dòng)物性食品中的殘留超標(biāo)在動(dòng)物性食品中的殘留超標(biāo)現(xiàn)象，在所有獸藥當(dāng)中現(xiàn)象，在所有獸藥當(dāng)中是最嚴(yán)重的是最嚴(yán)重

5、的。后果：后果：長期攝入含磺胺類藥物殘留的動(dòng)物性食品后，長期攝入含磺胺類藥物殘留的動(dòng)物性食品后，藥物可不斷在體內(nèi)蓄積，造成泌尿系統(tǒng)損傷，藥物可不斷在體內(nèi)蓄積，造成泌尿系統(tǒng)損傷，引起引起結(jié)晶尿、血尿、管型尿。結(jié)晶尿、血尿、管型尿。 3.3.硝基呋喃類藥物硝基呋喃類藥物 主要用于抗菌消炎主要用于抗菌消炎，如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。 v 危害：危害：主要是胃腸反應(yīng)和過敏反應(yīng)主要是胃腸反應(yīng)和過敏反應(yīng)。 劑量過大或腎功能不全者，可引起嚴(yán)重毒性反應(yīng)，主要表劑量過大或腎功能不全者，可引起嚴(yán)重毒性反應(yīng)，主要表現(xiàn)為周圍神經(jīng)炎、嗜酸性白細(xì)胞增多、溶血性貧血等。長期攝現(xiàn)為周

6、圍神經(jīng)炎、嗜酸性白細(xì)胞增多、溶血性貧血等。長期攝人可引起不可逆性末端神經(jīng)損害，如感覺異常、疼痛及肌肉萎人可引起不可逆性末端神經(jīng)損害，如感覺異常、疼痛及肌肉萎縮等。我國尚未制定硝基呋喃類藥物殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)?？s等。我國尚未制定硝基呋喃類藥物殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。 4.4.抗寄生蟲類藥物抗寄生蟲類藥物 主要用于驅(qū)蟲或殺蟲，如苯并咪唑、左旋咪唑、克主要用于驅(qū)蟲或殺蟲，如苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等。球酚、吡喹酮等。 v 危害：危害：致畸和致突變致畸和致突變對(duì)于妊娠期的孕婦有可能發(fā)生胎兒畸形，如短肢、兔對(duì)于妊娠期的孕婦有可能發(fā)生胎兒畸形，如短肢、兔唇等；對(duì)所有消費(fèi)者來說，可能由于其致突變作用使唇等；對(duì)所有

7、消費(fèi)者來說，可能由于其致突變作用使消費(fèi)者發(fā)生癌變和性染色體畸變，從而其后代有發(fā)生消費(fèi)者發(fā)生癌變和性染色體畸變，從而其后代有發(fā)生畸形的危險(xiǎn)?；蔚奈ｋU(xiǎn)。5.5.激素類藥物激素類藥物主要用于主要用于提高動(dòng)物的繁殖和加快生長發(fā)育速度提高動(dòng)物的繁殖和加快生長發(fā)育速度，使，使用于動(dòng)物的激素有性激素和皮質(zhì)激素，而以性激素用于動(dòng)物的激素有性激素和皮質(zhì)激素，而以性激素最常用，如孕酮、睪酮、雌二醇等。最常用，如孕酮、睪酮、雌二醇等。正常情況下，正常情況下，動(dòng)物性食品中天然存在的性激素含量動(dòng)物性食品中天然存在的性激素含量是很低的，因而不會(huì)干擾消費(fèi)者的激素代謝和生理是很低的，因而不會(huì)干擾消費(fèi)者的激素代謝和生理機(jī)能。

8、機(jī)能。但超標(biāo)的話但超標(biāo)的話，可能會(huì)影響消費(fèi)者的正常生理機(jī)能，可能會(huì)影響消費(fèi)者的正常生理機(jī)能，并具有一定的致癌性，可能導(dǎo)致兒童早熟、兒童發(fā)并具有一定的致癌性，可能導(dǎo)致兒童早熟、兒童發(fā)育異常、兒童異性趨向等。育異常、兒童異性趨向等。 （三）獸藥殘留的危害（三）獸藥殘留的危害v 毒性作用毒性作用急性中毒、慢性中毒、急性中毒、慢性中毒、“三致三致”（致癌、致畸、致突變）（致癌、致畸、致突變）v 耐藥性耐藥性動(dòng)物體內(nèi)耐藥性菌株通過食品傳遞給人，給治療帶來困難動(dòng)物體內(nèi)耐藥性菌株通過食品傳遞給人，給治療帶來困難。v 過敏反應(yīng)過敏反應(yīng)v 激素作用激素作用潛在致癌、兒童性早熟等潛在致癌、兒童性早熟等v 污染環(huán)境

