島津LC10AT型液相基礎(chǔ)知識(shí)

1、島津LC10AT型液相基礎(chǔ)知識(shí) 目的目的:標(biāo)準(zhǔn)島津標(biāo)準(zhǔn)島津LC-10AT型高效液相型高效液相色譜儀的使用。色譜儀的使用。范圍范圍:適用于島津適用于島津LC-10AT型高效液型高效液相色譜儀的使用。相色譜儀的使用。職責(zé)職責(zé):質(zhì)檢員對(duì)本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。質(zhì)檢員對(duì)本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。一、一、 系統(tǒng)組成系統(tǒng)組成 本系統(tǒng)由本系統(tǒng)由2個(gè)個(gè)LC-10ATvp溶劑輸送泵分主溶劑輸送泵分主/A泵和副泵和副/B泵、泵、Rheodyne 7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥、手動(dòng)進(jìn)樣閥、SPD-10Avp紫外紫外-可見檢測(cè)器、可見檢測(cè)器、N2000色譜數(shù)據(jù)工作站和電腦等組成，另外還包括打印機(jī)、不連續(xù)色譜數(shù)據(jù)工作站和電腦等組成，另外還包

2、括打印機(jī)、不連續(xù)電源等輔助設(shè)備。電源等輔助設(shè)備。 二、二、 準(zhǔn)備準(zhǔn)備1 、準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用適宜的過(guò)濾，超聲脫氣、準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用適宜的過(guò)濾，超聲脫氣20min。2 、根據(jù)待檢樣品的需要更換適宜的洗脫柱注意方向和定、根據(jù)待檢樣品的需要更換適宜的洗脫柱注意方向和定量環(huán)。量環(huán)。3、 配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制，用適宜配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制，用適宜的的0.45m濾膜過(guò)濾。注意腐蝕性與有機(jī)系的的溶劑濾膜過(guò)濾。注意腐蝕性與有機(jī)系的的溶劑4 、檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正、檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。常。 接通電源，依次開啟

3、不連續(xù)電源、接通電源，依次開啟不連續(xù)電源、B泵、泵、A 泵、檢測(cè)器，待泵泵、檢測(cè)器，待泵和檢測(cè)器自檢完畢后，翻開打印機(jī)、電腦顯示器、主機(jī)，最后翻開和檢測(cè)器自檢完畢后，翻開打印機(jī)、電腦顯示器、主機(jī)，最后翻開色譜工作站。色譜工作站。三、三、 開機(jī)開機(jī)四、四、 參數(shù)設(shè)定參數(shù)設(shè)定1、 波長(zhǎng)設(shè)定：在檢測(cè)器顯示初始屏幕時(shí)，按波長(zhǎng)設(shè)定：在檢測(cè)器顯示初始屏幕時(shí)，按func鍵，用數(shù)字鍵輸入所需波長(zhǎng)鍵，用數(shù)字鍵輸入所需波長(zhǎng)值，按值，按Enter鍵確認(rèn)。按鍵確認(rèn)。按CE鍵退出到初始屏幕。鍵退出到初始屏幕。2 、流速設(shè)定：在、流速設(shè)定：在A泵顯示初始屏幕時(shí)，按泵顯示初始屏幕時(shí)，按func鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的流速鍵，

4、用數(shù)字鍵輸入所需的流速柱在線時(shí)流速一般不超過(guò)柱在線時(shí)流速一般不超過(guò)1ml/min，按，按Enter鍵確認(rèn)。按鍵確認(rèn)。按CE鍵退出。鍵退出。3 、流動(dòng)相比例設(shè)定：在、流動(dòng)相比例設(shè)定：在A泵顯示初始屏幕時(shí)，按泵顯示初始屏幕時(shí)，按conc鍵，用數(shù)字鍵輸入流動(dòng)鍵，用數(shù)字鍵輸入流動(dòng)相相B的濃度百分?jǐn)?shù)，按的濃度百分?jǐn)?shù)，按Enter鍵確認(rèn)。按鍵確認(rèn)。按CE鍵退出。鍵退出。四、四、 參數(shù)設(shè)定參數(shù)設(shè)定4、 梯度設(shè)定：梯度設(shè)定：4.1 ：在：在A泵顯示初始屏幕時(shí)，按泵顯示初始屏幕時(shí)，按edit鍵，鍵，Enter鍵；鍵；4.2 ：用數(shù)字鍵輸入時(shí)間，按：用數(shù)字鍵輸入時(shí)間，按Enter鍵，重復(fù)按鍵，重復(fù)按func鍵選擇

