藥物的鑒別試驗方法及原理

1、-第一章 藥物的鑒別試驗 第一節(jié) 概 述依據(jù)藥典進展的藥物分析主要有三大項：鑒別、檢查和含量測定。藥物的鑒別試驗identification test是用于鑒別藥物的真?zhèn)?，在藥物分析中屬首項工作，只有證實被分析的藥物是真的，才有必要接著進展檢查、含量測定。 藥典所收載的藥物項下的鑒別試驗方法，僅適用于貯藏在有標簽容器中的藥物，用以證實是否為其所標示的藥物。它與分析化學中的定性鑒別有所區(qū)別。這些試驗方法不能賴以鑒別未知物。 原料藥：鑒別試驗結(jié)合性狀項下的外觀和物理常數(shù)進展確證。 一、鑒別的工程 一性狀 藥物的性狀反映了藥物特有的物理性質(zhì)，一般包括外觀、嗅、味、溶解度以及物理常數(shù)等。 二一般鑒別試

2、驗general identification test *以藥物的化學構(gòu)造及其物理化學性質(zhì)為依據(jù)，通過化學反響來鑒別藥物真?zhèn)蔚摹?*無機藥物：根據(jù)其組成的陰離子和陽離子的特殊反響，并以藥典附錄III項下的一般鑒別試驗為依據(jù)， *有機藥物：采用典型的官能團反響。 *一般鑒別試驗的工程： 丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機氟化物類、 無機金屬鹽類鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、鋇鹽、銨鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋁鹽、鋅鹽、銅鹽、銀鹽、汞鹽、鉍鹽、銻鹽、亞錫鹽、有機酸鹽水酸鹽、枸櫞酸鹽、乳酸鹽、苯甲酸鹽、酒石酸鹽、無機酸鹽亞硫酸鹽或亞硫酸氫鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、硼酸鹽、碳酸鹽與碳酸氫鹽、醋酸鹽、磷酸鹽、氯化

3、物、溴化物、碘化物。*一般鑒別試驗僅供確認單一的化學藥物，如為數(shù)種化學藥物的混合物或有干擾物質(zhì)存在時，除另有規(guī)定外，應不適用。 *通過一般鑒別試驗只能證實是*一類藥物，而不能證實是哪一種藥物。例如，經(jīng)一般鑒別反響的鈉鹽試驗，證實*一藥物為鈉鹽，但不能識別是氯化鈉、苯甲酸鈉或者是其它*一種鈉鹽藥物。要想最后證實被鑒別的物質(zhì)到底是哪一種藥物，必須在一般鑒別試驗的根底上，再進展專屬鑒別試驗，方可確認。 三專屬鑒別試驗specific identification test *根據(jù)每一種藥物化學構(gòu)造的差異及其所引起的物理化學特性的不同，選用*些特有的靈敏定性反響，來鑒別藥物真?zhèn)蔚?。是證實*一種藥物的依

4、據(jù)。 綜上所述，一般鑒別試驗是以*些類別藥物的共同化學構(gòu)造為依據(jù)，根據(jù)其一樣的物理化學性質(zhì)進展藥物真?zhèn)蔚蔫b別，以區(qū)別不同類別的藥物。而專屬鑒別試驗，則是在一般鑒別試驗的根底上，利用各種藥物的化學構(gòu)造差異，來鑒別藥物，以區(qū)別同類藥物或具有一樣化學構(gòu)造局部的各個藥物單體，到達最終確證藥物真?zhèn)蔚哪康摹?二、鑒別試驗條件 鑒別試驗是以所采用的化學反響或物理特性產(chǎn)生的明顯的易于覺察的特征變化為依據(jù)。因此，能影響鑒別試驗判定結(jié)果的特征變化的因素都是應當精心選擇和嚴格控制的。也就是說，鑒別試驗應該是在規(guī)定條件下完成的，否則鑒別試驗的結(jié)果是不可信的。 一溶液的濃度 主要指被鑒別藥物的濃度，及所用試劑的濃度。由

