水環(huán)境糞大腸菌群監(jiān)測2種分析方法的對比

1、水環(huán)境糞大腸菌群監(jiān)測2種分析方法的比照糞大腸菌群是監(jiān)測水體是否被糞便污染的指示菌，是監(jiān)測地表水尤其是飲用地表水的重要指標(biāo)之一。它是總大腸菌群的一部分，其根本性狀和總大腸菌群相似。在實驗時，將培養(yǎng)溫度進(jìn)步到44.5C，我們把可以在此條件下生長并發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣的，稱糞大腸菌群。經(jīng)典的糞大腸菌群的監(jiān)測方法是采用多管發(fā)酵法，但這種方法具有前期準(zhǔn)備時間長、任務(wù)繁重;培養(yǎng)過程中操作繁瑣的缺點(diǎn)，并且事后還要清洗大量的試管，浪費(fèi)人力、物力、財力。為此很多廠家研發(fā)了大腸菌群的快檢紙片。采用紙片法，大大縮短了實驗的時間，并且根本不需要再清理大量的試管，減輕了勞動強(qiáng)度，也節(jié)約了珍貴的水資源。那么，多管發(fā)酵法和紙片法的

2、數(shù)據(jù)終究有沒有相關(guān)性?作者采用某廠消費(fèi)的大腸菌群的快檢紙片通過比照實驗旨在討論這個問題。一、分析方法1、多管發(fā)酵法(1)培養(yǎng)基單倍和三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(培養(yǎng)液的成分與制備略，下同)EC培養(yǎng)液(2)步驟水樣接種量：將水樣充分混勻后，根據(jù)水樣污染的程度確定水樣的接種量，每個樣品至少用3個不同的水樣量接種，同一接種水樣量要有五管。假設(shè)接種的體積為10ml，那么接種于含有三倍濃度5ml的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管內(nèi)，假設(shè)接種量為1ml或者小于1ml，那么接種于含有單倍濃度10ml的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管內(nèi)。初發(fā)酵：將接種了水樣的試管，在370.5C下培養(yǎng)242h，產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的發(fā)酵管說明實驗陽性。如產(chǎn)氣不

3、明顯，可輕拍試管，有小氣泡升起的為陽性。復(fù)發(fā)酵試驗細(xì)微振蕩初發(fā)酵陽性的發(fā)酵管，用3mm接種環(huán)將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到EC培養(yǎng)液中。在440.5C水浴中培養(yǎng)242h，培養(yǎng)后立即觀察。發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣說明確信試驗陽性。計算和報告結(jié)果根據(jù)不同接種量的發(fā)酵管所出現(xiàn)的陽性結(jié)果的數(shù)目，從MPN表中查相應(yīng)的MPN指數(shù)，計算出每升水中糞大腸菌群的MPN值。2、紙片法采用某廠消費(fèi)的大腸菌群快檢紙片水樣接種量：將水樣充分混勻后，根據(jù)水樣污染的程度確定水樣的稀釋倍數(shù)，每個樣品至少用3個不同的水樣量接種，同一接種水樣量要有五個紙片。假設(shè)接種的體積為10ml，那么接種于大紙片內(nèi)。假設(shè)接種量為1ml或者小于1ml，那么接種小紙片內(nèi)。

4、發(fā)酵試驗樣品接種后在440.5C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10-16小時后，觀察結(jié)果。計算和報告結(jié)果紙片說出現(xiàn)紅點(diǎn)，其周圍呈黃色者為陽性。根據(jù)不同接種量的紙片所出現(xiàn)的陽性結(jié)果的數(shù)目，從MPN表中查相應(yīng)的MPN指數(shù)，計算出每升水中糞大腸菌群的MPN值。二、t檢驗的結(jié)果根據(jù)成對樣本的假設(shè)檢驗，對這2組數(shù)據(jù)進(jìn)展成對數(shù)據(jù)平均數(shù)的比較，看它們有無顯著性差異。(公式略)計算結(jié)果：t=0.648,查t值表，df=14-1=13,t0.01,13=3.012,現(xiàn)實得t0.01。推斷：認(rèn)為2種試驗方法沒有顯著性差異。三、結(jié)論紙片法和多管發(fā)酵法監(jiān)測的結(jié)果沒有顯著性差異，用紙片法取代多管發(fā)酵法完全可行。(一)與傳統(tǒng)的多管發(fā)酵法相比，紙片法具有如下優(yōu)點(diǎn)：1、時間短10-16小時出檢測結(jié)果，大大縮短了監(jiān)測時間;2、降低了監(jiān)測人員的工作強(qiáng)度省去了煩瑣的前期培養(yǎng)基的配制、分裝、滅菌，后期洗刷試管，中期重新接種、培養(yǎng)等工作;3、結(jié)果易于判斷根據(jù)顏色識別，不用費(fèi)力觀察氣泡，檢測結(jié)果斷定簡單直觀;(二)在使用紙片法時，筆者認(rèn)為需要注意以下幾點(diǎn)：1、對取樣量為1ml的紙片，移液管要在紙片的中央放液，使樣品均勻的向四周擴(kuò)散。2、取樣量為10ml的紙片，因為水樣不能完全被紙片