9、影響生態(tài)污染環(huán)境影響生態(tài)獸藥排入環(huán)境后，仍然有活性，對(duì)土壤微生物、水生生物獸藥排入環(huán)境后，仍然有活性，對(duì)土壤微生物、水生生物等造成影響。等造成影響。（四）獸藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)（四）獸藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)v 獸藥最高殘留限量獸藥最高殘留限量(MRLVD)(MRLVD)： 是指某種獸藥在食物中或食物表面產(chǎn)生的最高允許獸藥殘是指某種獸藥在食物中或食物表面產(chǎn)生的最高允許獸藥殘留量留量(單位單位gkg，以鮮重計(jì)，以鮮重計(jì))。v 獸藥最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)獸藥最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn) 2002年農(nóng)業(yè)部頒布最新年農(nóng)業(yè)部頒布最新動(dòng)物性食品中最高殘留限量動(dòng)物性食品中最高殘留限量 不需要制定最高殘留限量的藥物：不需要制定最高

10、殘留限量的藥物：88種種 需要制定最高殘留限量的藥物：需要制定最高殘留限量的藥物：94種種 可以使用，但不得在食品中檢出的藥物：可以使用，但不得在食品中檢出的藥物：9種種 禁止使用，且不得在食品中檢出的藥物有：禁止使用，且不得在食品中檢出的藥物有：31種種 二、獸藥殘留的檢驗(yàn)二、獸藥殘留的檢驗(yàn) （一）檢驗(yàn)方法簡介（一）檢驗(yàn)方法簡介 （二）常見獸藥殘留的檢驗(yàn)（二）常見獸藥殘留的檢驗(yàn)（一）檢驗(yàn)方法簡介（一）檢驗(yàn)方法簡介常用方法常用方法氣相色譜法（氣相色譜法（GC): GC): 常規(guī)分析法常規(guī)分析法高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC)HPLC)：常規(guī)分析法，：常規(guī)分析法，最多采用最多采用酶聯(lián)免

11、疫法（酶聯(lián)免疫法（ELISA)ELISA)：選擇性強(qiáng)、靈敏度高、簡單、：選擇性強(qiáng)、靈敏度高、簡單、 快速快速儀器聯(lián)用法（儀器聯(lián)用法（GC-MS,LC-MS,TLC-MSGC-MS,LC-MS,TLC-MS等等) )（二）常見獸藥殘留的檢（二）常見獸藥殘留的檢驗(yàn)驗(yàn) 1.1.四環(huán)素類獸藥殘留的檢驗(yàn)四環(huán)素類獸藥殘留的檢驗(yàn) 2.2.磺胺類獸藥殘留的檢驗(yàn)磺胺類獸藥殘留的檢驗(yàn) 3.3.硝基呋喃類獸藥殘留的測(cè)定硝基呋喃類獸藥殘留的測(cè)定 4.4.鹽酸克倫特羅殘留的檢驗(yàn)鹽酸克倫特羅殘留的檢驗(yàn) 5.5.激素類獸藥的測(cè)定（了解）激素類獸藥的測(cè)定（了解） 殘留分析的樣品殘留分析的樣品q可食性組織及產(chǎn)品可食性組織及產(chǎn)品

12、肝、腎、肌肉、脂肪、皮膚、血液肝、腎、肌肉、脂肪、皮膚、血液奶、蛋奶、蛋其他加工食品其他加工食品q其他其他毛發(fā)、尿、糞便等毛發(fā)、尿、糞便等取樣方法取樣方法v代表性原則、隨機(jī)采樣代表性原則、隨機(jī)采樣v各種標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定各種標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定活體檢測(cè)活體檢測(cè)v一般采集毛發(fā)、血液、尿液和糞便一般采集毛發(fā)、血液、尿液和糞便屠宰場(chǎng)取樣屠宰場(chǎng)取樣v其他高濃度的樣本：肝、腎、膽汁、注射部位其他高濃度的樣本：肝、腎、膽汁、注射部位v排泄物：尿液排泄物：尿液樣本的收集樣本的收集樣本的貯存樣本的貯存容器材料容器材料v一般為玻璃或塑料一般為玻璃或塑料v硅烷化處理防止器皿壁對(duì)痕量殘留組分的吸附硅烷化處理防止器皿壁對(duì)痕量殘留組分的吸附

13、塑料吸附脂溶性物質(zhì)塑料吸附脂溶性物質(zhì)玻璃表面吸附堿性物質(zhì)玻璃表面吸附堿性物質(zhì)硅烷化處理是以有機(jī)硅烷水溶液為主要成分對(duì)金屬或非金屬材料硅烷化處理是以有機(jī)硅烷水溶液為主要成分對(duì)金屬或非金屬材料進(jìn)行表面處理的過程。進(jìn)行表面處理的過程。 預(yù)處理預(yù)處理v勻化、縮分、過篩、離心、過濾、防腐、抑制降解等勻化、縮分、過篩、離心、過濾、防腐、抑制降解等 1. 1. 四環(huán)素類藥物殘留的檢驗(yàn)四環(huán)素類藥物殘留的檢驗(yàn)v常用四環(huán)素類藥物有：四環(huán)素、土霉素、金霉素常用四環(huán)素類藥物有：四環(huán)素、土霉素、金霉素v測(cè)定方法測(cè)定方法 GB/T 5009.116-2003 (HPLC法法) 畜、禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量的測(cè)定

