第27章腸道病毒

1、第27章 腸道病毒 腸道病毒具有以下共同特點：病毒體直徑約27nm，衣殼為20面體立體對稱，無包膜；核酸類型為ssRNA，起mRNA作用，有感染性；衣殼殼粒由VP1、VP2、VP3和VP4 4種不同結(jié)構(gòu)蛋白組成。VP1、VP2和VP3暴露在病毒體表面，是抗體結(jié)合的位點；VP4在核心內(nèi)部與RNA結(jié)合；耐乙醚和酸，pH3時穩(wěn)定；增殖時是在宿主細(xì)胞漿內(nèi)復(fù)制，以破胞形式釋放；引起人類多種疾病，如麻痹性疾病、無菌性腦膜炎、心肌損傷、腹瀉和皮疹等 第一節(jié) 脊髓灰質(zhì)炎病毒脊髓灰質(zhì)炎病毒引起的脊髓灰質(zhì)炎，是一種危害中樞神經(jīng)系統(tǒng)的傳染病。病毒破壞脊髓灰質(zhì)前角運(yùn)動神經(jīng)元，導(dǎo)致肢體肌肉馳緩性麻痹，又稱為小兒麻痹。但

2、多數(shù)兒童感染后為隱性感染，只有約11000的感染者病毒侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)。脊髓灰質(zhì)炎分布廣泛，世界各地均有流行。自50年代末期開展活疫苗預(yù)防以來，發(fā)病率逐年大幅度下降。在某些發(fā)達(dá)國家已基本被消滅 （一）生物學(xué)性狀 脊髓灰質(zhì)炎病毒是球形，二十面體立體對稱，無包膜RNA病毒 可在猴腎、人胚腎、人羊膜細(xì)胞中培養(yǎng)增殖，形成典型溶細(xì)胞型CPE，細(xì)胞變圓、壞死及脫落。 利用中和試驗可將脊髓灰質(zhì)炎病毒分為型、型、型。3個型別間無交叉反應(yīng) 抵抗力 脊髓灰質(zhì)炎病毒對外界因素抵抗力較強(qiáng)，在糞便及污水中可存活數(shù)周，在酸性環(huán)境中較穩(wěn)定，對胃酸及膽汁抵抗力較強(qiáng)，因而易于通過胃、十二指腸。這些特點都促進(jìn)了病毒的傳播。 56

3、經(jīng)30min可滅活；但1mol/L 的2Mg可顯著提高病毒對熱的抵抗力 二、致病性和免疫性 脊髓灰質(zhì)炎病毒經(jīng)口感染，傳染源為患者及無癥狀的隱性感染者，傳播方式主要是通過糞-口途徑。 病毒侵入機(jī)體，首先與宿主細(xì)胞膜受體結(jié)合，先在咽部、扁桃體、頸部淋巴結(jié)、小腸粘膜上皮細(xì)胞和腸系膜淋巴結(jié)內(nèi)增殖，90%以上感染者病毒只限于腸，引起隱性感染 少數(shù)人病毒可經(jīng)淋巴系統(tǒng)入血形成第1次病毒血癥。病毒隨血流擴(kuò)散至全身淋巴組織和其他易感的非神經(jīng)組織內(nèi)進(jìn)一步繁殖，并再次入血形成第2次病毒血癥。此時病毒可突破血腦屏障，侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)。約有1%的人出現(xiàn)臨床癥狀。 表現(xiàn)為如下幾種類型：頓挫感染型是最常見病型，病毒只在侵入

4、局部增殖或增殖后入血，但不侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)?；颊叱霈F(xiàn)發(fā)燒、不適、嗜睡、頭痛、惡心、嘔吐、便秘或咽部疼痛等癥狀，幾天內(nèi)即可恢復(fù)；無菌性腦膜炎型患者除有上述癥狀外，還出現(xiàn)頸背部肌肉強(qiáng)直和疼痛，2-10d后可完全恢復(fù)健康；麻痹型病毒在脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元內(nèi)增殖，損害神經(jīng)細(xì)胞，引起肌肉馳緩性麻痹。多發(fā)生在四肢，下肢尤為多見。病毒如侵犯延髓則導(dǎo)致麻痹、呼吸停止而死亡 人受脊髓灰質(zhì)炎病毒感染后，可建立牢固的 免疫，主要以體液免疫為主。在腸道局部淋巴組織產(chǎn)生sIgA，清除腸道內(nèi)病毒，阻止病毒入血；血液中則出現(xiàn)IgG、IgM中和性抗體 ，可清除血液中的游離病毒，阻止病毒侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng) 。血液中的IgG抗體可由

