HPLC校驗方案..

1、1西安益爾渭之陽制藥有限公司高效液相色譜儀校驗報告(Xi n Yier Weizhiyang Pharmaceutical CO.,LTD HPLC Calibration Protocol)報口準備：時間:Prepared by:Date:報告復核：時間:Reviewed by:Date:報告許可：時間:Approved by:Date:二零零五年三月高效液相色譜儀校驗報告Detail HPLC Calibratio n protocol1. 適用范圍該方案僅針對于本公司新購，使用中以及大修后的具有紫外-可見波長檢測器 的高效液相色譜儀(HPLC)TIER2的檢定。2. 檢定結(jié)果處理和檢定周

2、期按此要求檢定合格的儀器為合格儀器，反之，為不合格。儀器的檢定周期為 1 年。3. 校驗依據(jù)中華人民共和國國家計量檢定規(guī)程JJG 705-2002液相色譜儀4. 液相色譜檢定的主要技術(shù)指標檢定項目標準外觀參見校驗報告泵流量設(shè)定誤差v5%流量穩(wěn)定性誤差v3%梯度準確度誤差3%柱溫箱溫度設(shè)定誤差2 七控溫穩(wěn)定性誤差VC檢測器基線漂移(AU/h)5X10-3基線噪聲(AU)5X10-4最小檢測濃度(g/ml)1X10-7波長示值誤差魚 2nm波長示值重復性魚 2nm線性范圍羽 03定性、定量重復性定性測量重復性誤差1.5%定量測量重復性誤差2.0%手動進樣器相對準確度2.0%35.校驗內(nèi)容5-1 檢

3、定環(huán)境要求結(jié)果溫度15 C 30 C相對濕度20% 85%5-2 受檢儀器組成液相色譜型號制造商手動進樣器型號序列號泵型號序列號柱溫箱型號序列號檢測器型號序列號5-3 檢定設(shè)備儀器有效期備注秒表設(shè)備編號：確認機構(gòu)：證書編號：分析天平電子天平設(shè)備編號：確認機構(gòu)：證書編號：數(shù)字溫度計設(shè)備編號：確認機構(gòu)： 證書編號：5-4 標準物質(zhì)名稱編號有效期萘-甲醇溶液紫外分光光度計溶液標準物質(zhì)5 校驗要求及結(jié)果5-5-1 外觀的檢定儀器型號日期檢定員復核員檢杳項目檢查結(jié)果儀器上是否有清晰的名稱4儀器上是否有清晰的型號儀器的旋鈕，按鍵，開關(guān)是否正常儀器輸液的接頭是否緊密，牢固儀器在規(guī)定的壓力范圍有無泄漏結(jié)論5-

4、5-2 輸液系統(tǒng)的檢定5-5-2-1 泵流量設(shè)定值誤差和流量穩(wěn)定性誤差的檢定以 100%甲醇為流動相，流量為 1ml/min 該流速，待流速穩(wěn)定后，在流動相排 出口用事先清洗校驗過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，準確地記錄 規(guī)定體積的相應收集時間。計算泵流量設(shè)定值誤差 SS和流量穩(wěn)定性誤差的檢定 SR。結(jié)果按下式計算：SS= （ FM-FS）/FSX100%SR=（FMAX-FMIN）/F平均X100%FM= V/t式中：SS- 流量設(shè)定值誤差（%）FS- 流量設(shè)定值（ml/min）V 收集流動相的體積（ml）t-收集流動相的時間（min）SR流量穩(wěn)定性誤差（%）FMAX-同一組測量中流量

5、最大值（ml/min ）FMIN- 同一組測量中流量最小值（ml/mi nF平均-同一組測量值的算術(shù)平均值（ml/min）泵流量設(shè)定值誤差和流量穩(wěn)定性誤差測量要求及標準流量設(shè)疋值（ml/min）0.51.03.0測量次數(shù)333收集流動相時間（min）864允許誤差SS5%3%2%SR3%2%2%5泵流量設(shè)定值誤差及流量穩(wěn)定性誤差的檢定記錄儀器型號日期檢定員復核員泵流量設(shè)定值誤差及流量穩(wěn)定性誤差接受標準：泵流量設(shè)定值的誤差 SS:(2%“ 5%)流量穩(wěn)定性誤差 SR:V (2%“ 3%)流動相甲醇流動相密度P0.791 g/cm3FSFS= 0.5 ml/minFS= 1.0 ml/minF3=