5、于鑒別試驗多采用觀測沉淀、顏色或各種光學參數(shù)、A、等的變化，來判定結(jié)果，而藥物和有關(guān)試劑的濃度會直接影響上述的各種變化，必須嚴格規(guī)定溶液的濃度。 二溶液的溫度 溫度對化學反響的影響很大，一般溫度每升高10，可使反響速度增加2-4倍。 三溶液的酸堿度 許多鑒別反響都需要在一定酸堿度的條件下才能進展。溶液酸堿度的作用，在于能使各反響物有足夠的濃度處于反響活化狀態(tài)，使反響生成物處于穩(wěn)定和易于觀測的狀態(tài)。 四干擾成分的存在 在鑒別試驗中，如藥物構(gòu)造中的其它局部或藥物制劑中的其它組分也可參加鑒別反響，產(chǎn)生干擾，應選擇專屬性更高的鑒別反響將其消除或?qū)⑵鋭e離。 五試驗時間 有機化合物的化學反響和無機化合物不

6、同，一般反響速度較慢，到達預期試驗結(jié)果需要較長的時間。這是因為有機化合物是以共價鍵相結(jié)合，化學反響能否進展，依賴于共價鍵的斷裂和新價鍵形成的難易，這些價鍵的更替需要一定的反響時間和條件。同時在化學反響過程中，有時存在著許多中間階段，甚至需參加催化劑才能啟動反響。因此，使鑒別反響完成，需要一定時間。 三、鑒別試驗的靈敏度 一反響靈敏度和空白試驗 反響的靈敏度sensitivity:在一定條件下，能在盡可能稀的溶液中觀測出盡可能少量的供試品，反響對這一要求所能滿足的程度。它以兩個相互有關(guān)的量，即最低檢出量minimum detectable quantity又稱檢出限量和最低檢出濃度minimum

7、 detectable concentration又稱界限濃度來表示。 最低檢出量以m表示，就是應用*一反響，在一定的條件下，能夠觀測出的供試品的最小量，其單位通常用微克g表示1m g10-6g。 最低檢出濃度就是應用*一反響，在一定條件下，能夠觀測出供試品的最低濃度，通常以1G或1V表示，其中GV表示含有1g重*供試品的溶液的gml數(shù)。 最低檢出量和最低檢出濃度之間的關(guān)系可以用下式表示， 式中v為鑒別試驗時，所取供試溶液的最小體積ml。 如果選用鑒別反響的靈敏度愈高，則產(chǎn)生可被觀測的結(jié)果所需要的藥物愈少。 空白試驗blank test: 所謂空白試驗，就是在與供試品鑒別試驗完全一樣的條件下，

8、除不加供試品外，其它試劑同樣參加進展的試驗。 在選用靈敏度很高的反響時，必須采用高純度的試劑和非常干凈的器皿，才能保證鑒別試驗結(jié)果的可靠性。為了消除試劑和器皿可能帶來的影響，應同時進展空白試驗，以供對照。 二提高反響靈敏度的方法 在實際工作中，常采用以下措施來提高反響的靈敏度。 1參加與水互不相溶的有機溶劑 在鑒別試驗中，如生成物具有顏色并顏色很淺時，可利用參加少量與水互不相溶的有機溶劑，濃集有色生成物，使有機溶劑中顏色變深，易于觀測。 2改進觀測方法 例如，將目視觀測溶液的顏色，改為可見分光光度法；將觀測生成沉淀改為比濁度法等。 第二節(jié) 藥物的一般鑒別試驗一、鑒別方法 一化學鑒別法 1干法將

9、供試品加適當試劑在規(guī)定的溫度條件下一般是高溫進展試驗，觀測此時所發(fā)生的特異現(xiàn)象。 (1焰色試驗:常用干法，利用*些元素所具有的特異焰色，可鑒別它們?yōu)槟囊活慃}類藥物。 方法為：取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，使火焰顯出特殊的顏色。(2)加熱分解:在適當?shù)臏囟葪l件下，加熱使供試品分解，生成有特殊氣味的氣體。 2濕法 系指將供試品和試劑在適當?shù)娜軇┲?，于一定條件下進展反響，發(fā)生易于觀測的化學變化，如顏色、沉淀、氣體、熒光等。(1呈色反響鑒別法：系指供試品溶液中參加適當?shù)脑噭┤芤?，在一定條件下進展反響，生成易于觀測的有色產(chǎn)物。在鑒別試驗中最為常用的反響類型有： 1三氯化鐵呈色反響-