5、所需功能鍵選擇所需功能FLOW設(shè)定流速，設(shè)定流速，BCNC設(shè)定流動(dòng)相設(shè)定流動(dòng)相B的濃度，按的濃度，按Enter鍵，用數(shù)鍵，用數(shù)字鍵輸入設(shè)定值，按字鍵輸入設(shè)定值，按Enter鍵；鍵；： 重復(fù)上一步設(shè)定其它時(shí)間步驟；重復(fù)上一步設(shè)定其它時(shí)間步驟；4.4 ：用數(shù)字鍵輸入停頓時(shí)間，重復(fù)按：用數(shù)字鍵輸入停頓時(shí)間，重復(fù)按func鍵直至屏幕顯示鍵直至屏幕顯示STOP，按，按Enter鍵。按鍵。按CE鍵退出。鍵退出。五、五、 更換流動(dòng)相并排氣泡更換流動(dòng)相并排氣泡1： 將將A/B管路的吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動(dòng)相的儲(chǔ)液瓶中；管路的吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動(dòng)相的儲(chǔ)液瓶中；2 ：逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)：逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)A/B泵的排液閥

6、泵的排液閥180，翻開排液閥；，翻開排液閥；3 ：按：按A/B泵的泵的purge鍵，鍵，pump指示燈亮，泵大約以的流速?zèng)_洗，指示燈亮，泵大約以的流速?zèng)_洗，3min可設(shè)定后自動(dòng)停頓；可設(shè)定后自動(dòng)停頓；4 ：將排液閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。：將排液閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。5 ：如管路中仍有氣泡，那么重復(fù)以上操作直至氣泡排盡。：如管路中仍有氣泡，那么重復(fù)以上操作直至氣泡排盡。6 ：如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接收，放入廢液瓶中，：如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接收，放入廢液瓶中，設(shè)流速為設(shè)流速為5ml/min，按，按pump鍵，沖洗鍵，沖洗3min后再按后再按p

7、ump鍵停泵，重鍵停泵，重新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。六、六、 平衡系統(tǒng)平衡系統(tǒng)1、查看基線：、查看基線：按：按?N2000色譜數(shù)據(jù)工作站操作規(guī)程色譜數(shù)據(jù)工作站操作規(guī)程?翻開翻開“在線色在線色譜工作站軟件，譜工作站軟件，：輸入實(shí)驗(yàn)信息并設(shè)定各項(xiàng)方法參數(shù)后，：輸入實(shí)驗(yàn)信息并設(shè)定各項(xiàng)方法參數(shù)后，：按下：按下“數(shù)據(jù)收集頁(yè)的數(shù)據(jù)收集頁(yè)的 按鈕。按鈕。 六、六、 平衡系統(tǒng)平衡系統(tǒng)2 、等度洗脫方式、等度洗脫方式 2.1 ：按：按A泵的泵的pump鍵，鍵，A、B泵將同時(shí)泵將同時(shí)啟動(dòng)，啟動(dòng)，pump指示燈亮。用檢驗(yàn)方法規(guī)定的指示燈亮。用檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)，一般最少需

8、流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)，一般最少需6倍柱體積的倍柱體積的流動(dòng)相。流動(dòng)相。 2.2 ：檢查各管路連接處是否漏液，如漏：檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。液應(yīng)予以排除。 2.3 ：觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力：觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動(dòng)應(yīng)不超過(guò)波動(dòng)應(yīng)不超過(guò)1MPa。如超過(guò)那么可初步判。如超過(guò)那么可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按檢查管路后再斷為柱前管路仍有氣泡，按檢查管路后再操作。操作。 2.4 ：觀察基線變化。如果沖洗至基線漂：觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移移0.01mV/min，噪聲為，噪聲為25mmol/L25mmol/L的緩沖液的緩沖液4.4.每天沖洗柱每天沖洗柱5.5.穩(wěn)定進(jìn)

9、樣條件穩(wěn)定進(jìn)樣條件, ,調(diào)節(jié)流動(dòng)相調(diào)節(jié)流動(dòng)相6.6.采用保護(hù)柱采用保護(hù)柱二、二、 保存時(shí)間縮短保存時(shí)間縮短 1.1.流速增加流速增加2.2.樣品超載樣品超載3.3.鍵合相流失鍵合相流失4.4.流動(dòng)相組成變化流動(dòng)相組成變化5.5.溫度增加溫度增加1.1.檢查泵檢查泵, ,重新設(shè)定流速重新設(shè)定流速2.2.降低樣品量降低樣品量3.3.流動(dòng)相流動(dòng)相PHPH值保持在檢值保持在檢查柱的方向查柱的方向4.4.防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀5.5.柱恒溫柱恒溫三、三、 保存時(shí)間延長(zhǎng)保存時(shí)間延長(zhǎng) 1.1.流速下降流速下降2.2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化硅膠柱上活性點(diǎn)變化3.3.鍵合相流失鍵合相流失4.4.流

