廈門大學遺傳與分子生物學實驗期末考試試卷及參考答案

1、廈門大學遺傳與分子生物學實驗期末考試試卷及參考答案一、填空題（每題2分，共50分）1 .果蠅具有豐富的外表型態(tài)差異，包括>>,92 .FISH技術(shù)的全稱是3 .細菌轉(zhuǎn)導實驗中所用的菌株分別是：?口,用的性關(guān)宜凡性關(guān)官上口仆口加分。4 .轉(zhuǎn)座子引起的插入突變實驗中所用的菌株分別是:和05 .在提基因組DNA時，為保證DNA的完整性應(yīng)該采取的步驟6 .DNA凝膠電泳可以以和為凝膠介質(zhì)，當DNA為bp時，用作為介質(zhì)，當DNA為<bp時，用作為介質(zhì)。7 .抽提DNA純化時，一般采用抽提，采用體積；沉淀DNA用,體積;洗滌沉淀時用。8 .DNA純度一般用比值來衡量，當比值在表示DNA很

2、純，當表示不干凈，當表示含過多。9 .衡量DNA得率或濃度時應(yīng)該用值來進行計算，公式表示為。10 .進行電泳加樣時，要將DNA樣品與混合，其主要成分為,如要力口樣10MDNA要加d混合。11 .在提取DNA時，酚/氯仿的作用是,其比例應(yīng)為,可選擇使用酚:氯仿：異戊醇，酚的飽和是用，在使用酚時應(yīng)注意,一般用的酚需要酚，要用瓶子來裝。12 .酚是蛋白變性劑，用酚抽提細胞DNA時，具有兩方面的作用：（1）（2）o13.提質(zhì)粒DNA時，加入STE的作用是;加入溶液I的作用是,現(xiàn)象;加入溶液II作用,現(xiàn)象,成分主要為,提供_環(huán)境；加入溶液田作用是_,現(xiàn)象,成分主要是_,目的是。14 .質(zhì)粒DNA有以下狀

3、態(tài)、,進行電泳時跑的最快在最前面，其次為、,最后為。15 .實驗過程中常用的槍頭有以下幾種：/用色槍頭，M用色槍頭，M用色槍頭。16 .轉(zhuǎn)化時用的感受態(tài)細菌需要用處理，轉(zhuǎn)化細菌時需要進行時間為秒，目的是。17 .膠回收DNA時需注意,應(yīng)盡量將足夠小徹底，具中加入與,質(zhì)量比應(yīng)為。洗滌液中含有,洗脫液可以用代替。18 .酶切DNA時，如DNA不純可通過,進行克服。19 .連接反應(yīng)時，外源DNA與質(zhì)粒DNA的摩爾比例應(yīng)為,連接反應(yīng)時體系常用020 .在酶切反應(yīng)管加完各種反應(yīng)物后，需要離心2秒鐘，其目的是口021 .用乙醇沉淀DNA時，通常要在DNA溶液中加入單價的陽離子，如NaCl和NaAc,其目的

4、是。22 .PCR反應(yīng)過程分為三個步驟，即,和。23 .PCR反應(yīng)受,等因素的影響。24 .部分酶切可采取的措施有：(1)(2)(3)等。25 .限制性內(nèi)切核酸酶通常保存在濃度的甘油溶液中。二、簡答題(每題5分，共40分)26 .請列出雌雄果蠅主要特征。27 .簡述染色體組型分析的分組排隊原則。28 .噬菌體效價和轉(zhuǎn)導頻率如何計算？如何計算Tn5易位插入突變總頻率？29 .為了選擇下面兩種突變型，應(yīng)對只含有葡萄糖、硫酸俊以及無機離子的基本培養(yǎng)基作何調(diào)整?®leu,亮氨酸營養(yǎng)缺陷型；gal,不能以半乳糖作為唯一碳源的突變型。30 .請你用Hindm設(shè)計一個質(zhì)粒的DNA酶切反應(yīng)體系。31