14、畜、禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量的測(cè)定 HPLC（高效液相色譜法）（高效液相色譜法）TLC（薄層色譜法）（薄層色譜法） ELISA（酶聯(lián)免疫法）（酶聯(lián)免疫法）四環(huán)素類藥物殘留的檢驗(yàn)四環(huán)素類藥物殘留的檢驗(yàn)(HPLC法）法）( (一一) ) 原理原理 樣品經(jīng)樣品經(jīng)提取提取，微孔濾膜過濾后直接，微孔濾膜過濾后直接進(jìn)樣進(jìn)樣，用反，用反相色譜分離，相色譜分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)紫外檢測(cè)器檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，以保留時(shí)間定性，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量，也可以用標(biāo)準(zhǔn)加入法定量標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量，也可以用標(biāo)準(zhǔn)加入法定量。 配置四環(huán)素類藥物的混合配置四環(huán)素類藥物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線

15、計(jì)算樣品中各殘留藥物的含量。，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中各殘留藥物的含量。 標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量：標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量：配置四環(huán)素類藥物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶配置四環(huán)素類藥物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中各殘液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中各殘留藥物的含量。留藥物的含量。 標(biāo)準(zhǔn)加入法定量標(biāo)準(zhǔn)加入法定量：在待測(cè)食品的樣品中，加入配置：在待測(cè)食品的樣品中，加入配置好的四環(huán)素類藥物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液后，經(jīng)過提取、好的四環(huán)素類藥物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液后，經(jīng)過提取、離心等前處理后，繪制工作曲線，根據(jù)工作曲線計(jì)離心等前處理后，繪制工作曲線，根據(jù)工作曲線計(jì)算樣品中各殘留藥物的含量。算樣品中各殘留藥物的含量。 國標(biāo)

16、采用：標(biāo)準(zhǔn)加入法定量（準(zhǔn)確度高）國標(biāo)采用：標(biāo)準(zhǔn)加入法定量（準(zhǔn)確度高） （二）樣品處理（二）樣品處理 取取5.00g切碎的肉樣食品，置于切碎的肉樣食品，置于50ml的錐形瓶中，加的錐形瓶中，加入入25ml的的5%高氯酸高氯酸振蕩振蕩提取提取10min，提取液經(jīng)，提取液經(jīng)離心離心后，取后，取上清液上清液經(jīng)經(jīng)0.45m濾膜過濾濾膜過濾.（三）分析步驟（三）分析步驟（1 1）色譜條件）色譜條件 v色譜柱：色譜柱：ODS-C18 柱柱(6.2 mm15 cm, 5m) ；v檢測(cè)器：檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；波長：紫外檢測(cè)器；波長：355 nm；v流動(dòng)相：流動(dòng)相：乙腈乙腈 + 0.01mol/L NaH2PO4

17、4（pH 2.5）= 35:65v柱溫：柱溫：室溫；室溫；流速：流速：1.0ml/min （2）混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置）混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置土霉素土霉素(OTC)(OTC)標(biāo)準(zhǔn)溶液：標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取土霉素稱取土霉素0.0100g（精確到（精確到0.0001g），用），用0.1mol/L的鹽酸溶液溶解，并定容到的鹽酸溶液溶解，并定容到10mL；四環(huán)素（四環(huán)素（TC)TC)標(biāo)準(zhǔn)溶液：標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取四環(huán)素稱取四環(huán)素0.0100g0.0100g（精確到（精確到0.001g0.001g），用），用0.01mol/L0.01mol/L的鹽酸溶液溶解，并定容到的鹽酸溶液溶解，并定容到10mL10mL；金霉素（金霉素

18、（CTC)CTC)標(biāo)準(zhǔn)溶液：標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取金霉素稱取金霉素0.0100g0.0100g（精確到（精確到0.001g0.001g），）， 溶于蒸餾水中并定容到溶于蒸餾水中并定容到10mL10mL。 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：取取標(biāo)準(zhǔn)溶液各標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.00 ml1.00 ml，標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液2.00ml,2.00ml,置于置于10 ml10 ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度。此溶液每毫容量瓶中，加蒸餾水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四環(huán)素各升含土霉素、四環(huán)素各0.1mg0.1mg，金霉素，金霉素0.2mg0.2mg，臨用時(shí)現(xiàn)配。，臨用時(shí)現(xiàn)配。（3 3）工作曲線）工作曲線 取取7份切碎的肉樣食品

19、，每份份切碎的肉樣食品，每份5.00g，分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液25,50,100,150,200,250 g（含土霉素、四環(huán)素各為（含土霉素、四環(huán)素各為2.5,5.0,10.0,15.0,20.0,25.0 g)；含金霉素；含金霉素 0,5.0,10.0,20.0,30.0,40.0,50.0g )，按（二）樣品處理的方，按（二）樣品處理的方法操作，峰高為縱坐標(biāo)，以抗生素含量為橫坐標(biāo)，繪制工作法操作，峰高為縱坐標(biāo)，以抗生素含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線曲線。 (4(4）試樣測(cè)定）試樣測(cè)定 取經(jīng)取經(jīng)0.45m0.45m濾膜過濾的待測(cè)液濾膜過濾的待測(cè)液10L進(jìn)樣，記錄峰高，從工進(jìn)樣

