伯樂 cfx3.0操作指南

1、CFX Real-Time PCR Detection System CFX快速梯度熒光定量PCR儀主要包含但不局限與以下領(lǐng)域的應(yīng)用： 基因的表達量檢測水平（儀器具有相對定量功能） 基因分型鑒定水平（儀器具有基因分型功能） 核酸（包括微生物）含量檢測水平（儀器具有絕對定量功能） 微生物鑒定水平（儀器具有終點法分析，熔解曲線分析功能） 核酸突變(如SNP)檢測及掃描水平（儀器具有基因分型功能） 蛋白構(gòu)象分析水平（儀器具有專門的FRET通道）CFX 開啟儀器開啟儀器儀器自檢后，開啟軟件。儀器自檢后，開啟軟件。開啟或關(guān)閉開啟或關(guān)閉Lid新建實驗，開啟新建實驗，開啟數(shù)據(jù)進行分析等數(shù)據(jù)進行分析等Prot

2、ocol-實驗反應(yīng)程序設(shè)置實驗反應(yīng)程序設(shè)置從從Express Load下拉菜單直接加載所需程序。下拉菜單直接加載所需程序。主要分為主要分為2步法步法-2stepAmp及及3步法步法-3stepAmp。帶有帶有+Melt為為SYBR等染料法使用的。等染料法使用的。帶有帶有Gradient的為溫度梯度預(yù)設(shè)程序。的為溫度梯度預(yù)設(shè)程序。點擊點擊Edit進入編輯界面。進入編輯界面。根據(jù)實際反應(yīng)體系，更改根據(jù)實際反應(yīng)體系，更改sample volume。根據(jù)預(yù)混液條件更改預(yù)變性溫度、時間及延伸時間。根據(jù)預(yù)混液條件更改預(yù)變性溫度、時間及延伸時間。Protocol-實驗反應(yīng)程序設(shè)置實驗反應(yīng)程序設(shè)置Plate設(shè)

3、置設(shè)置在在Express Loading下拉菜單中直接加載全板掃描下拉菜單中直接加載全板掃描Quick Plate_96_wells_SYBR Only適用于一個反應(yīng)管中僅有適用于一個反應(yīng)管中僅有SYBR或或FAM探針探針Quick Plate_96_wells_All Channels適用于一個反應(yīng)管中含有多條探針適用于一個反應(yīng)管中含有多條探針運行實驗運行實驗點擊點擊Start Run運行實驗。運行實驗。Run Status查看儀器熱循環(huán)體運行情況查看儀器熱循環(huán)體運行情況運行實驗運行實驗Real-Time Status可顯示實時監(jiān)測的熒光信號變化情況可顯示實時監(jiān)測的熒光信號變化情況運行實驗運

4、行實驗編輯編輯Plate實驗結(jié)束后。儀器會自動生成實驗結(jié)束后。儀器會自動生成Data文件。點擊文件。點擊Data文件的文件的View/Edit Plate進進行行Plate的編輯。的編輯。選中所有的孔，點擊選中所有的孔，點擊Clear Wells。清除所用孔信息。清除所用孔信息。編輯編輯Plate樣品放置樣品放置位置位置設(shè)置樣品設(shè)置樣品類型類型加載熒光信加載熒光信號名稱，輸號名稱，輸入基因名字入基因名字選擇正確的熒選擇正確的熒光信號名稱光信號名稱輸入樣品處輸入樣品處理信息理信息設(shè)置平行重復(fù)設(shè)置平行重復(fù)設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品的起始濃度的起始濃度設(shè)置相對設(shè)置相對定量信息定量信息編輯編輯Plate確定

5、內(nèi)參基因確定內(nèi)參基因確定樣品處理組對照確定樣品處理組對照實驗結(jié)果分析實驗結(jié)果分析-標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線在在Quantification下可查看擴增曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線下可查看擴增曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線鼠標(biāo)右擊圖片區(qū)域可鼠標(biāo)右擊圖片區(qū)域可Copy或保存為圖片格式?；虮４鏋閳D片格式。擴增曲線擴增曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線E值，值，R2值值Cq值值實驗結(jié)果分析實驗結(jié)果分析-標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線在在Quantification Data下查看下查看Cq值。鼠標(biāo)右擊可將數(shù)據(jù)輸出到值。鼠標(biāo)右擊可將數(shù)據(jù)輸出到Excel表。表。實驗結(jié)果分析實驗結(jié)果分析-熔解曲線熔解曲線在在Melt Curve下查看熔解曲線下查看熔解曲線鼠標(biāo)右擊圖片區(qū)域

6、可鼠標(biāo)右擊圖片區(qū)域可Copy或保存為圖片格式?；虮４鏋閳D片格式。熔解曲線熔解曲線原始圖原始圖熔解曲線熔解曲線負導(dǎo)圖負導(dǎo)圖Tm值值實驗結(jié)果分析實驗結(jié)果分析-標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線在在Melt Curve Data下查看下查看Tm值。鼠標(biāo)右擊可將數(shù)據(jù)輸出到值。鼠標(biāo)右擊可將數(shù)據(jù)輸出到Excel表。表。實驗結(jié)果分析實驗結(jié)果分析-相對定量相對定量在在Gene Expreesion里查看相對定量結(jié)果里查看相對定量結(jié)果鼠標(biāo)右擊相對定量數(shù)據(jù)區(qū)域可將數(shù)據(jù)輸出至鼠標(biāo)右擊相對定量數(shù)據(jù)區(qū)域可將數(shù)據(jù)輸出至Excel表表相對定量相對定量柱形圖柱形圖相對定量相對定量數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)2-Ct實驗結(jié)果分析實驗結(jié)果分析-基因分型基因分型基因分型基因分型散點圖散點圖基因分型基因分型Data在在Allice Discrimination下查看基因分型結(jié)果。下查