串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的基本情況

1、技術(shù)的基本情況1. 技術(shù)原理：（包括技術(shù)方法、所采用的儀器設(shè)備及技術(shù)的先進(jìn)性、科學(xué)性等）質(zhì)譜技術(shù)的基本原理是將被測的化合物分子電離成不同質(zhì)量電荷比（m/z）的帶電離子，按其質(zhì)荷比的不同進(jìn)行分離，從而對化合物的成分和結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析的一種方法，并通過測定離子峰的強(qiáng)度計(jì)算出待測化合物的濃度。串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS是由2個質(zhì)譜儀串聯(lián)而成，一級質(zhì)譜將化合物按不同質(zhì)荷比進(jìn)行分離并對化合物進(jìn)行能量修飾，二級質(zhì)譜檢測被測物質(zhì)與惰性氣體碰撞后的碎片離子的子離子，由被測物質(zhì)的質(zhì)荷比及其碎片子離子的質(zhì)荷比共同對一個物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析，串聯(lián)質(zhì)譜是一種特異性更高，更準(zhǔn)確的物質(zhì)定性、定量分析技術(shù)。串聯(lián)質(zhì)譜用于新生兒代謝病

2、的篩查的實(shí)際操作中通過利用含有穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)的溶液對濾紙干血片樣本進(jìn)行萃取，然后用串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行檢測。每個分析物的檢測結(jié)果與它們對應(yīng)的穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)相關(guān)并與分析物濃度成正比。串聯(lián)質(zhì)譜分析中數(shù)據(jù)的采集是通過中性粒子丟失、母離子掃描和多反應(yīng)監(jiān)測三種模式來完成，獲得的數(shù)據(jù)通過串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)中的軟件處理完成。應(yīng)用液相串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀測定新生兒外周血液中40余種氨基酸、游離肉堿和?；鈮A，根據(jù)外周血液血液中氨基酸、游離肉堿和?；鈮A濃度的變化篩查出氨基酸代謝病、有機(jī)酸代謝病和脂肪酸代謝病共三大類40余種遺傳性代謝病，并對其中一部分疾病做出診斷和鑒別診斷。儀器選用了國內(nèi)目前在新生兒遺傳代謝病篩查和診斷中普遍

3、采用的ABSCIEXAPI3200型液相串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀,該款儀器具有較高的靈敏度和超寬的動態(tài)范圍和極高的可靠性，完全適用于遺傳代謝病的篩查與診斷。試劑采用廣州市豐華生物工程有限公司提供的氨基酸、肉堿檢測試劑，試劑盒采用了目前國內(nèi)外應(yīng)用普遍的先進(jìn)非衍生化測定技術(shù)，臨床應(yīng)用于新生兒外周血氨基酸和肉堿的測定有較高的精密度和準(zhǔn)確性，能極大限度的通過一次實(shí)驗(yàn)篩查出40余種遺傳代謝病。2. 技術(shù)在國內(nèi)外的應(yīng)用(包括該項(xiàng)技術(shù)在國內(nèi)外的應(yīng)用時間、范圍、例數(shù)及該項(xiàng)技術(shù)的相關(guān)綜述、參考文獻(xiàn)，最好能提供準(zhǔn)入批件)目前歐、美、澳洲及中國臺灣地區(qū)都已經(jīng)普及串聯(lián)質(zhì)譜疾病篩查方案，此方案可以更有效的一次性檢測多達(dá)40余種遺

4、傳代謝性疾病，為針對性治療提供有效依據(jù)，開辟了新的代謝病預(yù)防領(lǐng)域。我們國家于2002年開始使用嘗試串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行代謝病的新生兒篩查和臨床疑似遺傳代謝病患者檢測，使我國的代謝病的篩查、診斷及治療技術(shù)有了顯著提高。1990年美國杜克大(DukeUniversity)Dr.Millington提出利用串聯(lián)質(zhì)譜儀,執(zhí)行新生兒遺傳代謝病篩查，2002年底已有24個州開展48種新生兒疾病篩查，2008年美國98%的出生嬰兒進(jìn)行48種新生兒先天性代謝缺陷病篩查。另外歐洲一些國家和澳大利亞等也都普遍將串聯(lián)質(zhì)譜應(yīng)用于了新生兒的遺傳代謝病篩查。上海交通大學(xué)附屬新華醫(yī)院從2002年用自配的氨基酸肉堿衍生法測定試劑聯(lián)合