20、，記錄峰高，從工作曲線上查含量。作曲線上查含量。( (四四) )結(jié)果計(jì)算結(jié)果計(jì)算式中：式中：X X試樣中抗生素含量，單位為試樣中抗生素含量，單位為mg/kg mg/kg A A試樣溶液測(cè)得抗生素質(zhì)量，單位為試樣溶液測(cè)得抗生素質(zhì)量，單位為g g m m試樣質(zhì)量，單位為試樣質(zhì)量，單位為g g （五）方法說明（五）方法說明（1 1）流動(dòng)相中加）流動(dòng)相中加NaHNaH2 2POPO4 4及調(diào)節(jié)及調(diào)節(jié)pHpH值目的：改善四環(huán)素類藥物值目的：改善四環(huán)素類藥物在在C C1818柱上的分離度和峰形；柱上的分離度和峰形；（2 2）用）用5%5%高氯酸處理樣品時(shí)，當(dāng)高氯酸處理樣品時(shí)，當(dāng)PHPH值低于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)時(shí)

21、，值低于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)以陽離子形式存在，高氯酸可與蛋白質(zhì)陽離子形成蛋白質(zhì)以陽離子形式存在，高氯酸可與蛋白質(zhì)陽離子形成不溶性鹽而沉淀，通過離心除去；不溶性鹽而沉淀，通過離心除去；（3 3）本方法測(cè)定四環(huán)素類藥物的加標(biāo)回收率分別為：）本方法測(cè)定四環(huán)素類藥物的加標(biāo)回收率分別為：OTCOTC：82%-93%82%-93%，TC:80%-90%,CTC:80%-95%;TC:80%-90%,CTC:80%-95%; (4 (4）出峰順序?yàn)橥撩顾兀ǎ┏龇屙樞驗(yàn)橥撩顾兀∣TC)OTC)、四環(huán)素（、四環(huán)素（TC)TC)、金霉素（、金霉素（CTC)CTC) 二、磺胺類藥物殘留的測(cè)定二、磺胺類藥物殘留的測(cè)

22、定 （一）概述（一）概述 （二）測(cè)定方法（掌握）（二）測(cè)定方法（掌握）磺胺類藥物結(jié)構(gòu)磺胺類藥物結(jié)構(gòu) 磺胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)為磺胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)為對(duì)氨苯磺酰胺對(duì)氨苯磺酰胺，簡，簡稱磺胺的衍生物稱磺胺的衍生物, ,具有芳氨基和磺酰胺基，多具有芳氨基和磺酰胺基，多為兩性化合物。為兩性化合物。結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)P118常用的有：常用的有：磺胺嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺甲磺胺嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶等。氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶等。 磺胺類藥物對(duì)食品的污染磺胺類藥物對(duì)食品的污染v使用過磺胺類藥物的動(dòng)物，如果不遵守適當(dāng)?shù)男菟幤?，其肌使用過磺胺類藥物的動(dòng)物，如果不遵守適當(dāng)?shù)男菟幤?，其肌肉組織、蛋和奶中就

23、會(huì)被殘留的磺胺類藥物污染；短期大劑肉組織、蛋和奶中就會(huì)被殘留的磺胺類藥物污染；短期大劑量或長期小劑量給藥，很容易造成磺胺類藥物在動(dòng)物各組織量或長期小劑量給藥，很容易造成磺胺類藥物在動(dòng)物各組織中蓄積；中蓄積；v當(dāng)飼料或飲水被磺胺類藥物污染后，也可導(dǎo)致動(dòng)物性食品中當(dāng)飼料或飲水被磺胺類藥物污染后，也可導(dǎo)致動(dòng)物性食品中磺胺類藥物殘留量嚴(yán)重超標(biāo)；磺胺類藥物殘留量嚴(yán)重超標(biāo)；v很多研究表明豬肉及其制品中磺胺藥物超標(biāo)現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，很多研究表明豬肉及其制品中磺胺藥物超標(biāo)現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，特別是致癌性的磺胺二甲基嘧啶殘留給人類的健康帶來了威特別是致癌性的磺胺二甲基嘧啶殘留給人類的健康帶來了威脅。脅。食品中磺胺類藥物的