5、母親通過胎盤傳給胎兒，出生后維持?jǐn)?shù)月才逐漸消失。故生后6個月以內(nèi)的嬰兒較少發(fā)病 三、微生物學(xué)檢查法 脊髓灰質(zhì)炎的麻痹型病例，易于診斷。但因其他腸道病毒的某些型 (如柯薩奇病毒A7型等) 也可引起麻痹，仍需進(jìn)行病毒分離或血清學(xué)診斷方能做出準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷。對非典型及輕型病例尤其需要微生物學(xué)診斷。 1.病毒分離與鑒定 取病人糞便、發(fā)病早期的咽部分泌物等標(biāo)本，加抗生素除去雜菌，然后將標(biāo)本低速離心，取上清液接種猴腎、人胚腎或人羊膜細(xì)胞，置37，培養(yǎng)7-10d逐日觀察CPE。有CPE出現(xiàn)后， 用已知的、型免疫血清中和試驗加以鑒定。 2.血清學(xué)診斷 取病程早期和恢復(fù)期雙份血清作CF試驗或NT試驗，恢復(fù)期血

6、清抗體滴度較早期血清增高4倍或4倍以上者，有診斷意義。 四、預(yù)防原則 脊髓灰質(zhì)炎的一般預(yù)防措施應(yīng)包括隔離病人、消毒排泄物、以及加強(qiáng)飲食衛(wèi)生管理、保護(hù)水源等。在流行期間，避免對易感小兒做扁桃體摘除手術(shù)或其他各種疫苗接種，以減少麻痹型病例的發(fā)生。用脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗或脊髓灰質(zhì)炎減毒疫苗，進(jìn)行人工自動免疫是預(yù)防本病的最佳措施 第二節(jié) 柯薩奇病毒、ECHO病毒與新型 腸道病毒 柯薩奇病毒 是1948年在美國紐約州柯薩奇鎮(zhèn)，從一名疑似脊髓灰質(zhì)炎患者糞便中用接種乳鼠的方法首次分離出的，因而得名 ?？刹《?ECHOV) 是1951年脊髓灰質(zhì)炎流行期間從患者糞便中分離的能使培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生病變的非脊髓灰質(zhì)炎病毒。

7、當(dāng)時對該病毒與疾病有何關(guān)系尚不了解，故被命名為人類腸道細(xì)胞病變孤兒病毒 新型腸道病毒 是1969年以后分離的腸道病毒新血清型，不再將其歸屬于柯薩奇病毒和ECHO病毒，統(tǒng)稱為新型腸道病毒。按抗原排列順序分別命名為腸道病毒68、69、70、71和72型、。68型是從患支氣管炎或肺炎兒童的呼吸道分離出來的。69型是從墨西哥一名健康兒童直腸拭子中分離出，尚未發(fā)現(xiàn)與人類任何疾病有關(guān)。72型即甲型肝炎病毒(HAV) 柯薩奇病毒、ECHO病毒與新型腸道病毒生物學(xué)特性、感染于免疫過程與脊髓灰質(zhì)炎病毒很相似?？滤_奇病毒、ECHO病毒識別受體廣泛，因而引起的疾病復(fù)雜。致病特點是在腸道中增殖，但很少引起腸道疾病。感

8、染臨床表現(xiàn)多種多樣，同一型病毒可產(chǎn)生一種以上的臨床綜合征；同一臨床綜合征可由不同型病毒所引起 常見的幾種疾病 1 皰疹性咽峽炎柯薩奇病毒A組病毒某些血清型引起，典型癥狀是在軟顎和懸雍垂周圍出現(xiàn)水皰性潰瘍損傷 2 手足口病是由柯薩奇病毒A16引起，71型也引起多次流行。特點為手足口舌上水皰性損傷 3 流行性胸痛、柯薩奇病毒B組引起癥狀為突然發(fā)熱和單側(cè)胸痛。 4 心肌炎和心包炎 主要柯薩奇病毒B組引起，在嬰兒室可引起暴發(fā)流行，死亡率高。散發(fā)流行于成人和兒童 5 眼病 見于A24引起的急性結(jié)膜炎和70型引起的急性出血性結(jié)膜炎 此外，腸道病毒感染還可能與病毒感染疲勞綜合征、躺尿病有關(guān)柯薩奇、ECHO與

