分子生物學(xué)簡答題

1、課后思考題1 .試述乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)及調(diào)控原理？乳糖操縱子開放轉(zhuǎn)錄需要什么條件？(1)乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)：含Z、Y、A3個結(jié)構(gòu)基因，分別編碼乳糖代謝的3個酶；一個操縱序列O,一個啟動序列P,一個CAP結(jié)合位點(diǎn)共同構(gòu)成乳糖操縱子的調(diào)控區(qū)。乳糖操縱子的上游還有一個調(diào)節(jié)基因I。(2)阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)：I基因的表達(dá)產(chǎn)物為一種阻遏蛋白，在沒有乳糖存在時，阻遏蛋白與O序列結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄啟動，乳糖操作子處于阻遏狀態(tài)；當(dāng)有乳糖存在時，乳糖轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘牵笳呓Y(jié)合阻遏蛋白，使構(gòu)象變化，阻遏蛋白與O序列解離，在CAP蛋白協(xié)作下發(fā)生轉(zhuǎn)錄。(3)CAP的正性調(diào)節(jié)：分解代謝基因激活蛋白(CA

2、P)分子內(nèi)存在DNA和cAMP結(jié)合位點(diǎn)。當(dāng)沒有葡萄糖時，cAMP濃度較高，cAMP與CAP結(jié)合，cAMP-CAP結(jié)合于CAP結(jié)合位點(diǎn)，提高RNA轉(zhuǎn)錄活性；當(dāng)有葡萄糖時，cAMP濃度降低，cAMP與CAP結(jié)合受阻，乳糖操縱子表達(dá)下降。(4)協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：乳糖操縱子阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)和CAP的正性調(diào)節(jié)機(jī)制協(xié)調(diào)合作，CAP不能激活被阻遏蛋白封閉基因的表達(dá)，但如果沒有CAP存在來加強(qiáng)轉(zhuǎn)錄活性，即使阻遏蛋白從操縱序列上解離仍無轉(zhuǎn)錄活性。因此，乳糖操縱子開放轉(zhuǎn)錄需要的條件是：1)誘導(dǎo)物乳糖存在，解除阻遏蛋白的負(fù)調(diào)節(jié)。2)葡萄糖缺乏，CAP蛋白活化，啟動正調(diào)節(jié)。2 .試述原核生物和真核生物基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)的異同

3、。(1)相同點(diǎn)：轉(zhuǎn)錄起始是基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。(2)不同點(diǎn)：1)原核生物基因表達(dá)調(diào)控主要包括轉(zhuǎn)錄和翻譯水平；真核基因表達(dá)調(diào)控包括染色質(zhì)活化、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯、翻譯后加工多個層次。2)原核基因表達(dá)調(diào)控主要為負(fù)調(diào)節(jié)；真核生物基因表達(dá)調(diào)控主要為正調(diào)節(jié)。3)原核轉(zhuǎn)錄起始不需要轉(zhuǎn)錄因子，RNA聚合酶直接結(jié)合啟動子，由b因子決定基因表達(dá)的特異性；真核轉(zhuǎn)錄起始需要基礎(chǔ)、特異兩類轉(zhuǎn)錄因子，依賴DNA-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，調(diào)控轉(zhuǎn)錄激活。4)原核基因表達(dá)調(diào)控主要采用操縱子模型，轉(zhuǎn)錄出多順反子RNA,實(shí)現(xiàn)協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)；真核基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子RNA,功能相關(guān)蛋白質(zhì)的協(xié)調(diào)表達(dá)機(jī)制更為復(fù)雜。4.簡述

4、真核生物基因表達(dá)調(diào)控的特點(diǎn)。(1)真核生物基因表達(dá)調(diào)控主要為正調(diào)節(jié)。(2)真核基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子RNA,功能相關(guān)蛋白質(zhì)的協(xié)調(diào)表達(dá)機(jī)制更為復(fù)雜。(3)真核生物基因表達(dá)調(diào)控具有典型的多級調(diào)控特點(diǎn)，包括染色質(zhì)水平調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控、翻譯調(diào)控等。(4)與基本調(diào)控點(diǎn)即轉(zhuǎn)錄起始密切相關(guān)的是染色質(zhì)水平的調(diào)控和轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。染色質(zhì)水平的調(diào)控是真核基因轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控的前提，染色質(zhì)核小體中組蛋白的不同化學(xué)修飾組合可形成組蛋白密碼，通過參與調(diào)節(jié)染色質(zhì)重塑，改變?nèi)旧|(zhì)活性，DNA甲基化修飾通常抑制基因的轉(zhuǎn)錄活性。(5)轉(zhuǎn)錄起始是真核生物基因表達(dá)調(diào)控的最重要環(huán)節(jié)。真核生物RNA聚合酶對啟動子的親和力極小，必