24、最高殘留限量食品中磺胺類藥物的最高殘留限量v英、美等國家對(duì)磺胺類藥物在肉類及乳品中的允許殘留量限英、美等國家對(duì)磺胺類藥物在肉類及乳品中的允許殘留量限制為制為100 gkg-1；v歐盟第歐盟第675/92675/92號(hào)令中規(guī)定了，在肉類及牛奶中磺胺的最大殘?zhí)柫钪幸?guī)定了，在肉類及牛奶中磺胺的最大殘留總量不得超過留總量不得超過100 gkg-1；v日本要求的最高殘留限量更嚴(yán)格，單個(gè)磺胺殘留限量為日本要求的最高殘留限量更嚴(yán)格，單個(gè)磺胺殘留限量為20 20 ggkgkg-1 -1 ，最大殘留總量不得超過，最大殘留總量不得超過100 gkg-1；v我國對(duì)磺胺類藥物在肉類及乳品中的允許殘留量限制為我國對(duì)磺胺

25、類藥物在肉類及乳品中的允許殘留量限制為100 gkg-1。 （二）測(cè)定方法（二）測(cè)定方法測(cè)定方法測(cè)定方法高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLCHPLC法）：最常用法）：最常用氣相色譜法（氣相色譜法（GC)GC)TLC（薄層色譜法）（薄層色譜法） ELISA（酶聯(lián)免疫法）（酶聯(lián)免疫法）分光光度法分光光度法 HPLC法測(cè)定磺胺類藥物殘留法測(cè)定磺胺類藥物殘留1 1、原理、原理 動(dòng)物性食品樣品經(jīng)過動(dòng)物性食品樣品經(jīng)過預(yù)處理預(yù)處理后，用后，用流動(dòng)相溶流動(dòng)相溶解解，所得樣液用，所得樣液用HPLC-HPLC-紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器檢測(cè)。與標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)。與標(biāo)準(zhǔn)比較，用比較，用保留時(shí)間定性、標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量保留時(shí)間定性

26、、標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。 2 2、樣品的預(yù)處理、樣品的預(yù)處理 提取凈化濃縮提?。禾崛。夯前奉愃幬锊灰兹苡诜菢O性溶劑，而在極磺胺類藥物不易溶于非極性溶劑，而在極性較大的溶劑中溶解性較好，一般常用乙腈等提性較大的溶劑中溶解性較好，一般常用乙腈等提??；??；凈化：凈化：在乙腈提取的上清液中，加入適量在乙腈提取的上清液中，加入適量正己烷正己烷振蕩振蕩除去除去樣品中的樣品中的脂溶性雜質(zhì)脂溶性雜質(zhì)，離心，離心，棄去正己棄去正己烷烷；下層液體加入；下層液體加入正丙醇正丙醇適量，于適量，于50下下減壓干減壓干燥燥，加一定量，加一定量95%乙腈溶解殘留物，并過乙腈溶解殘留物，并過過氧化過氧化鋁鋁B小柱凈化小柱凈化；用；

27、用95%乙腈洗脫雜質(zhì)，再用適量乙腈洗脫雜質(zhì)，再用適量70%乙腈洗脫，收集洗脫液；乙腈洗脫，收集洗脫液；濃縮：濃縮：在洗脫液中加入適量正丙醇，在洗脫液中加入適量正丙醇， 50下減下減壓干燥，然后再準(zhǔn)確加入一定量的流動(dòng)相溶解，壓干燥，然后再準(zhǔn)確加入一定量的流動(dòng)相溶解，得到樣品處理液。得到樣品處理液。3 3、色譜條件、色譜條件v色譜柱：色譜柱：ODS-C18(4.6 mm250 mm)柱；柱；v檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；v波長：波長：270 nm；v進(jìn)樣量：進(jìn)樣量：20 L； v柱溫：柱溫：35；v流動(dòng)相：乙腈流動(dòng)相：乙腈+甲醇甲醇+水水+乙酸乙酸= 2:2:9:0.2；v流速：流速：

28、1.0ml/min4 4、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 準(zhǔn)確準(zhǔn)確稱取各磺胺類獸藥對(duì)照品稱取各磺胺類獸藥對(duì)照品于容量瓶中，以于容量瓶中，以甲醇定容作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，吸取各標(biāo)準(zhǔn)貯備液，甲醇定容作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，吸取各標(biāo)準(zhǔn)貯備液，以甲醇稀釋至以甲醇稀釋至質(zhì)量濃度為質(zhì)量濃度為0-2.0mg/L0-2.0mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)系列，的標(biāo)準(zhǔn)系列，各取各取20L20L進(jìn)樣分析進(jìn)樣分析，根據(jù)，根據(jù)峰面積與相應(yīng)的質(zhì)量峰面積與相應(yīng)的質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸濃度進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5、樣品的測(cè)定、樣品的測(cè)定 將處理好的待測(cè)樣品，在將處理好的待測(cè)樣品，在3所述的色譜條所述的色譜條件下，用件下，用HPLC-