6、 3.0 ml/mintW容量瓶W容量瓶+w流動相V(ml)FmFmeanSSSR結(jié)論5-5-2-2 梯度準確度的檢定設(shè)置溶劑梯度程序。A 溶液為水，B 溶液為含 0.1%丙酮的水溶液。A 從 100%變 為 0。先以 A 溶液走基線，(流動相不通過色譜柱)，基線平穩(wěn)后執(zhí)行梯度程序， 畫出梯度變化曲線，并讀出在每個測量點的信號值。重復測量兩次，求平均值。從 B 溶液的含量及相對應的信號值 Lmi和 Lm計算梯度準確度 Gci。Gci最大值為 儀器梯度準確度誤差。計算公式如下：Gci= (Lmi -_m) / LmX 100%式中：Gci=第 i 段梯度準確度；Lmi=第 i 段輸出信號或記錄儀

7、的讀數(shù)；Lm=各段輸出信號或記錄儀讀數(shù)總均值6梯度準確度的檢定記錄儀器型號日期檢定員復核員梯度準確度誤差接受標準：梯度準確度誤差Gci: 3%流動相 A水|流動相 B0.1%丙酮水溶液F=3.0ml/minB 溶液的變化范圍0%20%40%60%80%100%Time記錄儀讀數(shù)12LmLm(maen)Gci(%)結(jié)論5-5-3 柱溫箱溫度控制系統(tǒng)的檢定5-5-3-1柱溫箱溫度設(shè)定值誤差 Ts與控溫穩(wěn)定性誤差 TC選擇最低使用溫度(20 C)和最高使用溫度(60 C)進行檢定，待指示溫度穩(wěn)定后， 每隔 10 分鐘記錄一次，共計 7 次，求出算術(shù)平均值。設(shè)定值與平均值之差為 UTs, 7 次測量值

8、中最大值與最小值之差為控溫穩(wěn)定性誤差Tc。柱溫箱溫度控制系統(tǒng)的檢定記錄儀器型號日期檢定員復核員柱溫箱溫度控制系統(tǒng)的接受標準：柱溫箱溫度設(shè)定值誤差 AT: 29 控溫穩(wěn)定性誤差 TC : VCTS1CC)20Tm1No1234567平均讀數(shù)T2TC1TS260Tm2No1234567平均讀數(shù)T2TC2結(jié)論5-5-4 檢測器5-5-4-1 基線漂移和基線噪聲檢定使用如下色譜條件：色譜柱：Ci8,檢測波長為 254nm，流動相為 100%7甲醇，流速為 1.0ml/min。待基線穩(wěn)定后，記錄基線 30 分鐘，計算基8線漂移和噪聲?；€噪聲及基線漂移檢定記錄儀器型號日期檢定員復核員基線噪聲及基線漂移接

9、受標準： 基線噪聲：5X10-4（ AU ）基線漂移：5X10-3（ AU/h ）色譜柱流動相流速檢測波長基線噪聲（AU ）基線漂移測定值結(jié)論5-5-4-2 最小檢測濃度在測定儀器的基線噪聲的條件下，注射 20ul 濃度為 1X10-7g/ml 的萘 -甲醇溶液，記錄樣品峰高。在其樣品峰高大于或等于兩倍基線噪聲 峰高時，計算最小檢測濃度公式如下：CL=2 HN C/H式中：CL最小檢測濃度（g/ml ）HN噪聲峰高（記錄儀格數(shù)或?qū)崪y高度 mm ）C樣品濃度（g/ml ）H樣品峰高（記錄儀格數(shù)或?qū)崪y高度 mm ）最小檢定濃度檢定記錄儀器型號日期檢定員復核員最小檢測濃度接受標準：最小檢測濃度：4X

10、10-8g/ml（萘的甲醇溶液）樣品濃度噪聲值峰高最小檢測濃度結(jié)論5-5-4-3 波長示值誤差用水將流動池沖洗干凈，置零。用 0.0005mol/l 硫酸溶液沖洗流動池， 并將其注滿。設(shè)定流速為0.5ml/min, 檢測器波長為 200nm。測定其 從 200nm 到 400nm 條件下的紫外吸收值。（在規(guī)定的標準波長（235nm,257nm, 313nm, 350nm） 周圍正負 5nm 范圍內(nèi)每 1nm 測試 1 次，測試 范圍應含括 200nm,及400nm 兩點）記錄相應的紫外吸收值或峰高。用0.006%重鉻酸鉀標準溶液清洗流動池，并將其注滿。設(shè)定檢測器波長 為 200nm, 進樣 2

