USP非無菌產(chǎn)品的微生物檢查：微生物的計(jì)數(shù)檢查

1、USP Microbiologica Tests 61微生物試驗(yàn)61非無菌產(chǎn)品的微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)試驗(yàn)序言后面描述的試驗(yàn)對可在好氧條件下生長的嗜溫細(xì)菌和真菌進(jìn)行定量計(jì)數(shù)。設(shè)計(jì)此試驗(yàn)主要是為了確定一種原料藥和制劑的微生物質(zhì)量是否符合已建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。作此用途時(shí)，遵循下面給出的說明，包括采樣編號，并按照下面的說明判定結(jié)果。此方法不適用于以活的微生物作為活性成份的產(chǎn)品。也可以使用其它的微生物規(guī)程，包括自動化方法，只要它們和已經(jīng)證明的藥典方法等效。通用規(guī)程在設(shè)計(jì)好的條件下進(jìn)行檢定，防止供試品受到外部微生物的污染。防止污染所采取的預(yù)防措施必須不影響試驗(yàn)中出現(xiàn)的任何微生物。如果供試品中含有抑菌活性，那

2、么應(yīng)當(dāng)盡可能的將其去除或中和。如果用滅活劑來到達(dá)此目的，那么必須證明其有效性以及對微生物不具有毒性。如果外表活性劑用于樣品制備，那么必須證明其對微生物的無毒性及與所用滅活劑的相容性。計(jì)數(shù)方法如下所示，使用膜過濾法或平板計(jì)數(shù)法其中一種。通常微生物計(jì)數(shù)用最大幾率計(jì)數(shù)MPN法是最不精確的；但是，對生物負(fù)荷極低的特定產(chǎn)品組，它可能是最為適宜的方法。選擇方法取決于這些因素，如產(chǎn)品性質(zhì)及要求的微生物限度。選擇的方法必須允許對足量的樣品量進(jìn)行試驗(yàn)，從而判斷是否符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。必須建立所選方法的適用性。促生長試驗(yàn)和計(jì)數(shù)方法的適用性一般考慮必須建立實(shí)驗(yàn)檢出供試品中所含微生物的能力。如果試驗(yàn)操作或產(chǎn)品方面引入了可能

3、影響試驗(yàn)結(jié)果的變更，那么必須確認(rèn)適用性。試驗(yàn)菌株的制備使用標(biāo)準(zhǔn)化的穩(wěn)定試驗(yàn)菌懸液，或者按下述說明制備。使用種子批培養(yǎng)保存技術(shù)生產(chǎn)菌種系統(tǒng)以便從原始主種子批中取出用于接種的活菌傳代不超過5次。每種細(xì)菌和真菌試驗(yàn)菌株的生長情況在表1中分別詳細(xì)說明。使用pH 7.0的氯化鈉-蛋白胨緩沖液或pH 7.2的磷酸鹽緩沖液制備試驗(yàn)懸液；為了懸浮黑曲霉孢子，可參加0.05%的聚山梨醇酯80吐溫80。在2小時(shí)內(nèi)使用懸液，如果在2°到8°保存，可在24小時(shí)內(nèi)使用。制備并稀釋黑曲霉或枯草芽孢桿菌的營養(yǎng)細(xì)胞新鮮懸液的替代選擇，是制造一個(gè)穩(wěn)定的孢子懸液，然后將適量的孢子懸液用于試驗(yàn)接種。穩(wěn)定的孢子懸

4、液可在2°到8°保存，保存時(shí)間是一個(gè)經(jīng)過驗(yàn)證的時(shí)間。表1.試驗(yàn)微生微的制備和使用Microorganism微生物Preparation ofTest Strain試驗(yàn)菌株的制備Growth Promotion促生長Suitability of Counting Method in thePresence of Product在使用產(chǎn)品的情況下，計(jì)數(shù)方法的適用性Total Aerobic Microbial Count好氧菌總數(shù)Total Yeasts andMolds Count酵母和霉菌總數(shù)Total Aerobic Microbial Count好氧菌總數(shù)Total Y