5、須依賴一種或多種轉(zhuǎn)錄因子的作用才能起始轉(zhuǎn)錄。調(diào)控作用主要是通過反式作用因子結(jié)合順式作用元件后影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成，影響RNA聚合酶的作用。順式作用元件是調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始的DNA序列，包括啟動子、增強(qiáng)子、沉默子等，反式作用因子是能與序列特異DNA結(jié)合的蛋白，即轉(zhuǎn)錄因子，主要功能是使基因開放和關(guān)閉，從而影響轉(zhuǎn)錄。（6）轉(zhuǎn)錄后調(diào)控包括對mRNA的加工修飾、轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞質(zhì)定位以及穩(wěn)定性等多方面的調(diào)控。翻譯調(diào)控點(diǎn)主要在起始階段和延長階段，翻譯起始因子的磷酸化可調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)翻譯。另外，小分子RNA通過干擾翻譯過程抑制基因表達(dá)。真核基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)：1）既有瞬時調(diào)控，又有發(fā)育調(diào)控2）調(diào)控環(huán)節(jié)更多3）染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變

6、化影響轉(zhuǎn)錄效率4）轉(zhuǎn)錄調(diào)控以正調(diào)控為主5）調(diào)控元件復(fù)雜并且可以遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄區(qū)6）轉(zhuǎn)錄因子種類多，調(diào)控機(jī)制更復(fù)雜真核生物和原核生物基因結(jié)構(gòu)的差異：1）原核生物的結(jié)構(gòu)基因是連續(xù)的，RNA合成后不需要剪接加工；由外顯子（編碼序列）和內(nèi)含子（非編碼序列）兩部分組成，編碼序列不連續(xù)，稱為斷裂基因2）真核生物的基因都是單順反子；原核生物大多是多順反子真核生物、原核生物、病毒基因組特點(diǎn)差異：1）病毒：所含核酸的種類與結(jié)構(gòu)不同所含核酸的分子數(shù)不同基因組小基因組為單倍體并且所含基因?yàn)閱慰截惢蚪M序列基本上都是編碼序列基因的連續(xù)性不同相關(guān)基因串連成一個轉(zhuǎn)錄單位2）原核：基因組DNA大多數(shù)為超螺旋結(jié)構(gòu)的單一閉合雙鏈分子

7、基因組DNA只有一個復(fù)制起點(diǎn)基因組序列以編碼序列為主基因組所含基因的數(shù)目比病毒多3）真核：染色體DNA是線性分子染色體DNA形成染色體結(jié)構(gòu)基因組序列中僅有不到10%是蛋白質(zhì)編碼序列基因在基因組中散在分布基因組序列中包含大量重復(fù)序列基因組中存在各種基因家族基因組中含大量轉(zhuǎn)座子3.什么是誘導(dǎo)和阻遏？以乳糖和色氨酸操縱子為例,比較兩種操縱子的結(jié)構(gòu)及負(fù)調(diào)控方式的差異。在特定環(huán)境信號刺激下，相應(yīng)的基因被激活，基因表達(dá)產(chǎn)物增加，這種基因稱為可誘導(dǎo)基因?？烧T導(dǎo)基因在特定環(huán)境中表達(dá)增強(qiáng)的過程，稱為誘導(dǎo)。如果基因?qū)Νh(huán)境信號應(yīng)答是被抑制，這種基因是可阻遏基因。可阻遏基因表達(dá)產(chǎn)物水平降低的過程稱為阻遏。乳糖和色氨酸

