基因工程的基本序列概述

1、1.2 基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四個(gè)步驟1、目的基因的獲取2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4、目的基因的檢測(cè)與鑒定原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動(dòng)子終止子 RNA聚合酶能夠識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)，并與其結(jié)合。 轉(zhuǎn)錄開(kāi)始后，RNA聚合酶沿DNA分子移動(dòng)，并以DNA分子的一條鏈為模板合成RNA。 轉(zhuǎn)錄完畢后，RNA鏈釋放出來(lái)，緊接著RNA聚合酶也從DNA模板鏈上脫落下來(lái)。真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)含子 外顯子 能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子 不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子啟動(dòng)子終

2、止子編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 內(nèi)含子： 外顯子： 原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較思考 編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長(zhǎng)嗎？連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)非編碼一、目的基因的獲取一、目的基因的獲取1 1、目的基因主要是指、目的基因主要是指_編碼蛋白質(zhì)的基因編碼蛋白質(zhì)的基因2 2、獲取目的基因的常用方法有哪些、獲取目的基因的常用方法有哪些? ?請(qǐng)閱讀P9第一和二兩段基因文庫(kù)基因文庫(kù) 基因組文庫(kù)基因組文庫(kù)部分基因文庫(kù)部分基因文庫(kù)（如（如:cDNA文庫(kù)）文庫(kù)）1.1.基因文庫(kù)基因文庫(kù)2.2.基因文庫(kù)的構(gòu)建方法基因文庫(kù)的構(gòu)建方法鳥(niǎo)槍法：鳥(niǎo)槍法：供體細(xì)胞中的供體細(xì)胞中的DNADNA許多許多D

3、NADNA片段片段運(yùn)載體運(yùn)載體限制酶限制酶與載體連接與載體連接載入載入受體細(xì)胞受體細(xì)胞產(chǎn)生特定性狀產(chǎn)生特定性狀導(dǎo)入導(dǎo)入外源外源DNADNA擴(kuò)增擴(kuò)增目的基因目的基因分離分離( (直接分離法直接分離法) )( (一一) )從基因文庫(kù)中獲取目的基因從基因文庫(kù)中獲取目的基因目的基因的目的基因的mRNAmRNA雜交雙鏈雜交雙鏈( (單鏈單鏈RNA/RNA/單鏈單鏈DNA)DNA)單鏈單鏈DNADNA反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶核酸酶核酸酶H H2.2.基因文庫(kù)的構(gòu)建方法基因文庫(kù)的構(gòu)建方法DNADNA聚合酶聚合酶雙鏈雙鏈DNADNA( (目的基因目的基因) )求求異異思思維維 你能推測(cè)出由你能推測(cè)出由mRNA反轉(zhuǎn)錄形

4、成反轉(zhuǎn)錄形成cDNA的過(guò)程大致分為哪些步驟嗎？的過(guò)程大致分為哪些步驟嗎？反轉(zhuǎn)錄酶既可以利用反轉(zhuǎn)錄酶既可以利用DNA又可以利用又可以利用RNA作為模板合成與之互補(bǔ)的作為模板合成與之互補(bǔ)的DNA鏈。像其他鏈。像其他DNA聚合酶一樣，反轉(zhuǎn)錄酶也以聚合酶一樣，反轉(zhuǎn)錄酶也以53方向合成方向合成DNAcDNA合成過(guò)程是：第一步，反轉(zhuǎn)錄酶以合成過(guò)程是：第一步，反轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成一條與為模板合成一條與RNA互補(bǔ)的互補(bǔ)的DNA單鏈，形成單鏈，形成RNA-DNA雜交分子。第二步，核酸酶雜交分子。第二步，核酸酶H使使RNA-DNA雜交分子中的雜交分子中的RNA鏈降解，使之變成單鏈的鏈降解，使之變成單鏈的DN