5、easts andMolds Count酵母和霉菌總數(shù)Staphylococcus aureussuch as ATCC 6538,NCIMB 9518, CIP4.83,orNBRC 13276金黃色葡萄球菌，如ATCC 6538,NCIMB 9518, CIP4.83，或NBRC 13276Soybean-Casein Digest Agar or Soybean-Casein Digest Broth30°-35°18-24 hours大豆酪蛋白胨消化瓊脂或大豆酪蛋白胨消化肉湯30°-35°18-24小時(shí)Soybean-CaseinDigest A

6、gar andSoybean-CaseinDigest Broth 100 cfu30°-35° 3 days大豆酪蛋白胨消化瓊脂和大豆酪蛋白胨消化肉湯 100 cfu30°-35° 3 天Soybean-CaseinDigest Agar/MPNSoybean-CaseinDigest Broth 100 cfu30°-35° 3 days大豆酪蛋白胨消化瓊脂/MPN大豆酪蛋白胨消化肉湯 100 cfu30°-35° 3 天PseudomonasAeruginosasuch as ATCC 9027,NCIMB

7、8626, CIP82.118, or NBRC13275銅綠假單孢菌，如ATCC 9027,NCIMB 8626, CIP82.118, 或NBRC13275Soybean-Casein Digest Agar or Soybean-Casein Digest Broth30°-35°18-24 hours大豆酪蛋白胨消化瓊脂或大豆酪蛋白胨消化肉湯30°-35°18-24小時(shí)Soybean-CaseinDigest Agar andSoybean-CaseinDigest Broth100 cfu30°-35°3 days大豆酪蛋白

8、胨消化瓊脂和大豆酪蛋白胨消化肉湯 100 cfu30°-35° 3 天Soybean-CaseinDigest Agar/MPNSoybean-CaseinDigest Broth100 cfu30°-35°3 days大豆酪蛋白胨消化瓊脂/MPN大豆酪蛋白胨消化肉湯 100 cfu30°-35° 3 天Bacillus subtilissuch as ATCC 6633,NCIMB 8054, CIP52.62, or NBRC 3134枯草芽孢桿菌，如ATCC 6633,NCIMB 8054, CIP52.62,或NBRC 313

9、4Soybean-Casein DigestAgar or Soybean-Casein Digest Broth30°-35°18-24 hours大豆酪蛋白胨消化瓊脂或大豆酪蛋白胨消化肉湯30°-35°18-24小時(shí)Soybean-CaseinDigest Agar andSoybean-CaseinDigest Broth 100 cfu30°-35° 3 days大豆酪蛋白胨消化瓊脂和大豆酪蛋白胨消化肉湯 100 cfu30°-35° 3 天Soybean-CaseinDigest Agar/MPNSoyb

10、ean-CaseinDigest Broth 100 cfu30°-35°< 3 days大豆酪蛋白胨消化瓊脂/MPN大豆酪蛋白胨消化肉湯 100 cfu30°-35° 3 天Candida albicanssuch as ATCC 10231,NCPF3179,IP48.72,or NBRC 1594白色念珠菌，如ATCC 10231,NCPF3179,IP48.72,或 NBRC 1594Sabouraud DextroseAgar or SabouraudDextrose Broth20°-25°2-3 days沙氏葡萄糖

11、瓊脂或沙氏葡萄糖肉湯20°-25°2-3 天Soybean-CaseinDigest Agar100 cfu30°-35° 5 days大豆酪蛋白胨消化瓊脂100 cfu30°-35° 5 天SabouraudDextrose Agar100 cfu20°-25° 5 days沙氏葡萄糖瓊脂20°-25° 5 天Soybean-CaseinDigest Agar100 cfu30°-35° 5 daysMPN: not applicable大豆酪蛋白胨消化瓊脂 100 cfu

12、30°-35° 5 天MPN：不可用Sabouraud Dextrose Agar100 cfu20°-25°5 days沙氏葡萄糖瓊脂20°-25° 5 天Aspergillus nigersuch as ATCC 16404,IMI 149007, IP1431.83, or NBRC9455黑曲霉，如ATCC 16404,IMI 149007, IP1431.83, 或 NBRC9455Sabouraud DextroseAgar or Potato-Dextrose Agar 20°-25°5-7 days