10、酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基； 2異羥肟酸鐵反響-多為芳酸及其酯類、酰胺類； 3茚三酮呈色反響-脂肪氨基； 4重氮化-偶合顯色反響-芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基； 5氧化復原顯色反響及其它顏色反響。 2沉淀生成反響鑒別法：常用的這類反響有： 與重金屬離子的沉淀反響在一定條件下，藥物和重金屬離子反響，生成不同形式的沉淀； 2與硫氰化鉻銨雷氏鹽的沉淀反響多為生物堿及其鹽，具有芳香環(huán)的有機堿及其鹽； 3其它沉淀反響。 3熒光反響鑒別法：常用的熒光發(fā)射形式有以下類型： 1藥物本身可在可見光下發(fā)射熒光； 2藥物溶液加硫酸使呈酸性后，在可見光下發(fā)射熒光； 3藥物和溴反響后，于可見光下發(fā)射出熒光； 4藥物和間苯二酚

11、反響后，發(fā)射出熒光及藥物經(jīng)其它反響后，發(fā)射熒光。(4氣體生成反響鑒別法： 1大多數(shù)的胺銨類藥物、酰脲類藥物以及*些酰胺類藥物，可經(jīng)強堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨胺氣； 2化學構(gòu)造中含硫的藥物，可經(jīng)強酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體； 3含碘有機藥物經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯的香味。 二光譜鑒別法 1紫外光譜鑒別法 常用的方法有： 1標準品對照法； 2規(guī)定吸收波長法； 3規(guī)定吸收波長和相應的吸收度法； 4規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法； 5規(guī)定吸收波長和吸收度比值法。 2紅外光譜鑒別法 紅外光譜法是一種專屬性很強、應用較廣固體、液體、氣體樣品的鑒別

12、方法。 1. 標準圖譜對照法：中國藥典1995年版和BP (1993) 2. 對照品法：USP (23)。三色譜鑒別法 利用不同物質(zhì)在不同色譜條件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為Rf值或保存時間進展鑒別試驗。常用的方法有： 1.薄層色譜鑒別法 在實際工作中，一般采用對照品或標準品比較法，要求供試品斑點的Rf值應與對照品斑點一致。 2.高效液相色譜鑒別法 一般規(guī)定按供試品含量測定項下的高效液相色譜條件進展試驗。要求供試品和對照品色譜峰的保存時間應一致。含量測定方法為標法時，可要求供試品溶液和對照品溶液色譜圖中藥物峰保存時間與標物峰的保存時間比值應一樣。 3.氣相色譜鑒別法 方法同高效液相色譜法。 4.

13、紙色譜鑒別法 紙色譜法存在別離效能低、分析時間長等缺點，在藥物鑒別試驗中逐漸被薄層色譜法所取代。 二、鑒別試驗與原理 一有機氟化物 1鑒別試驗 取供試品約7mg，照氧瓶燃燒法附錄VIIC進展有機破壞，用水20ml與0.01mol/L氫氧化鈉溶液6.5ml為吸收液，俟燃燒完全后，充分振搖；取吸收液2ml，加茜素氟藍試液0.5ml，再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5ml，即顯藍紫色；同時做空白對照試驗。 2試驗原理 有機氟化物經(jīng)氧瓶燃燒法破壞，為堿性溶液吸收成為無機氟化物后，與茜素氟藍、硝酸亞鈰形成藍紫色絡合物。 二有機酸鹽 1水酸鹽 鑒別試驗一 取供試

