激光掃描共聚焦顯微..GHX

1、 杲海霞河北醫(yī)科大學藥理教研室Hippocampus neurons expressing GFP熒光顯微鏡LSCM激光掃描共聚焦顯微鏡熒光顯微鏡激光掃描共聚焦顯微鏡中常見的激光器Leica DM IRBE 倒置熒光顯微鏡LSCM物鏡的重要參數(shù) NA 4x 20 x 10 x 40 x 60 x 100 x 分析軟件控制軟件+圖1. 共聚焦顯微鏡簡化原理圖 用于激發(fā)熒光的激光束用于激發(fā)熒光的激光束(Laser)透過入射小孔透過入射小孔(light source pinhole)被二向色鏡被二向色鏡(Dichroic mirror)反射，通過顯微物鏡反射，通過顯微物鏡(Objective len

2、s)匯聚后入射于待觀察的標本匯聚后入射于待觀察的標本(specimen)內(nèi)部焦點內(nèi)部焦點(focal point)處。激光照射所產(chǎn)生的熒光處。激光照射所產(chǎn)生的熒光(fluorescence light)和少和少量反射激光一起，被物鏡重新收集后送往二向色鏡。其中攜帶圖像信息的熒光由于量反射激光一起，被物鏡重新收集后送往二向色鏡。其中攜帶圖像信息的熒光由于波長比較長，直接通過二向色鏡并透過出射小孔波長比較長，直接通過二向色鏡并透過出射小孔(Detection pinhole)到達光電探測到達光電探測器器(Detector)（通常是光電倍增管（通常是光電倍增管（PMT）或是雪崩光電二極管（）或是雪崩

3、光電二極管（APD），變成），變成電信號后送入計算機。而由于二向色鏡的分光作用，殘余的激光則被二向色鏡反射，電信號后送入計算機。而由于二向色鏡的分光作用，殘余的激光則被二向色鏡反射，不會被探測到。不會被探測到。共軛ZXYXY平面Optical sections collected simultaneously at three different excitation wavelengths (488, 568, and 647 nanometers). The specimen is the fruit fly third instar wing imaginal disk. XYXY平面X

4、YXY平面timeTime-lapse imaging of a living fruit fly embryo injected with calcium green is presented in Figure 2. The series of images shows the change in distribution of the fluorescent probe over time. 0 s10 s20 s30 sPeripheral nervous system of a fruit fly embryo ZXYXY平面Xenopus oocytesCalcium green用細胞內(nèi)液稀釋Calcium green導入微注射器以20nL/oocyte注射卵母細胞18C避光放置40分鐘共聚焦顯微鏡觀察HEK293 cells expressing PLC-PH-GFPPLC-PH-GFP + H1 receptor LipofactAMINE2000 混合20分鐘混合物孵育細胞 4-6小時洗掉轉染液，加入正常培