8、操縱子相同之處：都是DNA序列，是轉(zhuǎn)錄的功能單位，由調(diào)節(jié)基因、啟動子、操縱基因和結(jié)構(gòu)基因組成。不同之處：乳糖操縱子是負(fù)控控誘導(dǎo)，色氨酸操縱子是負(fù)調(diào)控阻遏。乳糖操縱子是一個可誘導(dǎo)的操縱子。乳糖操縱子的調(diào)節(jié)基因編碼阻遏蛋白，當(dāng)無乳糖存在時，阻遏蛋白與操縱序列結(jié)合，阻止RNA聚合酶對結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。當(dāng)乳糖存在時，乳糖的分解產(chǎn)物半乳糖作為誘導(dǎo)劑與阻遏蛋白結(jié)合，使阻遏蛋白構(gòu)象改變，導(dǎo)致阻遏蛋白與操縱序列解離，誘導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)錄。色氨酸操縱子主要受阻遏抑制調(diào)控，在細(xì)胞內(nèi)無色氨酸時，阻遏蛋白不與操縱序列結(jié)合，轉(zhuǎn)錄開放；當(dāng)色氨酸濃度較高時，色氨酸與阻遏蛋白形成復(fù)合物并結(jié)合到操縱序列上，關(guān)閉基因表達(dá)。腐渺仔1.乳樹

9、融子物腑大腸桿麗L播操飄子哈心1A三個結(jié)構(gòu)基因，分3編碼半爭而醮、送能和半乳糖昔乙酰轉(zhuǎn)硒.此外在有T棒姒序列O.一個.自動工口和一個調(diào)節(jié)芨區(qū)1.1.色氫麗操縱子壽小隹氯詼梅刎于包含操縱基囚0.用中子丸及5個結(jié)構(gòu)基因小B.匚、D.E。E與。之間有展前導(dǎo)序列L“色喜酸悌汰于濾存在調(diào)節(jié)基因R,編嗎用號策公2、同遢蛋白的負(fù)性髀;蹌有乳相存在時.1基因編碼的阻遇蛋白結(jié)合于嬲序O處.貪潮押孤子孫干陰謁狀杰,不能合成分第乳糖的三種甑】有箱旃的寸，乳標(biāo)作用語導(dǎo)物詼導(dǎo)阻遏量白變構(gòu).不能結(jié)臺干操縱序列，季勒操艮子極謙導(dǎo)不牘合成分相堀忙種酶，所以,1乳精提煤干的這M調(diào)控機(jī)制為可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)段.人阻遲遍控士當(dāng)培?，基中

10、無色氨啜時.R編梢的阻謁蛋自不與。結(jié)含*結(jié)構(gòu)基因表達(dá)催化合成笆運(yùn)陵的樓，節(jié)培養(yǎng)基中有大量色菽陵時.阻調(diào)蛋白與色氨酸結(jié)合而改變構(gòu)象，形成活性阻遏物r與。站臺阻海結(jié)的基因轉(zhuǎn)錄.3,CAP的正性調(diào)書.在啟動子_1_爵肩CAP結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)大胸桿菌從以前萄糧為情源的環(huán)境特變?yōu)橐匀榫珵殡皆吹沫h(huán)境時低度升高,與5P結(jié)合，使CAP及生芟構(gòu).CAP結(jié)曲刊L柜幌縱子工動序列附近的MP轉(zhuǎn)號優(yōu)點(diǎn)，被話RNA聚合僧情性，促逑苗稗基因轉(zhuǎn)錄，源節(jié)蛋日片合于操弱于后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的建錄,時乳糖提糾子實(shí)行正調(diào)控加速合成分解乳精的三種時立泉俄調(diào)控工L中含肩4段忖源1擰必序列1編由L個前導(dǎo)肽，前導(dǎo)艙的第10.11位是色越反23虱附3

11、4哪位莖耳蝌$4莖壞結(jié)構(gòu)是-b轉(zhuǎn)錄黑止子結(jié)構(gòu).稱為衰M-r.當(dāng)也氨酹映三時.的號也的期比停滯十色真陶科也序現(xiàn)工與形成莖唔河.使序列支&不育冊加精減子結(jié)構(gòu).結(jié)構(gòu)基因丐b完全轉(zhuǎn)靈.當(dāng)色點(diǎn)弦充足時，枝楣體快速器濡前導(dǎo)肽，并時序列2形竭束，使序列“形成翦神窗構(gòu)，T制結(jié)構(gòu)毫因不錦錄.以切胴調(diào)節(jié)孔蝌縱子中的莫邳硒的阻遏引門的負(fù)調(diào)控與CAP的正明控西和機(jī)制，互相怖咽、互相制約.5 .簡述胰高血糖素升血糖的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑（以PKA信號通路為例）。胰高血糖素升高血糖是由G蛋白偶聯(lián)受體介導(dǎo)的。G蛋白偶聯(lián)受體由一條多肽鏈構(gòu)成，其肽鏈反復(fù)跨膜七次，膜內(nèi)部分與G蛋白偶聯(lián)。G蛋白是GTP結(jié)合蛋白，結(jié)合GTP時為活化形式，作