9、新型腸道病毒所致疾病疾 病 柯薩奇病毒 ECHO病毒 新型腸道病毒 A組 B組脊髓灰質(zhì)炎 4 6 7 9 1 5 2 6 9 11 70 71 無菌性腦膜炎 2 6 7 9 2 3 4 5 4 6 9 16 30 70 出疹性熱病 4 16 1 3 5 4 6 9 14 16 - 泡疹性咽峽炎 2-6 8 9 16 - - -手足口病 5 10 16 - - 71心肌炎、心包炎 4 16 1-5 1 6 9 19 -流行性胸痛 9 1-5 1 6 9 -普通感冒 21 24 2 3 6 8 11 20 22 -嬰幼兒腹瀉 - - 6 7 11 14 18出血性結(jié)膜炎 24 - - 70 微生物

10、學(xué)檢查 取咽拭、糞便和腦脊液等，作動物接種或細(xì)胞培養(yǎng)?？滤_奇A組病毒少數(shù)幾個型別必須在乳鼠增殖外，其余都能在猴腎原代或傳細(xì)胞、某些人源性傳代細(xì)胞中生長，在細(xì)胞質(zhì)中增殖，產(chǎn)生典型的腸道病毒CPE。用病毒特異性多價和單價血清進(jìn)行鑒定 無特異的疫苗可用 第二十八章急性胃腸炎病毒 第一節(jié) 輪狀病毒 輪狀病毒 屬于呼腸孤病毒科,是人類、哺乳動物和鳥類腹瀉的重要病原體。在人類主要引起嬰幼兒急性胃腸炎 一 生物學(xué)性狀 1 形態(tài) 病毒直徑為55-75nm，有雙層衣殼，殼粒排列呈車輪狀，故得名。此種形態(tài)特征具有診斷價值 2 核酸 病毒體的核心為雙鏈RNA，由11個不連續(xù)節(jié)段組成 3 分型 根據(jù)內(nèi)衣殼VP6抗原性

11、不同，輪狀病毒分7組（A-G），A組又分4個亞組 4 抵抗力 輪狀病毒在糞便中存活數(shù)天到數(shù)周，耐乙醚、酸、鹼和反復(fù)凍融，不耐熱，5530min可被滅活 二 致病性與免疫性 致病性 輪狀病毒呈世界性分布，A-C組引起人類和動物的腹瀉，D-G只引起動物腹瀉。A組最為常見。是6個月-2歲嬰幼兒嚴(yán)重胃腸炎的主要病原體。急性胃腸炎多發(fā)生在秋冬季。B組病毒可在年長兒童和成年人中產(chǎn)生暴發(fā)流行 糞-口途徑傳播，還可經(jīng)呼吸道傳播，傳染性強(qiáng) 病毒在小腸粘膜絨毛細(xì)胞內(nèi)增殖，造成細(xì)胞溶解死亡，腺窩細(xì)胞增生、分泌增多導(dǎo)致嚴(yán)重腹瀉，水和電解質(zhì)的喪失，感染后潛伏期短，突然發(fā)病，臨床表現(xiàn)發(fā)熱，大量水樣便、嘔吐，少數(shù)嚴(yán)重病人可

12、出現(xiàn)脫水及酸中毒癥狀，是導(dǎo)致嬰幼兒死亡的主要原因 感染后很快出現(xiàn)特異性抗體，腸道局部出現(xiàn)的sIgA可中和病毒。近年來細(xì)胞免疫在抗輪狀病毒感染中的作用受到重視。M、NK、CTL等在輪狀病毒感染的免疫防御及疾病恢復(fù)中均起作用 三 微生物學(xué)檢查法 1檢測病毒或病毒抗原 取病人糞便，運(yùn)用電鏡、ELISA、或乳膠凝集試驗很容易檢出病毒或抗原 2 細(xì)胞培養(yǎng) 可用原代猴腎細(xì)胞、傳代MA104猴腎細(xì)胞等中增殖,但培養(yǎng)程序復(fù)雜,不是臨床診斷常用的方法 3 分子生物學(xué)檢測技術(shù) 是直接從糞便中提取病毒RNA，作聚丙烯酰胺凝膠電泳，染色后，可對11個核酸片段分析RNA電泳圖。目前所用的核酸分子雜交技術(shù)和PCR法檢測病