5、A。第三。第三步，以單鏈步，以單鏈DNA為模板，在為模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一條互補(bǔ)的聚合酶的作用下合成另一條互補(bǔ)的DNA鏈，形成雙鏈鏈，形成雙鏈DNA分子。分子。根據(jù)已知的氨基酸序列合成根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNADNA法法 ：蛋白質(zhì)的氨基酸序列蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNAmRNA的核苷酸序列的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列推測(cè)推測(cè)推測(cè)推測(cè)目的基因目的基因化學(xué)合成化學(xué)合成2.2.基因文庫(kù)的構(gòu)建方法基因文庫(kù)的構(gòu)建方法上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點(diǎn)？上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點(diǎn)？操作簡(jiǎn)便操作簡(jiǎn)便廣泛使用廣泛使用工作量大，盲目，工作量大，盲目，分離出來(lái)的

6、有時(shí)并分離出來(lái)的有時(shí)并非一個(gè)基因非一個(gè)基因?qū)Ｒ恍詮?qiáng)專(zhuān)一性強(qiáng)操作過(guò)程麻煩，操作過(guò)程麻煩，mRNAmRNA很不穩(wěn)定，要很不穩(wěn)定，要求的技術(shù)條件較高求的技術(shù)條件較高專(zhuān)一性最強(qiáng)專(zhuān)一性最強(qiáng)僅限于合成核苷酸僅限于合成核苷酸對(duì)較少的簡(jiǎn)單基因?qū)^少的簡(jiǎn)單基因?qū)じ鶈?wèn)問(wèn)底底1.為什么要構(gòu)建基因文庫(kù)？直接從含有目的基因的生物體為什么要構(gòu)建基因文庫(kù)？直接從含有目的基因的生物體內(nèi)提取不行嗎？?jī)?nèi)提取不行嗎？構(gòu)建基因文庫(kù)是獲取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果構(gòu)建基因文庫(kù)是獲取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以直接獲得，也可以通過(guò)反轉(zhuǎn)錄，所需要的目的基因序列已知，就可以直

7、接獲得，也可以通過(guò)反轉(zhuǎn)錄，用用PCR方式從方式從mRNA中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫(kù)。但如果所中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫(kù)。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想從一種生物體內(nèi)獲得許多基因，或者想知道這種生物與另一種或想從一種生物體內(nèi)獲得許多基因，或者想知道這種生物與另一種生物之間有多少基因不同，或者想知道一種生物在個(gè)體發(fā)育的不同生物之間有多少基因不同，或者想知道一種生物在個(gè)體發(fā)育的不同階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得到一種生物的全基因組序列，階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得到一種生物的全基因組序列，

8、往往就需要構(gòu)建基因文庫(kù)。往往就需要構(gòu)建基因文庫(kù)。( (二二) )利用利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因 概念：概念：PCRPCR全稱(chēng)為全稱(chēng)為_(kāi)，是一項(xiàng)，是一項(xiàng) 在生物在生物_復(fù)制復(fù)制_的核酸合成技術(shù)的核酸合成技術(shù) 條件：條件：_、 _、_ (_ (做啟動(dòng)子做啟動(dòng)子) )、 _._.前提條件：前提條件：原理：原理：_方式：方式：以以_方式擴(kuò)增，即方式擴(kuò)增，即_（n n為擴(kuò)增為擴(kuò)增循循 環(huán)的次數(shù)）環(huán)的次數(shù)）結(jié)果：結(jié)果：選修選修1 P1 P6060聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外體外特定特定DNADNA片段片段DNADNA復(fù)制復(fù)制已知基因的核苷酸序列已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸四

9、種脫氧核苷酸一對(duì)引物一對(duì)引物DNADNA聚合酶聚合酶指數(shù)指數(shù)2 2n n使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增( (二二) )利用利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因b、PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)擴(kuò)增（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)擴(kuò)增由穆里斯等人于由穆里斯等人于1988年發(fā)明，并于年發(fā)明，并于1993年獲得若貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。年獲得若貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。PCR反應(yīng)的過(guò)程：（變性、退火、延伸、多次重復(fù)）反應(yīng)的過(guò)程：（變性、退火、延伸、多次重復(fù)）變性變性退火退火延伸延伸結(jié)果：雙鏈結(jié)果：雙鏈DNA分子數(shù)為分子數(shù)為2n可獲取大量目的基因可獲取大量目的基因過(guò)程：過(guò)程：a

