試驗細菌的芽孢染色法教學文案

1、試驗細菌的芽孢染色法二、實驗原理二、實驗原理芽孢又稱內(nèi)生孢子，能否形成芽孢及芽孢的形狀、芽孢在孢囊的位置、芽孢又稱內(nèi)生孢子，能否形成芽孢及芽孢的形狀、芽孢在孢囊的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鑒定細菌的依據(jù)之一。芽孢囊是否膨大等特征是鑒定細菌的依據(jù)之一。芽孢壁厚，透性低，不易著色，一般染色法只能使菌體著色而芽孢不芽孢壁厚，透性低，不易著色，一般染色法只能使菌體著色而芽孢不著色（芽孢呈無色透明狀），而一旦染上色后又難以脫色。著色（芽孢呈無色透明狀），而一旦染上色后又難以脫色。芽孢染色法根據(jù)芽孢特點設計，除了用著色力強的染料外，還需要加芽孢染色法根據(jù)芽孢特點設計，除了用著色力強的染料外，還需要加熱，

2、以促進芽孢著色。當染芽孢時，菌體也會著色，然后水洗，芽孢熱，以促進芽孢著色。當染芽孢時，菌體也會著色，然后水洗，芽孢染上的顏色難以滲出，而菌體會脫色。然后用對比度強的染料對菌體染上的顏色難以滲出，而菌體會脫色。然后用對比度強的染料對菌體復染，使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，復染，使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，便于觀察。便于觀察。細菌芽孢的基本構造細菌芽孢的基本構造孢外壁孢外壁芽孢衣芽孢衣皮層皮層芽孢壁芽孢壁芽孢質(zhì)膜芽孢質(zhì)膜芽孢質(zhì)芽孢質(zhì)芽孢核區(qū)芽孢核區(qū)芽孢具有多層厚而芽孢具有多層厚而致密的胞膜，由內(nèi)向致密的胞膜，由內(nèi)向外依次為核心、內(nèi)膜、外依次為

3、核心、內(nèi)膜、芽孢壁、皮質(zhì)、外膜、芽孢壁、皮質(zhì)、外膜、芽孢殼和芽孢外衣芽孢殼和芽孢外衣 .細菌芽孢的基本特性細菌芽孢的基本特性v形成芽孢需要一定的外界條件，這些條件因菌種而異。形成芽孢需要一定的外界條件，這些條件因菌種而異。炭疽芽孢桿菌在有氧炭疽芽孢桿菌在有氧(O(O2 2) )條件下才能形成芽孢，而破條件下才能形成芽孢，而破傷風芽孢桿菌則在無氧條件下形成芽孢。通常細菌在傷風芽孢桿菌則在無氧條件下形成芽孢。通常細菌在營養(yǎng)不足時形成芽孢，但蘇云金芽孢桿菌是例外。營養(yǎng)不足時形成芽孢，但蘇云金芽孢桿菌是例外。細菌芽孢的基本特性細菌芽孢的基本特性v芽孢對惡劣環(huán)境條件有很強的抵抗能力，尤其耐高溫。芽孢對惡

4、劣環(huán)境條件有很強的抵抗能力，尤其耐高溫。有的芽孢可耐有的芽孢可耐100100沸水煮沸數(shù)小時。在一定條件下，沸水煮沸數(shù)小時。在一定條件下，芽孢保持活力數(shù)年至數(shù)十年之久。高溫滅菌的判斷標芽孢保持活力數(shù)年至數(shù)十年之久。高溫滅菌的判斷標準就是細菌的芽孢是否被殺滅。準就是細菌的芽孢是否被殺滅。細菌芽孢的基本特性細菌芽孢的基本特性v芽孢在適宜條件下，營養(yǎng)物如葡萄糖、乳酸和水分，芽孢在適宜條件下，營養(yǎng)物如葡萄糖、乳酸和水分，會發(fā)芽形成菌體，但細菌的數(shù)量并未增加，所以芽孢會發(fā)芽形成菌體，但細菌的數(shù)量并未增加，所以芽孢不是一種繁殖方式。不是一種繁殖方式。芽孢抵抗力強的原因芽孢抵抗力強的原因v1.1.芽孢含水量少

5、，蛋白質(zhì)受熱后不易變性；芽孢含水量少，蛋白質(zhì)受熱后不易變性；v2.2.芽孢具有多層致密的厚膜，理化因素不易透入；芽孢具有多層致密的厚膜，理化因素不易透入；v3.3.芽孢中含有一種特有的化學組分吡啶二羧酸芽孢中含有一種特有的化學組分吡啶二羧酸（DPADPA），），DPADPA與鈣結合生成的鈣鹽能提高芽孢中各與鈣結合生成的鈣鹽能提高芽孢中各種酶的熱穩(wěn)定性。種酶的熱穩(wěn)定性。三、實驗器材三、實驗器材1.菌種：枯草芽孢桿菌、梭狀芽孢桿菌。2.染色劑： 5%孔雀綠水溶液、0.5%番紅水溶液3.儀器、材料：二甲苯、香柏油、蒸餾水、95%乙醇、顯微鏡、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、蓋玻片、擦鏡紙、吸水紙。四、實驗方法（四、實驗方法（SchaefferFulton氏染色法）氏染色法）1.制片：常規(guī)方法涂片、干燥、固定。2.染色：(1) 涂片上滴加35滴5%孔雀綠水溶液。(2)用試管夾夾住載玻片一端，微火加熱，自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時，計時5min。加熱過程中切勿使染料蒸干，及時補加染液。待玻片冷卻后，用自來水沖洗至孔雀綠不再褪色為止。(3)0.5%堿性番紅復染2min，水洗。(4) 制片干燥后油鏡觀察。芽孢呈綠色，菌體紅色五、實驗報告繪圖標識枯草芽孢桿菌及芽孢形態(tài)，芽孢的著生位置。六、思考題1為什么芽孢染色要加熱?為什么芽孢及營養(yǎng)體能染成不同的顏色?2試設計實驗如何鑒定某一產(chǎn)芽