29、紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器檢測(cè)，與標(biāo)準(zhǔn)比檢測(cè)，與標(biāo)準(zhǔn)比較，用較，用保留時(shí)間定性、標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量保留時(shí)間定性、標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。硝基呋喃類獸藥殘留的測(cè)定硝基呋喃類獸藥殘留的測(cè)定 （一）概述（一）概述 （二）測(cè)定方法（掌握）（二）測(cè)定方法（掌握）一、概述一、概述v硝基呋喃類藥物包括硝基呋喃類藥物包括：呋喃唑酮、呋喃西林、呋：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。喃妥因等。v國際法典委員會(huì)、中國和歐美等大多數(shù)國家國際法典委員會(huì)、中國和歐美等大多數(shù)國家禁止禁止使用此類藥物使用此類藥物，在動(dòng)物性食品和飼料中不得檢出在動(dòng)物性食品和飼料中不得檢出：硝基呋喃類藥物和代謝物能使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生癌變硝基呋喃類藥物和代謝物能使實(shí)驗(yàn)動(dòng)

30、物發(fā)生癌變和基因突變。和基因突變。測(cè)定方法測(cè)定方法高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLCHPLC法）：最常用法）：最常用ELISA（酶聯(lián)免疫法）：快速篩選檢驗(yàn)（酶聯(lián)免疫法）：快速篩選檢驗(yàn)LC-MSLC-MS法（液質(zhì)連用）法（液質(zhì)連用） 一、原理一、原理 動(dòng)物性食品樣品經(jīng)過動(dòng)物性食品樣品經(jīng)過預(yù)處理預(yù)處理后，用后，用流動(dòng)相溶解流動(dòng)相溶解，過氧化鋁小柱后供過氧化鋁小柱后供HPLCHPLC檢測(cè)。與標(biāo)準(zhǔn)比較，用檢測(cè)。與標(biāo)準(zhǔn)比較，用保留時(shí)間定性、標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量保留時(shí)間定性、標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。HPLC法測(cè)定畜禽肉中呋喃唑酮?dú)埩舴y(cè)定畜禽肉中呋喃唑酮?dú)埩舴Q取適量畜禽肉樣品，按稱取適量畜禽肉樣品，按1：1.5的

31、的比例加入比例加入C18，混勻后裝入玻璃層，混勻后裝入玻璃層析柱中；析柱中；用正己烷淋洗，去除脂肪；用正己烷淋洗，去除脂肪；再用乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，再用乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，在在5560下減壓干燥濃縮至干；下減壓干燥濃縮至干；加少量流動(dòng)相溶解殘?jiān)?，過氧化鋁加少量流動(dòng)相溶解殘?jiān)^氧化鋁小柱凈化，洗脫液供小柱凈化，洗脫液供HPLC測(cè)定。測(cè)定。二、樣品的預(yù)處理二、樣品的預(yù)處理（1）色譜條件）色譜條件 色譜柱：色譜柱：ODS-C18 柱柱(250 mm4.6 cm, 5m) ；檢測(cè)器：檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；波長：紫外檢測(cè)器；波長：367 nm；流動(dòng)相：流動(dòng)相：乙腈乙腈 + 0.015mol/

32、L H3PO4= 2:8流速：流速：0.71.0ml/ min （2）樣品測(cè)定）樣品測(cè)定 用流動(dòng)相稀釋標(biāo)準(zhǔn)系列，經(jīng)氧化鋁小柱凈化，用流動(dòng)相稀釋標(biāo)準(zhǔn)系列，經(jīng)氧化鋁小柱凈化，分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)和樣品凈化液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)和樣品凈化液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。三、樣品的測(cè)定三、樣品的測(cè)定四、方法說明四、方法說明本法適用于本法適用于雞的肌肉、肝、腎組織和魚肉組織中呋雞的肌肉、肝、腎組織和魚肉組織中呋喃唑酮?dú)埩魴z測(cè)喃唑酮?dú)埩魴z測(cè)；呋喃唑酮的檢出限和回收率：雞的肌肉組織呋喃唑酮的檢出限和回收率：雞的肌肉組織10g/kg；加標(biāo)回收率為；加標(biāo)回收率為80%110%，魚肉組織，魚肉

33、組織25g/kg，70%120%。C18的去垢效應(yīng)和巨大的表面積，濃縮了傳統(tǒng)的樣的去垢效應(yīng)和巨大的表面積，濃縮了傳統(tǒng)的樣品前處理中所需的樣品勻化、組織細(xì)胞裂解、提取、品前處理中所需的樣品勻化、組織細(xì)胞裂解、提取、凈化等過程，避免了樣品在上述處理中待測(cè)物的損凈化等過程，避免了樣品在上述處理中待測(cè)物的損失。失。 鹽酸克倫特羅殘留的檢驗(yàn)鹽酸克倫特羅殘留的檢驗(yàn) （一）概述（一）概述 （二）測(cè)定方法（掌握）（二）測(cè)定方法（掌握）（一）概述（一）概述v鹽酸克倫特羅，俗稱鹽酸克倫特羅，俗稱“瘦肉精瘦肉精”。它曾經(jīng)作為藥。它曾經(jīng)作為藥物用于治療支氣管哮喘，在飼料中添加可以促進(jìn)物用于治療支氣管哮喘，在飼料中添加