12、用于下游分子，并開放相應(yīng)信號途徑；同時具有GTP酶活性，水解GTP為GDP時為非活化形式，使信號轉(zhuǎn)導(dǎo)關(guān)閉。胰高血糖素和受體結(jié)合后激活G蛋白，使之構(gòu)象發(fā)生改變?！皝喕cGDP的親和力下降，結(jié)合的GDP被GTP取代，結(jié)合了GTP的a亞基與3丫亞基解離，進(jìn)入活化狀態(tài)。活化的a亞基作用于下游的效應(yīng)分子，這種活化狀態(tài)將一直持續(xù)到GTP被a亞基自身水解為GDP,又再次與3丫亞基形成復(fù)合體，回到靜止?fàn)顟B(tài)?；罨腶亞基將信號傳遞給腺甘酸環(huán)化酶AC,使AC活化，催化ATP生成小分子信使cAMP,cAMP又激活蛋白激酶A(PKA),PKA激活糖原磷酸化酶b激酶，促進(jìn)糖原分解代謝；同時抑制糖原合酶，抑制糖原合成，從

13、而使血糖升高。6 .列舉G蛋白偶聯(lián)受體介導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。(1) cAMP-PKA通路。激素和受體結(jié)合后激活G蛋白，釋放GTP結(jié)合形式的活化的a亞基，a亞基激活腺甘酸環(huán)化酶(AC)。AC催化產(chǎn)生小分子信使cAMP。cAMP結(jié)合PKA,通過變構(gòu)調(diào)節(jié)作用激活PKA,PKA通過磷酸化作用激活或抑制各種效應(yīng)蛋白，產(chǎn)生多種細(xì)胞效應(yīng)。(2) IP3/DAG-PKC通路。此類信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的細(xì)胞外信號分子結(jié)合受體激活G蛋白，釋放活化的a亞基，a亞基激活PLC。PLC水解膜組分PIP2,生成DAG和IP3。IP3從膜上擴(kuò)散到細(xì)胞質(zhì)中，與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和肌漿網(wǎng)上的受體結(jié)合，促進(jìn)這些鈣儲存庫內(nèi)的Ca2+迅速釋放，使細(xì)

14、胞質(zhì)內(nèi)的Ca2+濃度升高。Ca2+與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的PKC結(jié)合并聚集至質(zhì)膜。DAG生成后仍留在質(zhì)膜上，當(dāng)結(jié)合有Ca2+的PKC聚集到質(zhì)膜時，DAG、磷酯酰絲氨酸與Ca2+共同作用于PKC的調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域，使PKC變構(gòu)而暴露出活性中心。PKC通過磷酸化作用激活各種功能蛋白質(zhì)，調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝、基因表達(dá)等生理活動。(3) Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白質(zhì)激酶通路。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)Ca2+濃度升高后，Ca2+可與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的鈣調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，形成具有調(diào)節(jié)功能的Ca2+/CaM復(fù)合物。Ca2+/CaM復(fù)合物的下游信號分子為鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶。鈣調(diào)蛋白依賴性激酶屬于蛋白質(zhì)絲/蘇氨酸激酶，如肌球蛋白輕鏈激酶、磷酸化酶激酶、鈣調(diào)蛋

15、白依賴性激酶。這些激酶可激活各種效應(yīng)蛋白質(zhì)，在收縮和運(yùn)動、物質(zhì)代謝、神經(jīng)遞質(zhì)的合成、細(xì)胞分泌和分裂等多種生理過程中發(fā)揮重要作用。7 .簡述G蛋白偶聯(lián)受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的基本模式。（1）細(xì)胞外信號分子結(jié)合受體，通過別構(gòu)效應(yīng)將其激活。（2）受體激活G蛋白，G蛋白在有活性和無活性狀態(tài)之間連續(xù)轉(zhuǎn)換，稱為G蛋白循環(huán)。（3）活化的G蛋白激活下游效應(yīng)分子。（4）G蛋白的效應(yīng)分子向下游傳遞信號的主要方式是催化產(chǎn)生小分子信使。（5）小分子信使作用于相應(yīng)的靶分子（主要是蛋白激酶），使之構(gòu)象改變而激活。（6）蛋白激酶通過磷酸化作用激活一些與代謝相關(guān)的酶、與基因表達(dá)相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子以及一些與細(xì)胞運(yùn)動相關(guān)的蛋白，從而產(chǎn)生

