過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定

1、植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 實(shí)驗(yàn)題目：過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定姓名 班級(jí) 學(xué)號(hào) 一、 實(shí)驗(yàn)原理和目的 原理：過(guò)氧化物酶廣泛分布于植物的各個(gè)組織器官中。在有過(guò)氧化氫存在下，過(guò)氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化生成醌類化合物，此化合物進(jìn)一步縮合或與其它分子縮合，生成茶褐色物質(zhì)，該化合物在470nm處有最大的吸收值，可用分光度計(jì)測(cè)量生成物的含量。 目的：學(xué)習(xí)測(cè)定植物組織中過(guò)氧化物酶活性的方法。二、 實(shí)驗(yàn)器具和步驟材料：女貞樹(shù)葉器具：分光光度計(jì)、離心機(jī)、秒表、天平、研缽、磁力攪拌器試劑： 0.1mo1/L過(guò)氧化氫；，0.1mo1/L磷酸緩沖液pH7.0； 0.3%愈創(chuàng)木酚反應(yīng)液：100 mmo1L磷酸緩沖液（pH 70）1

2、00 ml于燒杯中，加入愈創(chuàng)木酚0.3ml ，于磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創(chuàng)木酚溶解。 步驟：1稱取植物材料約0.2g，加入，0.1mo1/L磷酸緩沖液 (pH7.0) 6ml(分次加入2ml,2ml,2ml,最后用于洗研缽)，在研缽中研磨成勻漿，過(guò)濾或以 8000rmin 離心15min，上清液為酶的提取液。 2.1ml0.3%愈創(chuàng)木酚反應(yīng)液，加0.8ml磷酸緩沖液7.0，加2ml0.1mo1/L過(guò)氧化氫，最后加酶液200ul （視酶活性大小而定，如酶濃度高可稀釋后再測(cè)定），搖勻，立即在分光光度計(jì)470nm下測(cè)吸光度，從加入酶液時(shí)立即開(kāi)啟秒表記錄時(shí)間，1min讀數(shù)一次（也可2min，視材料

3、而定）。3以每分鐘吸光度變化0.01為一個(gè)酶活力單位。過(guò)氧化物酶活性(U)=A470 ×稀釋倍數(shù)/g.Fw.min.0.01 三、 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和作業(yè)過(guò)氧化物酶活性(U)=A470 ×=(0.133-0.124)*20/（0.2*2*0.01）=45四、 數(shù)據(jù)分析A470的值太小可能是由于葉片放置過(guò)久導(dǎo)致過(guò)氧化物酶活性喪失。五、 思考題1） 過(guò)氧化物酶在植物體內(nèi)的主要作用是什么？答：它與光合作用、呼吸作用及生長(zhǎng)素的氧化等都有關(guān)系。在植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中它的活性不斷發(fā)生變化。一般老化組織中活性較高，幼嫩組織中活性較弱。這是因?yàn)檫^(guò)氧化物酶能使組織中所含的某些碳水化合物轉(zhuǎn)化成木質(zhì)素，增加木質(zhì)化程度，而且發(fā)現(xiàn)早衰減產(chǎn)的水稻根系中過(guò)氧化物酶的活性增加，所以過(guò)氧化物酶可作為組織老化的一種生理指標(biāo)