13、毒核酸，在臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查中有重要意義 急性胃腸炎病毒除了輪狀病毒外，還有杯狀病毒科的小圓形結(jié)構(gòu)化病毒（ SRSV ）和“經(jīng)典”人類杯狀病毒；腺病毒科的腸道腺病毒（40、41、43型）和星狀病毒科的星狀病毒。他們所致的胃腸炎臨床表現(xiàn)相似，主要為腹瀉與嘔吐，呈世界性分布。為小兒腹瀉的主要病原體第29 章 肝炎病毒第一節(jié) 甲型肝炎病毒 甲型肝炎病毒(HAV)引起甲型肝炎，是一種急性肝臟疾病，主要經(jīng)過糞-口途徑傳播，可造成暴發(fā)或散發(fā)流行，潛伏期短，發(fā)病較急，一般不轉(zhuǎn)為慢性，亦無慢性攜帶者，預(yù)后良好。1982年國際病毒命名委員會將其分類為小核糖核酸病毒科腸道病毒屬72型。但由于有些特性并不與腸道

14、病毒相同,如HAV在細(xì)胞內(nèi)增殖遲緩,不引起CPE等，故近年又被另列為腸道病毒科的肝病毒屬 一、生物學(xué)性狀 (一)形態(tài)與結(jié)構(gòu) HAV為球形顆粒，直徑27nm-32nm，單股正鏈RNA，無包膜病毒。衣殼呈20面體立體對稱，由VP1-VP4等4種多肽組成，其中VP1是主要的衣殼蛋白，其抗原決定簇的NT抗體，能中和所有的HAV株 一、生物學(xué)性狀 (一)形態(tài)與結(jié)構(gòu) HAV為球形顆粒 直徑27nm-32nm，單股 正鏈RNA，無包膜病毒。衣殼呈20面體立體對稱，由VP1-VP4等4種多肽組成，其中VP1是主要的衣殼蛋白，其抗原決定簇的NT抗體，能中和所有的HAV株。 至今，世界各地HAV只發(fā)現(xiàn)一個血清型。

15、基因組為單一正鏈RNA，穩(wěn)定性高，各病毒株間的核苷酸可以有少許差異，但至少有90%以上的同源性。 (二) 感染模型與細(xì)胞培養(yǎng) 黑猩猩、狨猴以及國產(chǎn)獼猴屬中紅面猴對HAV易感，經(jīng)口或靜脈注射可使動物發(fā)生肝炎。肝細(xì)胞漿中和糞便內(nèi)可檢出病毒。HAV可用非洲綠猴腎細(xì)胞、人胚腎細(xì)胞、傳代猴腎細(xì)胞 (Vero、BSC-1、FRhK-4、FRhK-6)、人胚肺2倍體成纖維細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞株 (PLCPRF5) 等。但不引起CPE。因此需用免疫熒光法或放射免疫法檢出培養(yǎng)的HAV (三) 抵抗力 HAV對乙醚、酸、熱 (601h) 穩(wěn)定，在20貯存數(shù)年仍保持感染性。HAV經(jīng)高壓 (12120min)、煮沸 (5

16、min)、干熱(1801h)、UV (1.1瓦1min)、甲醛 (14 000、373d)以及氯 (10ppm15ppm、30min) 等處理均可使之滅活。鑒于HAV有相當(dāng)大的抵抗力，因此對肝炎患者及其排泄物處理應(yīng)特別小心 二、致病性與免疫性 (一) 傳染源與傳播途徑 傳染源 多為患者和隱性感染者。患者潛伏期后期及急性期的血液和糞便均有傳染性。HAV病毒血癥時間短暫，因而通過輸血或注射傳播的可能性極小， 傳播途徑 主要通過糞-口。HAV污染食物、飲水、海產(chǎn)品 (如毛蚶等) 及食具等，往往引起暴發(fā)或散發(fā)性流行 (二) 致病機(jī)制 HAV經(jīng)口侵入人體后，先在咽部和唾液腺中早期增殖，然后在腸粘膜和局部