16、各種細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)。8 .列舉第二信使分子的種類及其主要特點(diǎn)。第二信使分子的種類主要包括環(huán)腺甘酸（cAMP）、環(huán)鳥甘酸（cGMP）、甘油二酯（DAG）、三磷酸肌醇（IP3）、磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）、Ca2+、NO等。主要特點(diǎn)：（1）為細(xì)胞內(nèi)具有信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能的小分子化合物。（2）在完整細(xì)胞中，該分子的濃度或分布在外源信號的作用下發(fā)生迅速改變。（3）該分子類似物可模擬外源信號的作用。（4）阻斷該分子的變化可阻斷細(xì)胞對外源信號的反應(yīng)。（5）該分子在細(xì)胞內(nèi)有確定的靶分子。（6）可作為別位效應(yīng)劑作用于靶分子。（7）在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的主要變化是濃度變化。PKA使絲氨酸或蘇氨酸殘基磷酸化P

17、KC屬于絲/蘇氨酸蛋白激酶上游信號：腺甘酸環(huán)化酶鳥甘酸環(huán)化酶常見第二信使：cAMPcGMPIP3-脂類-DAGCa2+效應(yīng)蛋白：蛋白激酶APKGIP3門控鈣通道PKCPKC,鈣調(diào)蛋白激酶9 .請比較PCR反應(yīng)和體內(nèi)DNA復(fù)制過程的異同點(diǎn)。PCR技術(shù)體內(nèi)電制耗制起在無特定真檢OR1I原帙一-AKS豆制又無有環(huán)境體外.拚3個9度拴制體內(nèi).通和條件由郛交也退火.延神起始、延伸、瞥止異他luq幽SJnfib)1）財?shù)乃珻RA聚合曲、1八t詮隹曲？引物人工合成的DNa單跳（1%和個厘基時）自行臺店的RNA獷措產(chǎn)將皇教小酎內(nèi)策/增1的-得以上解加方去蕓松（時使雙員交41DNAW楔相!)單值用料4種脫和核

18、稠核包戢同方向5-*3J林基互補(bǔ)陀對驚明10 .克隆載體一般具備哪些基本特性？（1）具有自主復(fù)制起點(diǎn)，使載體在宿主細(xì)胞中進(jìn)行自主復(fù)制，并能使克隆的外源DNA得到同步擴(kuò)增；（2）至少有一個篩選標(biāo)志；（3）有適宜的限制性核酸內(nèi)切酶單一酶切位點(diǎn)，可供外源基因插入時選擇。11 .簡述分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的a互補(bǔ)和藍(lán)白斑篩選的原理。3半乳糖甘酶（3-gal）的“片段與受體菌編碼的片段（lacZ-）可以互補(bǔ)結(jié)合發(fā)揮3-gal的活性，稱作“互補(bǔ)。一些質(zhì)粒上帶有3-半乳糖甘酶a片段的編碼序列LacZ；轉(zhuǎn)化進(jìn)入受體菌，可形成a互補(bǔ)，即可催化底物X-gal產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，使菌落變藍(lán)。由于這些質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)位于LacZ

19、內(nèi)部，插入外源DNA片段后，使LacZ不能編碼產(chǎn)生有功能的3-gal的“片LacZ段，不能發(fā)生“互補(bǔ)，在X-gal存在下受體菌落呈白色。因此，藍(lán)色菌落代表載體中DNA基因活性完好無損，沒有插入外源DNA片段，白色菌落則表明著所含質(zhì)粒帶有外源片段，為重組質(zhì)粒。用藍(lán)白斑篩選可以來區(qū)分轉(zhuǎn)化進(jìn)入受體菌的是空載體還是重組質(zhì)粒。12 .試述重組DNA技術(shù)的基本步驟。（1）分：目的DNA的分離獲取；（2）選：載體的選擇與構(gòu)建；（3）接：目的DNA與載體連接；（4）轉(zhuǎn)：重組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞；（5）篩：重組體的篩選與鑒定。13 .以鐮狀細(xì)胞貧血病為例簡述疾病發(fā)病分子機(jī)理，并介紹對其進(jìn)行PCR-RFLP基因診斷