14、品的稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色。 原理 本品在中性或弱酸性條件下，和三氯化鐵試液生成配位化合物，在中性時呈紅色，弱酸性時呈紫色；假設在強酸性中，配位化合物分解生成游離水酸。 本反響極為靈敏，只需取稀溶液進展試驗，如取用量大，產(chǎn)生顏色過深時，可加水稀釋后觀察。 鑒別試驗二 取供試品溶液，加稀鹽酸，即析出白色水酸沉淀；別離，沉淀在醋酸銨試液中溶解。 原理 水酸不溶于水0時溶解度為1g/1500L，故供試液加酸即析出游離水酸。由于水酸的酸性K1.06×10-3，25大于醋酸K1.85×10-5，25，故能與醋酸銨作用釋出醋酸，而本身形成銨鹽溶解。析出的水酸亦可經(jīng)冷水洗滌

15、、枯燥后測定熔點158-161。2苯甲酸鹽3乳酸鹽4枸櫞酸鹽5酒石酸鹽6醋酸鹽 鑒別試驗 取供試品，加硫酸和乙醇后加熱，即產(chǎn)生乙酸乙酯的香氣。 三無機金屬鹽 1鈉鹽 鑒別試驗一 取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。 原理 鈉的火焰光譜在可見光區(qū)，有589.0nm、589.6nm主要譜線，故其燃燒火焰顯黃色。本焰色反響極為靈敏最低檢出限量為0.1ng鈉離子。因此，對所用儀器和試劑要求必須很嚴格。在檢測前應將鉑絲燒紅，趁熱浸入鹽酸中，如此反復數(shù)次，直至火焰不染黃色后，再蘸取供試品進展測定。只有當強烈的黃色火焰持續(xù)數(shù)秒鐘不退，才能確認為鈉鹽。 鑒別試驗二 取供試品的中

16、性溶液，加醋酸氧鈾鋅試液，即生成黃色沉淀。 原理 其反響式為： 本試驗中，供試品溶液應為中性；有些有機酸鹽如水酸鈉遇醋酸氧鈾鋅試液能生成有色配位化合物，故在試驗前應對供試液進展預處理。其處理方法是，在供試液中參加稀鹽酸，濾過，取濾液蒸干，加水溶解后，再供試驗用；試驗中，醋酸氧鈾鋅試液要加多過量；必要時，還需用玻璃棒摩擦試管壁，以促進黃色沉淀的析出。 2鉀鹽 鑒別試液一 焰色反響顯紫色，但有少量鈉鹽混存時，須隔色玻璃透視，方能識別。 原理 鉀的火焰光譜在可見光區(qū)有766.49nm、769.90nm與404.4nm幾條譜線，其中以766.49nm與769.90nm兩條譜線最強。由于人眼在此波長附近

17、敏感度較差，故鉀鹽的燃燒火焰顯紫色。如有鈉鹽混存，因鈉焰靈敏度很高，需透過藍色鈷玻璃將鈉焰黃色濾去，此時火焰顯粉紅色。 鑒別試驗二 取供試品，加熱熾灼，除去可能含有的銨鹽，放冷后，加水溶解，再加0.1%四苯硼鈉溶液與醋酸，即生成白色沉淀。 原理 其反響式為： 假設有NH4+存在，顯一樣反響，故必須預先加熱熾灼除去，以免干擾試驗結(jié)果的識別。 3銨鹽 鑒別試驗一 取供試品，加過量氫氧化鈉試液后，加熱，即分解，發(fā)生氨臭；遇濕潤的紅色石蕊試紙，能使之變藍，并能使硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯黑色。 原理 其反響式為： 試驗原理 其反響式為： 鑒別試驗一 焰色反響顯磚紅色622nm。 鑒別試驗二 取供試品溶液

18、120，加甲基紅指示液2滴，用氨試液中和，再滴加鹽酸至呈酸性，加草酸銨試液，即生成白色沉淀；別離，沉淀不溶于醋酸，但可溶于鹽酸。 試驗原理 其反響式為： 白色5鎂鹽 鑒別試驗一 取供試品溶液，加氨試液，即生成白色沉淀；滴加氯化銨試液，沉淀溶解；再加磷酸氫二鈉試液1滴，振搖，即生成白色沉淀。沉淀在氨試液中不溶。 試驗原理 其反響式為： 鑒別試驗一 焰色試驗顯黃綠色553.56nm，500nm，通過綠色玻璃透視，火焰顯藍色488nm。鑒別試驗二 取供試品溶液，加稀硫酸，即生成白色沉淀；別離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。鑒別試驗一 取供試品溶液，加氫氧化鈉試液堿化后，參加碳酸鈉試液，煮沸，即生成白色