10、 a、DNADNA變性變性（90-9690-96）：雙鏈）：雙鏈DNADNA模板模板 在熱作用下，在熱作用下，_斷裂，形成斷裂，形成_b b、退火、退火（復(fù)性復(fù)性25-6525-65）：系統(tǒng)溫度降低，引）：系統(tǒng)溫度降低，引 物與物與DNADNA模板結(jié)合，形成局部模板結(jié)合，形成局部_。 c c、延伸、延伸（70-7570-75）：在）：在TaqTaq酶的作用下，從酶的作用下，從 引物的引物的55端端33端端延伸，合成與模板互補(bǔ)延伸，合成與模板互補(bǔ) 的的_。 氫鍵氫鍵單鏈單鏈DNADNA雙鏈雙鏈DNADNA鏈鏈尋根問(wèn)底尋根問(wèn)底將目的基因直接導(dǎo)入受體細(xì)胞不是更簡(jiǎn)便嗎？如果這么做，將目的基因直接導(dǎo)入受

11、體細(xì)胞不是更簡(jiǎn)便嗎？如果這么做，結(jié)果會(huì)怎樣？結(jié)果會(huì)怎樣？ 有人采用總有人采用總DNA注射法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，即將一個(gè)生物中的總注射法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，即將一個(gè)生物中的總DNA提提取出來(lái)，通過(guò)注射或花粉管通道法導(dǎo)入受體植物，沒(méi)有進(jìn)行表達(dá)載取出來(lái)，通過(guò)注射或花粉管通道法導(dǎo)入受體植物，沒(méi)有進(jìn)行表達(dá)載體的構(gòu)建，這種方法針對(duì)性差，完全靠運(yùn)氣，也無(wú)法確定什么基因體的構(gòu)建，這種方法針對(duì)性差，完全靠運(yùn)氣，也無(wú)法確定什么基因?qū)肓耸荏w植物導(dǎo)入了受體植物,不好檢測(cè)與篩選不好檢測(cè)與篩選,同時(shí)也無(wú)法增強(qiáng)目的基因的表達(dá)同時(shí)也無(wú)法增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平水平,也不能確定目的基因產(chǎn)物的存在部位。也不能確定目的基因產(chǎn)物的存在部位。構(gòu)建

12、基因表達(dá)載體的目的構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的a、使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的、使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的b、使目的基因復(fù)制并遺傳給下一代、使目的基因復(fù)制并遺傳給下一代c、同時(shí)使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用。、同時(shí)使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用。1.1.用一定的用一定的_切割切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切 口，露出口，露出_。2.2.用用_切斷目切斷目 的基因，使其產(chǎn)生的基因，使其產(chǎn)生_ _ _。( (二二) )基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建 核心核心3.3.將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的_ _處，處， 再加入適量再加入適量_，形成了一個(gè)重組，形

13、成了一個(gè)重組 DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一種限制酶同一種限制酶的黏性末端的黏性末端切口切口DNADNA連接酶連接酶相同相同質(zhì)粒質(zhì)粒DNADNA分子分子限制酶處理限制酶處理一個(gè)切口一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端兩個(gè)黏性末端兩個(gè)切口兩個(gè)切口獲得目的基因獲得目的基因DNADNA連接酶連接酶重組重組DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒） 核心核心同一種同一種( (二二) )基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建4.4.過(guò)程過(guò)程: :5.5.基因表達(dá)載體的組成：基因表達(dá)載體的組成：復(fù)制原點(diǎn)復(fù)制原點(diǎn)+ +目的基因目的基因+ +啟動(dòng)子啟動(dòng)子+ +終止子終止子+ +標(biāo)