34、可以促進(jìn)動(dòng)物生長、提高瘦肉率，后由于其副作用太大而動(dòng)物生長、提高瘦肉率，后由于其副作用太大而遭禁用。遭禁用。v分子式：分子式：C12H18Cl2N2O-HCl，白色或類白色的結(jié)，白色或類白色的結(jié)晶粉末，無臭、味苦，熔點(diǎn)晶粉末，無臭、味苦，熔點(diǎn)161161，溶于水、乙，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。 v化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，一般方法不能將其破壞一般方法不能將其破壞，含有瘦，含有瘦肉精的肉制品在加工過程中肉精的肉制品在加工過程中經(jīng)經(jīng)100100沸水煮、燒沸水煮、燒烤和微波處理等過程，其殘留并不減少烤和微波處理等過程，其殘留并不減少。v瘦肉精的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用瘦肉精

35、的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用 發(fā)現(xiàn)：發(fā)現(xiàn)：上世紀(jì)上世紀(jì)8080年代初，美國脂胺公司的研究人年代初，美國脂胺公司的研究人員意外地發(fā)現(xiàn)，將一定量的員意外地發(fā)現(xiàn)，將一定量的鹽酸克倫特羅添加在飼鹽酸克倫特羅添加在飼料中料中，能夠改變營養(yǎng)物質(zhì)的代謝途徑，促進(jìn)動(dòng)物肌，能夠改變營養(yǎng)物質(zhì)的代謝途徑，促進(jìn)動(dòng)物肌肉特別是骨胳肌蛋白質(zhì)的合成，同時(shí)對(duì)脂肪合成有肉特別是骨胳肌蛋白質(zhì)的合成，同時(shí)對(duì)脂肪合成有一定的抑制作用，從而一定的抑制作用，從而可以促進(jìn)動(dòng)物生長，增加瘦可以促進(jìn)動(dòng)物生長，增加瘦肉率肉率，并根據(jù)一定試驗(yàn)得出，如果在飼料中添加適，并根據(jù)一定試驗(yàn)得出，如果在飼料中添加適量的鹽酸克倫特羅，可以提高飼料轉(zhuǎn)化率、生長速量的鹽酸克倫特

36、羅，可以提高飼料轉(zhuǎn)化率、生長速率、胴體瘦肉率率、胴體瘦肉率1010以上。以上。v應(yīng)用：應(yīng)用：所以，當(dāng)時(shí)認(rèn)為這是一種不可多得的飼料所以，當(dāng)時(shí)認(rèn)為這是一種不可多得的飼料藥物添加劑，并在世界各地進(jìn)行推廣應(yīng)用藥物添加劑，并在世界各地進(jìn)行推廣應(yīng)用; 我國我國也于也于80年代后期，在一些大專院校、科研院所進(jìn)年代后期，在一些大專院校、科研院所進(jìn)行了研發(fā)試驗(yàn)和推廣試驗(yàn)，行了研發(fā)試驗(yàn)和推廣試驗(yàn)，經(jīng)過證明其作用效果經(jīng)過證明其作用效果十分明顯，十分明顯，并把鹽酸克倫特羅簡稱瘦肉精并把鹽酸克倫特羅簡稱瘦肉精。雖然。雖然這種飼料添加劑一直沒有得到國家主管部門的認(rèn)這種飼料添加劑一直沒有得到國家主管部門的認(rèn)可，但是在利益的

37、驅(qū)使下，我國許多地區(qū)的飼料可，但是在利益的驅(qū)使下，我國許多地區(qū)的飼料加工企業(yè)和養(yǎng)殖戶都開始推廣應(yīng)用。加工企業(yè)和養(yǎng)殖戶都開始推廣應(yīng)用。v作用：作用： 能使豬提高生長速度，增加瘦肉率，豬毛色紅能使豬提高生長速度，增加瘦肉率，豬毛色紅潤光亮，收腹，賣相好；屠宰后，肉色鮮紅，脂潤光亮，收腹，賣相好；屠宰后，肉色鮮紅，脂肪層極薄，往往是皮貼著瘦肉，瘦肉豐滿。肥豬肪層極薄，往往是皮貼著瘦肉，瘦肉豐滿。肥豬飼喂瘦肉精后，逐漸發(fā)生四肢震顫無力，心肌肥飼喂瘦肉精后，逐漸發(fā)生四肢震顫無力，心肌肥大心力衰竭等毒副作用。大心力衰竭等毒副作用。 瘦肉精中毒事件瘦肉精中毒事件 第一例中毒事件第一例中毒事件發(fā)生在發(fā)生在西班