19、沉淀Li2O；別離，沉淀能在氯化銨試液中溶解(NH3)。 鑒別試驗二 焰色試驗顯胭脂紅色。670.78nm 鑒別試驗三 取供試品適量，參加稀硫酸或可溶性硫酸鹽溶液，不生成沉淀與鍶鹽區(qū)別 試驗原理 鋰鹽和稀硫酸或可溶性硫酸鹽溶液不發(fā)生沉淀反響，而鍶鹽則相反，以此可區(qū)別鋰鹽和鍶鹽。 8鐵鹽 1亞鐵鹽： 鑒別試驗一 取供試品溶液，加鐵氰化鉀試液，即生成深藍色沉淀，別離，沉淀在稀鹽酸中不溶，但加氫氧化鈉試液，即分解成棕色沉淀。 試驗原理 其反響式為： 深藍色藤氏藍棕色試驗原理 其反響式為： (深紅色鑒別試驗一 取供試品溶液，加亞鐵氰化鉀試液，即生成深藍色沉淀，別離，沉淀在稀鹽酸中不溶，但加氫氧化鈉試液

20、，即分解成棕色沉淀。 試驗原理 其反響式為： 深藍色普魯士藍試驗原理 其反響式為： 血紅色本試驗一般應在鹽酸溶液中進展；不能用硝酸，因硝酸中可能含有亞硝酸，干擾試驗結(jié)果。 紅色1亞汞鹽 鑒別試驗一 取供試品，加氨試液或氫氧化鈉試液，即變?yōu)楹谏?試驗原理 其反響式為： 黑色黑色試驗原理 其反響式為： 黃色黑色鑒別試驗一 取供試品溶液，加氫氧化鈉試液，即生成黃色沉淀(HgO)。 鑒別試驗二 取供試品的中性溶液，加碘化鉀試液，即生成猩紅色沉淀，能在過量碘化鉀試液中溶解；再以氫氧化鈉堿化，加銨鹽即生成紅棕色沉淀。 試驗原理 其反響式為： 猩紅色鑒別試驗一 取供試品溶液，加稀鹽酸，即生成凝乳狀沉淀，別

21、離，沉淀能在氨試液中溶解，加硝酸沉淀又重新出現(xiàn)。 試驗原理 其反響式為： 鉻酸銀沉淀能溶于硝酸中，也可和氨試液作用生成Ag(NH3)2+而溶解，但不溶于酸性較弱的醋酸中。 11銅鹽 鑒別試驗一 取供試品溶液，滴加氨試液，即生成淡藍色沉淀，再加過量氨試液，沉淀即溶解，生成深藍色溶液。 試驗原理 其反響式為： 試驗原理 其反響式為： 紅棕色鑒別試驗一 取供試品溶液，加碘化鉀試液，即生成紅棕色溶液或暗棕色沉淀，別離，沉淀能在過量碘化鉀試液中溶解成黃棕色的溶液，再加水稀釋，又生成橙色沉淀。 試驗原理 其反響式為： 鉍鹽量少時，則形成紅棕色溶液。 紅棕色溶液加水稀釋，即形成橙色的碘化氧鉍沉淀。 橙色如鉍鹽濃度較小時，這一反響現(xiàn)象不明顯。 鑒別試驗二 取供試品溶液，用稀硫酸酸化，加10%硫脲溶液，即顯深黃色。 試驗原理 鉍鹽和硫脲在酸性條件下，具有特別靈敏的顏色反響1，其顏色取決于生成沉淀的組成，沉淀的組成取決于反響的條件，Bi3+與SC(NH2)2的比例為11時為黃褐色；12時為黃色；13時為黃褐色。硫脲和多數(shù)金屬離子都可發(fā)生顏色反響。 13鋅鹽 鑒別試驗一 取供試品溶液，加亞鐵氰化鉀試液，即生成白色沉淀，別離，沉淀在稀鹽酸中不溶解。 試驗原理 其反響式為： 白色亞鐵氰化