14、記基因標(biāo)記基因它們有什么作用？它們有什么作用？( (三三) )將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化 方法方法將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胫参锛?xì)胞植物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)雱?dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胛⑸锛?xì)胞微生物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞目的基因進(jìn)入目的基因進(jìn)入_內(nèi)，并且在內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持受體細(xì)胞內(nèi)維持_和和_的過(guò)程的過(guò)程受體細(xì)胞受體細(xì)胞穩(wěn)定穩(wěn)定表達(dá)表達(dá)1 1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（1 1）農(nóng)桿

15、菌介紹）農(nóng)桿菌介紹（2 2）原理及適用范圍）原理及適用范圍( (三三) )將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理，你能根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理，你能分析出農(nóng)桿菌不能將目的基因?qū)雴巫尤~植物的原因嗎？分析出農(nóng)桿菌不能將目的基因?qū)雴巫尤~植物的原因嗎？若想將一個(gè)抗病基因?qū)雴巫尤~植物，如小麥，從理論若想將一個(gè)抗病基因?qū)雴巫尤~植物，如小麥，從理論上說(shuō)，你應(yīng)該如何做？上說(shuō)，你應(yīng)該如何做？原因原因：研究證明，主要酚類(lèi)誘導(dǎo)物為：研究證明，主要酚類(lèi)誘導(dǎo)物為乙酰丁香酮乙酰丁香酮和和羧基乙酰丁香羧基乙酰丁香酮酮，這些物質(zhì)主要在雙子葉植物細(xì)胞壁中

16、合成，通常不存在于單，這些物質(zhì)主要在雙子葉植物細(xì)胞壁中合成，通常不存在于單子葉植物中，這也是單子葉植物不易被根瘤農(nóng)桿菌侵染的原因。子葉植物中，這也是單子葉植物不易被根瘤農(nóng)桿菌侵染的原因。如果想將一個(gè)抗病毒基因轉(zhuǎn)入小麥，也可以用農(nóng)桿菌，但要注意兩如果想將一個(gè)抗病毒基因轉(zhuǎn)入小麥，也可以用農(nóng)桿菌，但要注意兩點(diǎn)：點(diǎn)：要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株，因?yàn)椴皇撬械霓r(nóng)桿菌菌株都可要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株，因?yàn)椴皇撬械霓r(nóng)桿菌菌株都可以侵染單子葉植物；以侵染單子葉植物；要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)，一般為要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)，一般為乙酰丁香酮乙酰丁香酮等，目的是使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏（趨化性）和激活等，目的是使農(nóng)桿

17、菌向植物組織的受傷部位靠攏（趨化性）和激活農(nóng)桿菌的農(nóng)桿菌的Vir區(qū)（誘導(dǎo)）的基因，使區(qū)（誘導(dǎo)）的基因，使T-DNA轉(zhuǎn)移并插入到染色體轉(zhuǎn)移并插入到染色體DNA上。上。( (三三) )將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞( (四四) )目的基因的檢測(cè)與鑒定目的基因的檢測(cè)與鑒定檢查是否成功檢查是否成功檢測(cè)檢測(cè)鑒定鑒定檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等

18、方法方法方法方法方法方法DNADNA分子雜交分子雜交分子雜交分子雜交（注意與上不同之處）（注意與上不同之處）抗原抗體雜交抗原抗體雜交 細(xì)菌的檢測(cè)，將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)形成細(xì)菌的檢測(cè)，將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)形成菌落，檢測(cè)菌落中是否有目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。菌落，檢測(cè)菌落中是否有目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。淘汰無(wú)表達(dá)產(chǎn)物的菌落，保留有表達(dá)產(chǎn)物的進(jìn)一淘汰無(wú)表達(dá)產(chǎn)物的菌落，保留有表達(dá)產(chǎn)物的進(jìn)一步培養(yǎng)、研究。步培養(yǎng)、研究。無(wú)表達(dá)產(chǎn)物無(wú)表達(dá)產(chǎn)物無(wú)表達(dá)產(chǎn)物無(wú)表達(dá)產(chǎn)物有表達(dá)產(chǎn)物有表達(dá)產(chǎn)物無(wú)表達(dá)產(chǎn)物無(wú)表達(dá)產(chǎn)物例：用棉鈴飼喂棉鈴例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲(chóng)，如蟲(chóng)吃后不出現(xiàn)中毒蟲(chóng)，如蟲(chóng)吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說(shuō)明未攝入目的基癥狀，說(shuō)明未

