王佩開題報(bào)告終稿

1、中華鱉中華鱉IGF系統(tǒng)基因的克隆及序列分析系統(tǒng)基因的克隆及序列分析姓姓 名：王名：王 佩佩 班班 級：級： 2011級水產(chǎn)級水產(chǎn)2班班指導(dǎo)老師：王曉清指導(dǎo)老師：王曉清 教授教授 010204研究背景研究方法預(yù)期結(jié)果目 錄 / contents05研究的意義與目的03國內(nèi)外研究進(jìn)展12345培育高產(chǎn)、抗逆的中華鱉良種。肉味鮮美，營養(yǎng)豐富，蛋白質(zhì)含量高，有活血化瘀，滋補(bǔ)強(qiáng)身的功效是一種滋補(bǔ)珍品。經(jīng)濟(jì)效益高，社會需求量大。養(yǎng)殖水平的提高，養(yǎng)殖規(guī)模增大。生長減慢、個(gè)體小型化、單產(chǎn)降低、病害易發(fā)等生產(chǎn)性狀退化現(xiàn)象 。 研究 背景 1 1、中華鱉的研究現(xiàn)狀、中華鱉的研究現(xiàn)狀 目前，中華鱉的養(yǎng)殖方式主要有魚

2、鱉混養(yǎng)、池塘單養(yǎng)和工廠化養(yǎng)殖，中華鱉自20世紀(jì)90年代開始在中國廣泛養(yǎng)殖，截至2011年，中華鱉年產(chǎn)量達(dá)25萬多噸。目前，有關(guān)中華鱉的研究主要集中在營養(yǎng)、養(yǎng)殖、病害、形態(tài)、遺傳多樣性、性別分化等方面。 國內(nèi)外研究進(jìn)展國內(nèi)外研究進(jìn)展 由于長期盲目的苗種培育，導(dǎo)致目前中華鱉種質(zhì)資源混雜，中華鱉的生長性能下降，因此，有關(guān)中華鱉的生長性能的報(bào)道多數(shù)集中在飼料營養(yǎng)、藥物等研究上，而從基因角度提高中華鱉的生長性能，從而改變中華鱉選育工作方法的研究較少。張志允采用微衛(wèi)星分子標(biāo)記技術(shù)對中華鱉黃河群體F3世代選育，發(fā)現(xiàn)F3世代保持較高的遺傳多樣性，顯示具有較大的選育潛力。李林春通過轉(zhuǎn)入“全魚”生長激素基因，提高

3、了F0轉(zhuǎn)基因中華鱉的生長速度。2、IGF系統(tǒng)基因在水產(chǎn)動(dòng)物中的研究現(xiàn)狀系統(tǒng)基因在水產(chǎn)動(dòng)物中的研究現(xiàn)狀 IGFs通過自分泌、旁分泌和內(nèi)分泌的方式作用于靶器官,影響細(xì)胞的生長和分化,并抑制細(xì)胞凋亡，IGFs,尤其是IGFI，能夠介導(dǎo)GH在體內(nèi)完成生理功能。IGFI及IGF能誘導(dǎo)羅非魚卵母細(xì)胞的成熟和顆粒細(xì)胞的增殖與分化。 此外，魚類IGF還可能參與卵黃的生成,以供胚胎后期發(fā)育使用。 魚類 IGF-的研究，自 1989 年銀大麻哈魚 IGF-cDNA 的首次克隆，人們已從羅非魚、斑馬魚中分離了 IGF-基因。近幾年的研究表明，IGF還能刺激或抑制一些激素的釋放。有報(bào)道IGF-I在體外會抑制雜交條紋鱸

4、魚和大比目魚垂體釋放GH。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)，和抑制GH釋放不同，IGF-和IGF-會刺激羅非魚垂體釋放促乳素(prolactin，PRL)，但并不改變PRL mRNA含量，說明IGF是在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)PRL的。3 3、候選基因的研究、候選基因的研究 相對傳統(tǒng)育種方法，基因候選法在動(dòng)物育種工作中的應(yīng)用有多態(tài)位點(diǎn)選擇簡單、統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)效率高、應(yīng)用范圍廣、總費(fèi)用低，易于實(shí)施、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)。目前，在牛、羊、豬等家禽育種工作中開始應(yīng)用。有學(xué)者通過對IGF-I、IGF-及IGF-R這三個(gè)候選基因的多態(tài)性進(jìn)行研究,并分析了IGF-I的微衛(wèi)星多態(tài)可能對山羊的產(chǎn)羔數(shù)的影響。 IGF-I作為機(jī)體生長、發(fā)育和代謝的一個(gè)

5、重要調(diào)控因子，同時(shí)也是生長激素(GH)啟動(dòng)生長活性的主要介導(dǎo)者。其對動(dòng)物胚胎期的發(fā)育及其出生后的生長都起著重要作用。國外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，IGF-基因是影響肌肉發(fā)育表達(dá)的主要候選基因，IGF-與機(jī)體的生長發(fā)育相關(guān)，IGF-的缺乏或者過度表達(dá)都會導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生相應(yīng)的變化。研究的意義研究的意義胰島素樣生長因子（IGF）:IGF-I、IGF-、IGF-IR、IGF-R、IGFBPs。IGFs在動(dòng)物的胚胎期和生后的生長發(fā)育期都介導(dǎo)了GH激素大部分的促進(jìn)生長的生物學(xué)功能,調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體內(nèi)糖類代謝、脂肪代謝、蛋白合成、肝臟功能、線性生長等功能。IGF-I和IGF-的分泌受到神經(jīng)內(nèi)分泌激素的調(diào)控,主要于動(dòng)物機(jī)體的肝

6、臟和局部各個(gè)組織以內(nèi)分泌、自分泌及旁分泌等作用形式分泌，分泌的IGFs進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞液系統(tǒng),依賴于IGFBPs家族基因的運(yùn)載而提高IGFs的半衰期以及組織的偏向性從而促進(jìn)組織細(xì)胞的分化與增殖。此外，IGF對肌肉、心血管系統(tǒng)、腦、生殖系統(tǒng)、脂肪組織、免疫系統(tǒng)、肝、腎、腎上腺、消化系統(tǒng)、腫瘤細(xì)胞生長都有重要作用。 目的 IGF系統(tǒng)基因作為調(diào)節(jié)生長的一個(gè)重要基因家族,在調(diào)節(jié)生長過程中的作用機(jī)制是研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)研究以中華鱉為實(shí)驗(yàn)對象，探究IGF系統(tǒng)基因?qū)χ腥A鱉生長性狀的影響，尋找可以用于輔助選擇的可能性標(biāo)記，為中華鱉的分子輔助育種提供理論依據(jù)。 研究目的 研究 活體解剖得到肌肉、肝臟等組織，液氮速凍，置于-80冰箱保存?zhèn)溆谩CBI查找近緣物種基因序列設(shè)計(jì)簡并引物，擴(kuò)增獲得基因部分片段序列，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行3及5端擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測、測序、生物信息學(xué)分析?；蛐蛄蟹治鰷y序PCR引物設(shè)計(jì)反轉(zhuǎn)錄提取RNA實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)預(yù)期結(jié)果實(shí)驗(yàn)預(yù)期結(jié)果克隆中華