11、0ul/min。測定其從 200nm 到 400nm 條件下 的紫外 吸收值。記錄相應的紫外吸收值或峰高。重復 3 次?？鄢瞻缀蟮臉O 點吸收值對應的波長與標準波長間的差為波長示值誤差。3 次測量中最大值與最小值之差為波長重復性誤差9波長示值誤差及波 長重復性誤差的檢定記錄儀器型號日期檢定員復核員波長誤差接受標準：示值誤差 ： 2nm重復性誤差：103線 性范 圍丙酮%0. 10.20. 30. 40. 50.60. 70. 80. 91.0讀數(shù)平均值線性范圍結(jié)論5-5-5 手動進樣器進樣線性使用適當?shù)妮?甲醇標準溶液或穩(wěn)定的待分析樣品，以甲醇為流動相，波長設(shè)定為 254nm，分 別進樣 5u

12、l、10ul、15ul、20ul，至 少進樣 2 針。記錄萘的峰面積，計算其平均峰面積相對于進樣量的線性回歸。儀器型號日期檢定員復核員自動進樣器相對準確度接受標準：相對準確度 RA : 土 2%V12345A平均RSD%5ul10ul15ul20ul線性方程結(jié)論5-5-6 定性，定量測量重復性的檢定使儀器處于正常工作狀態(tài)，注入適當?shù)妮?甲醇標準溶液或穩(wěn)定的待 分析樣品，記錄保留時間和峰面積，連續(xù)測定 6 次，按如下公式計算RSD%。RSD定性（定量）=刀（Xi-X平均）2/（n-1）0.5/X平均X100%日期復核員11式中：Xi第 i 次測得的保留時間或峰面積12X平均一一 n 次測量結(jié)果的

13、算術(shù)平均值I測量序號n- 測量次數(shù)定性，定量測量重復性的檢定的記錄儀器型號日期檢定員復核員定性，定量測量重復性接受標準定性測量重復性誤差 RSD定性： 1.5% 定量測量重復性誤差 RSD定量：3.0%試樣名稱濃度進樣量波長流動相流量No123456平均保留時間(mi n)峰面積定性重復性結(jié)果定量重復性結(jié)果結(jié)論定性重復性與定量重復性符合要求6.附圖a.定性，定量測量重復性的檢定色譜圖b.自動進樣器線性圖譜c.波長示值誤差圖譜d.梯度誤差圖譜e.基線噪聲和基線漂移13附 錄 1 ：HPLC 檢 定 證 書檢定結(jié)果B.1 外 觀 檢 查:B.2 泵流量設(shè)定誤差和重 復性誤 差: 泵 流 量 設(shè) 定

14、 值 /(ml/min): 0.5 實 測值 /(l/min): 設(shè) 定 誤 差 Ss/%: 重 復 性 誤 差SR/%: 泵 梯 度 誤 差 Gc/%:B.3 柱箱溫度設(shè)定值誤差 Ts：柱箱溫度穩(wěn)定性 Tc:B.4 檢測器性能 : 基 線 噪 聲 /AU: 基 線 漂 移/(AU/h): 波長示值誤差/nm:最小檢測濃度/(g/ml 萘沖醇):線性范圍:B.5 整 機 性 能定 性 重 復 性 RSD6/%:定 量 重 復 性 RSD6/%:審 核人/日 期:復核人 /日期 :附錄 2：色譜柱性能測試A.1 液相色譜柱性能A.1.1 柱效：反相色譜柱的理論塔板數(shù)一般在 3X1044X104m

15、-1范圍內(nèi)，正相色譜柱的 理論塔板數(shù)在 4X1045X104m-1范圍內(nèi).A.1.2 色譜峰對稱性：被測物(蒽)的不對稱因子As一般在 0.81.6 范圍內(nèi).A. 2 柱性能測試方法1.0 1.5檢定人/日期:14A.2.1 測試條件和標準溶液 色譜柱性能測試條件和液相色譜儀的檢定條件基本相同 .反相色譜柱側(cè)使用的標準溶液為 10g/ml 尿嘧啶,10g/ml 聯(lián)苯和蒽( (萘)的甲醇 溶液,正相色譜柱測試用的標準溶液為 10ml/ml 甲苯和 10ml/ml 硝基苯的正己烷 溶液.A.2.2 柱效的測試方法 :將被測試的色譜柱接到檢定合格的液相色譜儀器上,反相柱用甲醇 +水(85%+15%)為流動相，內(nèi)徑為 4.6mm 時,流速為 1.0ml/min,紫外檢測波長為 254nm,靈敏度選擇在0.04 左右,按色譜柱說明書操作，開啟儀器穩(wěn)定后，從進樣口 注入 10ul 反相柱測試標準溶