19、攝入目的基因或攝入目的基因未表達(dá)。因或攝入目的基因未表達(dá)。如蟲(chóng)吃后中毒死亡，則說(shuō)如蟲(chóng)吃后中毒死亡，則說(shuō)明攝入了抗蟲(chóng)基因并得到明攝入了抗蟲(chóng)基因并得到表達(dá)。表達(dá)。（從個(gè)體水平鑒定）（從個(gè)體水平鑒定）DNADNA分子雜交示意圖分子雜交示意圖 采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的DNADNA分分子的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)子的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒(méi)有互補(bǔ)堿基序在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒(méi)有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。列的部位，仍

20、然是兩條游離的單鏈。 P P1515思考與探究思考與探究基因工程操作流程圖基因工程操作流程圖小小 結(jié)：結(jié)：1）以下說(shuō)法正確的是）以下說(shuō)法正確的是 （ ） A、所有的限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷、所有的限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列酸序列 B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體 C、運(yùn)載體必須具備的條件之一是：具有多、運(yùn)載體必須具備的條件之一是：具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接 D、基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來(lái)、基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來(lái)C C2）不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是）不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是 A

21、、能復(fù)制、能復(fù)制 （ ） B、有多個(gè)限制酶切點(diǎn)、有多個(gè)限制酶切點(diǎn) C、具有標(biāo)記基因、具有標(biāo)記基因 D、它是環(huán)狀、它是環(huán)狀DNA3）有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是（）有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是（ ） A、DNA連接酶將黏性末端的堿基對(duì)連接起來(lái)連接酶將黏性末端的堿基對(duì)連接起來(lái) B、 限制性?xún)?nèi)切酶用于目的基因的獲得限制性?xún)?nèi)切酶用于目的基因的獲得 C、目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞、目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞 D、 人工合成目的基因不用限制性?xún)?nèi)切酶人工合成目的基因不用限制性?xún)?nèi)切酶4）有關(guān)基因工程的敘述正確的是）有關(guān)基因工程的敘述正確的是 （ ） A、限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用、限制酶只在獲得

22、目的基因時(shí)才用 B、重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成、重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成 C、質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體、質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體 D、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料資料5）基因工程是在）基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行施工的。在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是 （ ） A、人工合成目的基因、人工合成目的基因 B、目的基因與運(yùn)載體結(jié)合、目的基因與運(yùn)載體結(jié)合 C、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 D、目的基因的檢測(cè)和表達(dá)、目的基因的檢測(cè)和表達(dá)思考與探究思考與探

23、究1.作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？為什么？不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述有其他控制元件，如啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：元件的主要理由是：（1） 生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因的啟動(dòng)生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因的啟動(dòng)子才能比較有利于基因的表達(dá)；子才能比較有利于基因的表達(dá)；（2） 通過(guò)通過(guò)cDNA文庫(kù)獲

24、得的目的基因沒(méi)有啟動(dòng)子，只將編碼序列導(dǎo)文庫(kù)獲得的目的基因沒(méi)有啟動(dòng)子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無(wú)法轉(zhuǎn)錄；入受體生物中無(wú)法轉(zhuǎn)錄；（3） 目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；（4） 為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等；如增強(qiáng)子等；（5） 有時(shí)需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，有時(shí)需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，往往要加上可以標(biāo)識(shí)存在部位的基因，如綠色熒光蛋白基因等往往要加上可以標(biāo)識(shí)存在部位的基因，如綠色熒光蛋白基因等 2、利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞、利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識(shí)，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下器功能的知識(shí)，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？，若要生產(chǎn)