38、牙西班牙，據(jù)報(bào)道，據(jù)報(bào)道19901990年，西班年，西班牙有牙有4343個(gè)家庭個(gè)家庭135135人因人因食用飼喂瘦肉精的牛肝食用飼喂瘦肉精的牛肝后發(fā)生食物中后發(fā)生食物中毒現(xiàn)象；毒現(xiàn)象； 我國最早我國最早的瘦肉精中毒事件的瘦肉精中毒事件發(fā)生在香港發(fā)生在香港，19981998年年5 5月，月，香港有香港有1717名居民因食用內(nèi)地供應(yīng)的豬內(nèi)臟而致中毒，同時(shí)名居民因食用內(nèi)地供應(yīng)的豬內(nèi)臟而致中毒，同時(shí)廣東省高明市人民醫(yī)院也在廣東省高明市人民醫(yī)院也在1 1周內(nèi)接待了例因喝豬肺湯而周內(nèi)接待了例因喝豬肺湯而中毒的患者。從此以后，因食用添加瘦肉精飼喂動(dòng)物產(chǎn)品中毒的患者。從此以后，因食用添加瘦肉精飼喂動(dòng)物產(chǎn)品而中

39、毒的事件，就接連不斷地在全世界出現(xiàn)了。而中毒的事件，就接連不斷地在全世界出現(xiàn)了。 v在我國在我國1999年年10月月6日，浙江省嘉興市日，浙江省嘉興市57人中毒；人中毒；v2000年年4月月14日，廣東博羅縣龍華鎮(zhèn)日，廣東博羅縣龍華鎮(zhèn)30人中毒；人中毒；v2000年年10月月9日，在香港有日，在香港有57人中毒；人中毒； v2001年年11月月7日，廣東河源發(fā)生大規(guī)模中毒事件，日，廣東河源發(fā)生大規(guī)模中毒事件，有有747人中毒；人中毒； 這樣就引起了人們對(duì)瘦肉精毒性的研究和關(guān)注。這樣就引起了人們對(duì)瘦肉精毒性的研究和關(guān)注。v中毒的臨床表現(xiàn)中毒的臨床表現(xiàn) 急性中毒有心悸，面頸、四肢肌肉顫動(dòng)，手急性中

40、毒有心悸，面頸、四肢肌肉顫動(dòng)，手抖甚至不能站立，頭暈，乏力，原有心律失常的抖甚至不能站立，頭暈，乏力，原有心律失常的患者更容易發(fā)生反應(yīng)，心動(dòng)過速，室性早搏；含患者更容易發(fā)生反應(yīng)，心動(dòng)過速，室性早搏；含“瘦肉精瘦肉精”的食品對(duì)心臟病、高血壓患者、老年的食品對(duì)心臟病、高血壓患者、老年人的危害更大。人的危害更大。v有最高殘留限量：有最高殘留限量： FDA和和WHO規(guī)定：規(guī)定：肉肉0.2g/kg、肝、肝0.6g/kg、 腎腎0.6g/kg、脂肪、脂肪0.2g/kg、奶、奶0.05g/kg. 我國規(guī)定：我國規(guī)定：馬、牛肌肉馬、牛肌肉0.1g/kg，牛奶，牛奶0.05g/kg 肝、腎肝、腎0.5g/kg測(cè)

41、定方法測(cè)定方法GC-MSGC-MS法（氣質(zhì)連用）（國標(biāo)第一法）法（氣質(zhì)連用）（國標(biāo)第一法）高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLCHPLC法）：第二法（自學(xué)）法）：第二法（自學(xué)）ELISAELISA（酶聯(lián)免疫法）：第三法（酶聯(lián)免疫法）：第三法檢測(cè)方法檢測(cè)方法 GB/T 5009.192-2003 動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定（第一法）（第一法）GC-MS 法法 一、原理一、原理 將肉類樣品剪碎，經(jīng)過提取、凈化處理后，將肉類樣品剪碎，經(jīng)過提取、凈化處理后，經(jīng)經(jīng)N,O-N,O-雙三甲基硅烷三氟乙酰胺（雙三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA)BSTFA)衍生衍生后用后

42、用GC-MSGC-MS測(cè)定。以美托洛爾為內(nèi)標(biāo)物，用內(nèi)標(biāo)測(cè)定。以美托洛爾為內(nèi)標(biāo)物，用內(nèi)標(biāo)法定量。法定量。 二、樣品處理二、樣品處理（1 1）提?。海┨崛。?準(zhǔn)確稱取適量準(zhǔn)確稱取適量肉樣肉樣，加加一定量一定量0.1mol/L0.1mol/L高氯酸勻漿高氯酸勻漿，超，超聲波聲波提取提取后置于后置于8080水浴中加熱，冷卻水浴中加熱，冷卻后離心。后離心。取取上清液上清液，沉淀用沉淀用0.1mol/L0.1mol/L高氯酸溶液洗滌高氯酸溶液洗滌，再離心，合并，再離心，合并上層清液上層清液，調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)PH=9.5PH=9.50.10.1，若有沉淀，再離心。在若有沉淀，再離心。在上清液上清液中中加入加入NaClNaCl，混勻，混勻，加入異丙醇加入異丙醇- -乙酸乙酯（乙酸乙酯（40+6040+60），），振蕩振蕩提取提取。取上層有機(jī)相，下層水相用異丙醇取上層有機(jī)相，下層水相用異丙醇- -乙酸乙酯（乙酸乙酯（40+6040+60）再）再提取一次，提取一次，合并