5、 .簡述一個完整外源DNA勺克隆過程。32 .一個攜帶有氨葦和卡那霉素抗性基因的質(zhì)粒被僅在卡那霉索基因中有識別位點的EcoRI消化。消化物與酵母DNA連接后轉(zhuǎn)化對兩種抗生索都敏感的Ecoli菌株。(l)利用哪一種抗生素抗性選擇接受了質(zhì)粒的細胞？(2)怎樣區(qū)分接受了插入酵母DNA的質(zhì)粒的克??？33 .你打算擴增下圖所示的兩段序列之間的DNA,請設(shè)計一對引物序列。5'-GACCTGTGGAAGCCATACGGGATTG-3'3'-CTGGACACCTTCG-GTATGCCCTAAC-5'三、實驗設(shè)計(10分)種子在儲藏過程中發(fā)生了某種變化，使得長成的水稻很容易被一種

6、病原菌感染。據(jù)推測可能是某一化學誘導的突變導致一個具有抗菌功能的關(guān)鍵酶丟失。請設(shè)計一個實驗驗證這種推測是否正確，如何使種子重新獲得對這種病的抗性？提示：根瘤農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)具有通過其Ti質(zhì)粒將細菌DNA帶入植物基因組的獨特功能。附加題：談?wù)勀銓υ撻T實驗課的建議或意見。參考答案：1、 填空題1 眼色、眼形、翅形、剛毛的形狀和數(shù)目2 熒光原位雜交技術(shù)3 gal+、gal-、EMB4 Tn5、FD10065 低溫、動作輕柔、抑制酶活6 瓊脂糖、聚丙烯酰胺，100、瓊脂糖、100、聚丙烯酰胺7 苯酚、一倍、無水乙醇、兩倍、70%乙醇8 OD260/OD280、

7、1.8-2.0、1.8、DNA、1.6、蛋白質(zhì)9 .OD、DNA濃度(Ng/ml)=(OD260-OD330)X50仙g/ml稀釋倍數(shù)(100)10 上樣緩沖液、溴酚蘭、111 .蛋白質(zhì)變性、24:1、25:24:1、Tris、防止氧化、飽和、棕色12 蛋白質(zhì)變性、細胞破壁13 .緩沖液、溶菌、溶液渾濁、細胞破壁蛋白變性、溶液變粘稠、SDS、堿性、中和、絮狀沉淀、乙酸、使染色體和蛋白質(zhì)變性沉淀，使質(zhì)粒DNA析出14 ccc、oc、lc、l、ccc、oc、lc、l15 1000、藍、200、黃、10、白16 CaCl2、42熱激、90、使質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化入細胞17去除雜質(zhì)、提高得率、DNA膠切塊、

8、溶解、膠塊、溶解液、1：3、70%乙醇、無菌水18 酚抽提、乙醇沉淀、加RNA酶19 1：1、T4DNA連接酶20 混勻、濃縮21 中和DNA電荷促沉淀22 變性、退火、延伸23 .溫度、Mg+、dNTP、模板、引物24 降低反應(yīng)溫度、縮短時間、減少用量25 50%2、 簡答題26雌果蠅- 個體較大- 腹部末端較尖- 腹部背面有五條黑條紋- 外生殖器較簡單，有陰道板和肛上板等結(jié)構(gòu)- 腹部腹面有6個腹片- 無性梳雄果蠅- 個體較小- 腹部末端較鈍- 腹部背面有三條黑條紋，最后一條極寬，并延伸到腹面- 外生殖器較復(fù)雜，有生殖弧、肛上板、陰莖等結(jié)構(gòu)- 腹部腹面有4個腹片- 前腿附節(jié)上有性梳27 分組排隊原則著絲粒類型相同，相對長度相近的分一組同一組的按染色體長短順序配對排列各指數(shù)相同的染色體配為一對可根據(jù)隨體的有無進行配對將染色體按長到短排隊，短臂向上28 效價（單位/ml）=斑數(shù)x稀釋倍數(shù)x取樣量轉(zhuǎn)導頻率=（轉(zhuǎn)導子數(shù)/ml）/（噬菌體數(shù)/ml）x100%Tn5易位插入突變總頻率=F因子上lac基因插入突變數(shù)（B板上菌落數(shù)）/F因子轉(zhuǎn)移數(shù)（A板上菌落數(shù)）x100%29 .在培養(yǎng)基中添加亮氨酸進行負篩選；在培養(yǎng)基中以半乳糖代替葡萄糖進行負篩選30 5-GAC