試驗細(xì)菌的芽孢染色法教學(xué)文案

1、試驗細(xì)菌的芽孢染色法二、實驗原理二、實驗原理芽孢又稱內(nèi)生孢子，能否形成芽孢及芽孢的形狀、芽孢在孢囊的位置、芽孢又稱內(nèi)生孢子，能否形成芽孢及芽孢的形狀、芽孢在孢囊的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鑒定細(xì)菌的依據(jù)之一。芽孢囊是否膨大等特征是鑒定細(xì)菌的依據(jù)之一。芽孢壁厚，透性低，不易著色，一般染色法只能使菌體著色而芽孢不芽孢壁厚，透性低，不易著色，一般染色法只能使菌體著色而芽孢不著色（芽孢呈無色透明狀），而一旦染上色后又難以脫色。著色（芽孢呈無色透明狀），而一旦染上色后又難以脫色。芽孢染色法根據(jù)芽孢特點設(shè)計，除了用著色力強(qiáng)的染料外，還需要加芽孢染色法根據(jù)芽孢特點設(shè)計，除了用著色力強(qiáng)的染料外，還需要加熱，

2、以促進(jìn)芽孢著色。當(dāng)染芽孢時，菌體也會著色，然后水洗，芽孢熱，以促進(jìn)芽孢著色。當(dāng)染芽孢時，菌體也會著色，然后水洗，芽孢染上的顏色難以滲出，而菌體會脫色。然后用對比度強(qiáng)的染料對菌體染上的顏色難以滲出，而菌體會脫色。然后用對比度強(qiáng)的染料對菌體復(fù)染，使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，復(fù)染，使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，便于觀察。便于觀察。細(xì)菌芽孢的基本構(gòu)造細(xì)菌芽孢的基本構(gòu)造孢外壁孢外壁芽孢衣芽孢衣皮層皮層芽孢壁芽孢壁芽孢質(zhì)膜芽孢質(zhì)膜芽孢質(zhì)芽孢質(zhì)芽孢核區(qū)芽孢核區(qū)芽孢具有多層厚而芽孢具有多層厚而致密的胞膜，由內(nèi)向致密的胞膜，由內(nèi)向外依次為核心、內(nèi)膜、外依次為

3、核心、內(nèi)膜、芽孢壁、皮質(zhì)、外膜、芽孢壁、皮質(zhì)、外膜、芽孢殼和芽孢外衣芽孢殼和芽孢外衣 .細(xì)菌芽孢的基本特性細(xì)菌芽孢的基本特性v形成芽孢需要一定的外界條件，這些條件因菌種而異。形成芽孢需要一定的外界條件，這些條件因菌種而異。炭疽芽孢桿菌在有氧炭疽芽孢桿菌在有氧(O(O2 2) )條件下才能形成芽孢，而破條件下才能形成芽孢，而破傷風(fēng)芽孢桿菌則在無氧條件下形成芽孢。通常細(xì)菌在傷風(fēng)芽孢桿菌則在無氧條件下形成芽孢。通常細(xì)菌在營養(yǎng)不足時形成芽孢，但蘇云金芽孢桿菌是例外。營養(yǎng)不足時形成芽孢，但蘇云金芽孢桿菌是例外。細(xì)菌芽孢的基本特性細(xì)菌芽孢的基本特性v芽孢對惡劣環(huán)境條件有很強(qiáng)的抵抗能力，尤其耐高溫。芽孢對惡

4、劣環(huán)境條件有很強(qiáng)的抵抗能力，尤其耐高溫。有的芽孢可耐有的芽孢可耐100100沸水煮沸數(shù)小時。在一定條件下，沸水煮沸數(shù)小時。在一定條件下，芽孢保持活力數(shù)年至數(shù)十年之久。高溫滅菌的判斷標(biāo)芽孢保持活力數(shù)年至數(shù)十年之久。高溫滅菌的判斷標(biāo)準(zhǔn)就是細(xì)菌的芽孢是否被殺滅。準(zhǔn)就是細(xì)菌的芽孢是否被殺滅。細(xì)菌芽孢的基本特性細(xì)菌芽孢的基本特性v芽孢在適宜條件下，營養(yǎng)物如葡萄糖、乳酸和水分，芽孢在適宜條件下，營養(yǎng)物如葡萄糖、乳酸和水分，會發(fā)芽形成菌體，但細(xì)菌的數(shù)量并未增加，所以芽孢會發(fā)芽形成菌體，但細(xì)菌的數(shù)量并未增加，所以芽孢不是一種繁殖方式。不是一種繁殖方式。芽孢抵抗力強(qiáng)的原因芽孢抵抗力強(qiáng)的原因v1.1.芽孢含水量少

5、，蛋白質(zhì)受熱后不易變性；芽孢含水量少，蛋白質(zhì)受熱后不易變性；v2.2.芽孢具有多層致密的厚膜，理化因素不易透入；芽孢具有多層致密的厚膜，理化因素不易透入；v3.3.芽孢中含有一種特有的化學(xué)組分吡啶二羧酸芽孢中含有一種特有的化學(xué)組分吡啶二羧酸（DPADPA），），DPADPA與鈣結(jié)合生成的鈣鹽能提高芽孢中各與鈣結(jié)合生成的鈣鹽能提高芽孢中各種酶的熱穩(wěn)定性。種酶的熱穩(wěn)定性。三、實驗器材三、實驗器材1.菌種：枯草芽孢桿菌、梭狀芽孢桿菌。2.染色劑： 5%孔雀綠水溶液、0.5%番紅水溶液3.儀器、材料：二甲苯、香柏油、蒸餾水、95%乙醇、顯微鏡、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、蓋玻片、擦鏡紙、吸水紙。四、實驗方法（四、實驗方法（SchaefferFulton氏染色法）氏染色法）1.制片：常規(guī)方法涂片、干燥、固定。2.染色：(1) 涂片上滴加35滴5%孔雀綠水溶液。(2)用試管夾夾住載玻片一端，微火加熱，自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時，計時5min。加熱過程中切勿使染料蒸干，及時補(bǔ)加染液。待玻片冷卻后，用自來水沖洗至孔雀綠不再褪色為止。(3)0.5%堿性番紅復(fù)染2min，水洗。(4) 制片干燥后油鏡觀察。芽孢呈綠色，菌體紅色五、實驗報告繪圖標(biāo)識枯草芽孢桿菌及芽孢形態(tài)，芽孢的著生位置。六、思考題1為什么芽孢染色要加熱?為什么芽孢及營養(yǎng)體能染成不同的顏色?2試設(shè)計實驗如何鑒定某一產(chǎn)芽