17、淋巴結(jié)內(nèi)大量增殖。并侵入血流形成病毒血癥，最終侵犯靶器官肝臟。因為HAV為非溶細(xì)胞型病毒，不直接造成肝細(xì)胞損害；機(jī)體的免疫應(yīng)答也參與了肝臟的損傷，即抗HAV在肝臟與HAV結(jié)合形成免疫復(fù)合物，或Tc(CTL)對感染病毒肝細(xì)胞的攻擊所致 (三) 免疫性 HAV感染后血清中早期出現(xiàn)抗HAV IgM；恢復(fù)期出現(xiàn)抗HAV IgG，并可持續(xù)多年；在IgM出現(xiàn)的同時，從糞便中檢出sIgA抗體。在恢復(fù)期還可出現(xiàn)病毒的特異細(xì)胞免疫應(yīng)答。感染后可產(chǎn)生持久免疫力 三、微生物學(xué)檢查法 HAV雖可在組織培養(yǎng)細(xì)胞中增殖，但不引起CPE，難于判定病毒是否增殖，故實驗室診斷不依靠分離病毒，而采用下述方法：(一)檢測病毒抗原

18、病毒檢測在潛伏期末期和急性期早期，取糞便用免疫電鏡檢測HAV顆粒；用放射免疫 (RIA) 或酶免疫 (EIA) 法檢測HAV 的抗原。 (二)血清學(xué)檢查檢 測抗HAV常用RIA和ELISA法。檢測抗HAV IgM有助于早期診斷；測抗HAV IgG有助于流行病學(xué)調(diào)查；測糞便中抗HAV IgA也有助于診斷 (三) 病毒核酸檢測應(yīng)用 cDNA-RNA分子雜交技術(shù)及PCR技術(shù)檢測HAV的RNA，方法特異、敏感。 四、防治原則 1 一般預(yù)防 預(yù)防甲型肝炎主要是把住病從口入關(guān)，嚴(yán)格管理糞便、改善飲食和飲水衛(wèi)生 2 人工自動免疫 現(xiàn)我國已試用減毒甲型肝炎活疫苗(H2株)，效果很好。國外已生產(chǎn)滅活疫苗，是將H

19、M175毒株經(jīng)人2倍體細(xì)胞傳代培養(yǎng)、純化后，經(jīng)甲醛滅活制成的，但價格昂貴。HAV基因工程疫苗正在研制中 3 人工被動免疫 注射丙種球蛋白可應(yīng)急預(yù)防。甲型肝炎為自限性疾病，經(jīng)治療可痊愈，不轉(zhuǎn)慢性亦不留后遺癥。用藥宜簡 第二節(jié) 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒(HBV)所引起的乙型肝炎主要是經(jīng)輸血、注射和母嬰傳播的肝臟疾病。各年齡組均可發(fā)生，潛伏期較長，起病徐緩，部分患者可轉(zhuǎn)為慢性，少數(shù)還可導(dǎo)致肝硬化和肝癌。乙型肝炎抗原攜帶者多，HBV在世界范圍內(nèi)傳播,估計全世界乙有肝炎患者和無癥狀帶菌著達(dá)2億，估計我國有1.2億人左右 一生物學(xué)性狀 (一)形態(tài)與結(jié)構(gòu) 電子顯微鏡檢查乙型肝炎感染者血清，可見到3種顆粒：

20、 1 大球形顆粒 完整的HBV顆粒亦稱Dane顆粒。Dane顆粒直徑為42nm，具有雙層核殼結(jié)構(gòu)。外殼相當(dāng)于包膜，厚7nm，由脂質(zhì)雙層與蛋白質(zhì)組成。脂質(zhì)雙層內(nèi)含有乙型肝炎表面抗原(HBsAg及少量PreS1，PreS2)。用去垢劑處理Dane顆粒，破壞外殼，則暴露出直徑為28nm的核心顆粒。顆粒表面相當(dāng)于內(nèi)衣殼,含有乙型肝炎核心抗原(HBcAg) 在酶或去垢劑作用后，則暴露乙型肝炎e抗原(HBeAg)。顆粒內(nèi)部有 (二) HBV基因結(jié)構(gòu)及復(fù)制 1.HBV基因結(jié)構(gòu) HBV DNA是由長鏈L(負(fù)鏈) 和短鏈S(正鏈)組成的不完全雙鏈環(huán)狀DNA ， 長鏈有3 200個堿基對，短鏈的長度相當(dāng)于長鏈的50%-85%。因此HBV DNA有15%-50%部分為單鏈。HBV的DNA多聚酶能以負(fù)鏈DNA為模板，使正鏈DNA延伸，最后填補(bǔ)成為全長的雙鏈環(huán)狀DNA結(jié)構(gòu) HBV基因分區(qū)及功能： HBV DNA長鏈載有