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1、植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 實(shí)驗(yàn)題目:過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定姓名 班級(jí) 學(xué)號(hào) 一、 實(shí)驗(yàn)原理和目的 原理:過(guò)氧化物酶廣泛分布于植物的各個(gè)組織器官中。在有過(guò)氧化氫存在下,過(guò)氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化生成醌類化合物,此化合物進(jìn)一步縮合或與其它分子縮合,生成茶褐色物質(zhì),該化合物在470nm處有最大的吸收值,可用分光度計(jì)測(cè)量生成物的含量。 目的:學(xué)習(xí)測(cè)定植物組織中過(guò)氧化物酶活性的方法。二、 實(shí)驗(yàn)器具和步驟材料:女貞樹(shù)葉器具:分光光度計(jì)、離心機(jī)、秒表、天平、研缽、磁力攪拌器試劑: 0.1mo1/L過(guò)氧化氫;,0.1mo1/L磷酸緩沖液pH7.0; 0.3%愈創(chuàng)木酚反應(yīng)液:100 mmo1L磷酸緩沖液(pH 70)1
2、00 ml于燒杯中,加入愈創(chuàng)木酚0.3ml ,于磁力攪拌器上加熱攪拌,直至愈創(chuàng)木酚溶解。 步驟:1稱取植物材料約0.2g,加入,0.1mo1/L磷酸緩沖液 (pH7.0) 6ml(分次加入2ml,2ml,2ml,最后用于洗研缽),在研缽中研磨成勻漿,過(guò)濾或以 8000rmin 離心15min,上清液為酶的提取液。 2.1ml0.3%愈創(chuàng)木酚反應(yīng)液,加0.8ml磷酸緩沖液7.0,加2ml0.1mo1/L過(guò)氧化氫,最后加酶液200ul (視酶活性大小而定,如酶濃度高可稀釋后再測(cè)定),搖勻,立即在分光光度計(jì)470nm下測(cè)吸光度,從加入酶液時(shí)立即開(kāi)啟秒表記錄時(shí)間,1min讀數(shù)一次(也可2min,視材料
3、而定)。3以每分鐘吸光度變化0.01為一個(gè)酶活力單位。過(guò)氧化物酶活性(U)=A470 ×稀釋倍數(shù)/g.Fw.min.0.01 三、 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和作業(yè)過(guò)氧化物酶活性(U)=A470 ×=(0.133-0.124)*20/(0.2*2*0.01)=45四、 數(shù)據(jù)分析A470的值太小可能是由于葉片放置過(guò)久導(dǎo)致過(guò)氧化物酶活性喪失。五、 思考題1) 過(guò)氧化物酶在植物體內(nèi)的主要作用是什么?答:它與光合作用、呼吸作用及生長(zhǎng)素的氧化等都有關(guān)系。在植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中它的活性不斷發(fā)生變化。一般老化組織中活性較高,幼嫩組織中活性較弱。這是因?yàn)檫^(guò)氧化物酶能使組織中所含的某些碳水化合物轉(zhuǎn)化成木質(zhì)素,增加木質(zhì)化程度,而且發(fā)現(xiàn)早衰減產(chǎn)的水稻根系中過(guò)氧化物酶的活性增加,所以過(guò)氧化物酶可作為組織老化的一種生理指標(biāo)
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