10、動(dòng)相組成變化流動(dòng)相組成變化5.5.溫度降低溫度降低1.1.管路泄漏管路泄漏, ,更換泵密封圈更換泵密封圈, ,排除泵內(nèi)氣泡排除泵內(nèi)氣泡2.2.用流動(dòng)相改性劑用流動(dòng)相改性劑, ,如加三如加三乙胺乙胺, ,或采用堿至鈍化柱或采用堿至鈍化柱3.3.流動(dòng)相流動(dòng)相PHPH值保持在檢查值保持在檢查柱的方向柱的方向4.4.防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀5.5.柱恒溫柱恒溫四四 、 出現(xiàn)肩峰或分叉出現(xiàn)肩峰或分叉 1.1.樣品體積過(guò)大樣品體積過(guò)大2.2.樣品溶劑過(guò)強(qiáng)樣品溶劑過(guò)強(qiáng)3.3.柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道4.4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效5.5.進(jìn)樣器損壞進(jìn)樣器損壞1.1

11、.用流動(dòng)相配樣用流動(dòng)相配樣, ,總的樣品體積小于第一峰總的樣品體積小于第一峰的的15%15%2.2.采用較弱的樣品溶劑采用較弱的樣品溶劑3.3.更換色譜柱更換色譜柱, ,采用較弱腐蝕性條件采用較弱腐蝕性條件4.4.更換燒結(jié)不銹鋼更換燒結(jié)不銹鋼, ,加在線過(guò)濾器加在線過(guò)濾器, ,過(guò)濾樣品過(guò)濾樣品5.5.更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子五、五、 鬼峰鬼峰 4.4.三氟乙酸三氟乙酸(TFA)(TFA)氧化氧化( (肽譜肽譜) )5.5.水污染水污染( (反相反相) )1.1.每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥, ,改進(jìn)閥和樣品的改進(jìn)閥和樣品的清洗清洗3.3.重新平衡柱重新平衡柱, ,用流動(dòng)相作

12、樣品溶劑用流動(dòng)相作樣品溶劑 ( (尤其是尤其是離子對(duì)色譜離子對(duì)色譜) )4.4.每天新配每天新配, ,用抗氧化劑用抗氧化劑5.5.通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLCHPLC級(jí)級(jí)的水的水六、六、 基線噪聲基線噪聲 1.1.氣泡氣泡( (鋒利峰鋒利峰) )2.2.污染污染( (隨機(jī)噪聲隨機(jī)噪聲) )4.4.電干擾電干擾( (偶然噪聲偶然噪聲) )1.1.流動(dòng)相脫氣流動(dòng)相脫氣, ,加柱后背壓加柱后背壓2.2.清洗柱清洗柱, ,凈化樣品凈化樣品, ,用用HPLCHPLC級(jí)試劑級(jí)試劑3.3.更換氘燈更換氘燈4.4.采用穩(wěn)壓電源采用穩(wěn)壓電源, ,檢查干擾的檢查干擾的來(lái)源來(lái)

13、源( (如水浴等如水浴等) )5.5.流動(dòng)相脫氣流動(dòng)相脫氣, ,加柱后背壓加柱后背壓七、七、 峰拖尾峰拖尾 1.1.柱超載柱超載2.2.峰干擾峰干擾3.3.硅羥基作用硅羥基作用4.4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效5.5.柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道6.6.死體積或柱外體積過(guò)大死體積或柱外體積過(guò)大7.7.柱效下降柱效下降1.1.降低樣品量降低樣品量, ,增加柱直徑采用較高容量的固定相增加柱直徑采用較高容量的固定相2.2.清潔樣品清潔樣品, ,調(diào)整流動(dòng)相調(diào)整流動(dòng)相3.3.加三乙胺加三乙胺, ,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相流動(dòng)相P

14、HPH值值, ,鈍化樣品鈍化樣品4.4.更換燒結(jié)不銹鋼更換燒結(jié)不銹鋼, ,加在線過(guò)濾器加在線過(guò)濾器, ,過(guò)濾樣品過(guò)濾樣品5.5.更換色譜柱更換色譜柱, ,采用較弱腐蝕性條件采用較弱腐蝕性條件6.6.連接點(diǎn)降至最低連接點(diǎn)降至最低, ,對(duì)所有連接點(diǎn)作適宜調(diào)整對(duì)所有連接點(diǎn)作適宜調(diào)整, ,盡可能盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接收采用細(xì)內(nèi)徑的連接收7.7.用較低腐蝕條件用較低腐蝕條件, ,更換柱更換柱, ,采用保護(hù)柱采用保護(hù)柱八、八、峰展寬峰展寬 1.1.進(jìn)樣體積過(guò)大進(jìn)樣體積過(guò)大2.2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展3.3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢4.4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大1. 1. 用流動(dòng)相配樣用流動(dòng)相配樣, ,總的樣品體積小總的樣品體積小于第一峰的于第一峰的15%15%2.2.進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散3.3.設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于1010點(diǎn)點(diǎn)4.4.設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的半寬的10%10%八、八、峰展寬