20、的方法。鐮狀細(xì)胞貧血是一種常染色體顯性遺傳血紅蛋白（Hb）病，屬于分子病。正常成人血紅蛋白是由兩條a鏈和兩條3鏈相互結(jié)合成的四聚體，“鏈和3鏈分別由141和146個氨基酸順序連結(jié)構(gòu)成。鐮狀細(xì)胞貧血患者因3珠蛋白基因（HBS）發(fā)生第6密碼子的錯義突變（A變?yōu)門）,使編碼生成的3鏈第6位氨基酸谷氨酸被繳氨酸所代替，形成了異常的血紅蛋白S（hemoglobinS,HbS）,取代了正常血紅蛋白（HbA）,在氧分壓下降時HbS分子間相互作用，成為溶解度很低的螺旋形多聚體，使紅細(xì)胞扭曲成鐮狀細(xì)胞（鐮變）造成貧血癥狀。HBS突變堿基位于限制性核酸內(nèi)切酶MstII位點(diǎn)（CC.TNAGG）中，突變（A變?yōu)門）導(dǎo)

21、致該限制性酶切位點(diǎn)丟失，因此，可以設(shè)計鐮狀細(xì)胞貧血的PCR-RFLP診斷方法：PCR擴(kuò)增HBB基因含第5/6/7密碼子的片段（1.35kb）,用MstII充分消化擴(kuò)增產(chǎn)物，再用瓊脂糖凝膠電泳分析。正常人擴(kuò)增產(chǎn)物顯示1.15kb和0.20kb兩條條帶，鐮狀細(xì)胞貧血患者擴(kuò)增產(chǎn)物則顯示1.35kb單一條帶，攜帶者則有1.35kb、1.15kb和0.20kb三條條帶。14 .簡述基因治療的幾種策略和基本程序?；蛑委煹牟呗园?(1)缺陷基因精確的原位修復(fù)，包括對致病基因的突變堿基進(jìn)行糾正的基因矯正和用正?；蛲ㄟ^重組原位替換致病基因的基因置換。屬于精確修復(fù)，是最理想的治療方法。(2)基因增補(bǔ)：不刪除

22、突變的致病基因，而在基因組中額外插入正?；?，在體內(nèi)表達(dá)出功能正常的蛋白質(zhì)，實(shí)現(xiàn)疾病的治療。(3)基因沉默或失活：對于一些由于某些基因過度表達(dá)引起的疾病，向患者體內(nèi)導(dǎo)入有抑制基因表達(dá)作用的核酸，降解相應(yīng)的mRNA或抑制其翻譯，實(shí)現(xiàn)疾病的治療?；蛑委煹幕境绦颍?1)選擇治療基因：根據(jù)疾病的治病基因，選擇對應(yīng)的正?；蚧蛘呓?jīng)過改造的基因作為治療基因。(2)選擇基因載體：有病毒載體(臨床上常用)和非病毒載體。(3)選擇靶細(xì)胞：通常是體細(xì)胞，常用的如造血干細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞和肌細(xì)胞。(4)將治療基因?qū)肴梭w，分：間接體內(nèi)療法，將靶細(xì)胞從體內(nèi)取出后進(jìn)行基因?qū)?，篩選出成功導(dǎo)入的細(xì)胞，繁殖擴(kuò)大后再輸回體內(nèi)，使治療基因在體內(nèi)表達(dá)；直接體內(nèi)療法，是將外源基因直接注入體內(nèi)有關(guān)的組織器官，使其進(jìn)入相應(yīng)細(xì)胞并表達(dá)。(5)治療基因表達(dá)的檢測：用PCR、RNA印跡、蛋白印跡及ELISA等方法檢測導(dǎo)入的治療基因是否被正取表達(dá)。15.談?wù)勀銓虍惓：图膊“l(fā)生之間關(guān)系的認(rèn)識。(一)人類所有疾病均為視為基因病。(1)影響疾病發(fā)生發(fā)展的基因分為致病基因和疾病易感基因，統(tǒng)稱為疾病相關(guān)基