5、串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)篩查了20萬例新生兒，篩查出74例14個病種遺傳代謝病，陽性率為1/3640。2008年浙江省新生兒疾病篩查中心引進(jìn)了先進(jìn)的串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)和進(jìn)口試劑，在對2153份臨床樣本的預(yù)實(shí)驗(yàn)中，共發(fā)現(xiàn)4例與代謝有關(guān)的疾病，驗(yàn)證這項(xiàng)技術(shù)推廣普及的價值。至目前為止共篩查了近60萬例新生兒，取得了可觀的社會效益。目前國內(nèi)共有超過50余家的新生兒疾病篩查中心和臨床實(shí)驗(yàn)室將該技術(shù)用于新生兒遺傳代謝病篩查。包括浙江省新生兒疾病篩查中心一些地區(qū)已實(shí)現(xiàn)了政府出資免費(fèi)對新生兒進(jìn)行篩查。串聯(lián)質(zhì)譜在國內(nèi)用于新生兒遺傳代謝病篩查的部分?jǐn)?shù)據(jù)和文獻(xiàn)：2003年廖相云等1闡述了串聯(lián)質(zhì)譜在氨基酸代謝病篩查和脂肪酸代謝病篩查中

6、的疾病種類及其重要性。2004年顧學(xué)范等2在對104例遺傳性代謝病高危兒童標(biāo)本分析中，檢出陽性標(biāo)本10例（9.6%），其中酪氨酸血癥1例，同型胱氨酸血癥1例，高鳥氨酸血癥1例，甲基丙二酸血癥2例，丙酸血癥1例，3-羥基3-甲基戊二酸裂解酶缺乏癥1例，中鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥2例，酰基肉堿轉(zhuǎn)移酶H缺乏癥1例。表明串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)可檢測30余種遺傳性代謝病，包括氨基酸代謝紊亂、有機(jī)酸代謝紊亂和脂肪酸代謝紊亂性疾病，對高危遺傳性代謝病患兒的篩查有重要價值。2005年韓連書等3建立了可靠串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測干血濾紙片中氨基酸的方法，用串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測血片中氨基酸譜（苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、瓜氨酸和纈

7、氨酸）及其濃度。2008年江劍輝等4在748例遺傳代謝病高危兒童中檢出氨基酸代謝病（AAD）、有機(jī)酸代謝紊亂（OAD）和脂肪酸氧化缺陷?。‵AOD）29種共95例，檢出率12.70%。2008年韓連書等5用串聯(lián)質(zhì)譜檢測干血濾紙片中的氨基酸和?；鈮A譜，聯(lián)合氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)檢測尿液中有機(jī)酸譜，對遺傳性代謝病進(jìn)行篩查和診斷，在4981例臨床疑似遺傳代謝病兒童中共診斷319例（6.4%）24種遺傳代謝病，其中氨基酸代謝病155例（48.6%）；有機(jī)酸血癥150例（47.0）；脂肪酸（3氧化代謝病14例（4.4%）。2008年謝利娟等6對132例非特異性臨床表現(xiàn)的高危兒，在常規(guī)進(jìn)行臨床生化檢查的同時

8、進(jìn)行血串聯(lián)質(zhì)譜和尿氣相質(zhì)譜檢測，132例中診斷遺傳性代謝病15例（11.5%）。2009年李啟亮等7建立北京地區(qū)兒童全血19種氨基酸含量的正常參考值范圍，對建立串聯(lián)質(zhì)譜法檢測兒童的各種氨基酸的正常參考值范圍對于臨床診治和篩查氨基酸代謝異常性疾病提供了依據(jù)。同時李啟亮等8建立了北京地區(qū)新生兒全血10種氨基酸含量的正常參考值范圍，對建立串聯(lián)質(zhì)譜法檢測新生兒的各種氨基酸的正常參考值范圍對于臨床診治和篩查氨基酸代謝異常性疾病提供了依據(jù)。2010年涂文軍等9對560例臨床疑似遺傳代謝病新生兒的干血濾紙片進(jìn)行液相串聯(lián)質(zhì)譜分析，其中檢測出患兒48例，陽性率8.6%。，包括脂肪酸代謝病11例（22.9）；氨基酸代謝病15例（31.3）；有機(jī)酸代謝病22例（45.8）2010年張軼雯等10建立了串聯(lián)質(zhì)譜法測定血清中20種游離氨基酸含量的方法，為臨床血清氨基酸檢測提供可靠依據(jù)。2011年韓鎏等11采用液相串聯(lián)質(zhì)譜法檢測血清中極長鏈脂肪酸含量，該方法具有較好的準(zhǔn)確度和靈敏性，特異性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，為臨床診斷提供重要的生化依據(jù)。2011年蔡燕娜等12利用串聯(lián)質(zhì)譜法對干血濾紙片中的?；鈮A進(jìn)行快速分析，可用于脂肪酸代謝障礙性疾病和有機(jī)酸血癥診斷及治療效果監(jiān)測。2012年陶蓓蓓等13指出利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)、采用同位素內(nèi)標(biāo)的方法，進(jìn)行全譜氨基酸檢測，可精確測定人體內(nèi)42種氨基酸含