13、, or until goodsporulation is achieved沙氏葡萄糖瓊脂或馬鈴薯-葡萄糖瓊脂20°-25°5-7 天，或直至形成良好的孢子Soybean-CaseinDigest Agar100 cfu30°-35°5 days大豆酪蛋白胨消化瓊脂 100 cfu30°-35° 5 天SabouraudDextrose Agar 100 cfu20°-25° 5 days沙氏葡萄糖瓊脂20°-25° 5 天Soybean-CaseinDigest Agar 100cfu30&#

14、176;-35°< 5 daysMPN: not applicable大豆酪蛋白胨消化瓊脂 100 cfu30°-35° 5 天MPN：不可用Sabouraud Dextrose Agar100 cfu 20°-25°5 days沙氏葡萄糖瓊脂20°-25° 5 天陰性對照為了驗(yàn)證試驗(yàn)條件，用所選稀釋液代替試驗(yàn)樣品作為陰性對照。其中不得有微生物生長。培養(yǎng)基的促生長對每批現(xiàn)成的培養(yǎng)基及每批由脫水培養(yǎng)基或描述成分制備的培養(yǎng)基進(jìn)行試驗(yàn)。將表1中所列出的少量不超過100cfu微生物接種到大豆-酪蛋白消化肉湯和大豆-酪蛋白瓊脂份

15、/平板上，每次使用單獨(dú)的培養(yǎng)基份/平板。將表1中說明的少量不超過100cfu微生物接種到沙氏葡萄糖瓊脂平板上，每次用一個(gè)單獨(dú)的培養(yǎng)基平板。按照表1中描述的條件進(jìn)行培養(yǎng)。對于固體培養(yǎng)基，獲得的生長值與標(biāo)準(zhǔn)化的接種物所計(jì)算的值的差值不得超過2。對于新配制的接種物，其微生物生長情況與過去使用原來經(jīng)過試驗(yàn)并獲批準(zhǔn)的培養(yǎng)基得到的結(jié)果相當(dāng)。如果可見明顯微生物生長與早先用過去試驗(yàn)過并獲批準(zhǔn)的培養(yǎng)基得到的結(jié)果相當(dāng)，那么液體培養(yǎng)基適合。產(chǎn)品存在情況下計(jì)數(shù)方法的適用性樣品制備制備樣品的方法依據(jù)于供試品的物理特性。如果證實(shí)下述規(guī)程無一令人滿意，那么必須建立一個(gè)適當(dāng)?shù)目晒┻x擇的規(guī)程。水溶性產(chǎn)品將供試品溶解或稀釋通常1

16、比10倍制備稀釋液于pH 7.0的氯化鈉-蛋白胨緩沖液或pH 7.2的磷酸鹽緩沖液或大豆-酪蛋白消化肉湯中。如果有必要，將pH值調(diào)整到6到8。必要時(shí)，用同樣的稀釋液進(jìn)一步稀釋。不溶于水的非脂肪產(chǎn)品將供試品通常1比10倍制備稀釋液懸浮于pH 7.0的氯化鈉-蛋白胨緩沖液或pH 7.2的磷酸鹽緩沖液或大豆-酪蛋白消化肉湯中。可參加外表活性劑，如1 g/L的聚山梨醇酯80來促進(jìn)溶濕差的物質(zhì)懸浮。如有必要，將pH值調(diào)整到6到8。必要時(shí)，用同樣的稀釋液進(jìn)一步稀釋。脂肪產(chǎn)品將其溶解于已過濾滅菌的十四酸異丙酯中，或?qū)⒐┰嚻泛妥钚”匦枇康臒o菌聚山梨醇酯80或其它非抑制性無菌外表活性劑混合，如需加熱，不要超過4

17、0°，特殊情況下不超過45°。小心混合，必要時(shí)可在水浴中保持溫度。將足量已加熱的精選稀釋劑參加其中，制成原始產(chǎn)品1比10倍的稀釋液。小心混合，維持溫度以縮短形成乳濁液的必要時(shí)間?？梢杂盟x擇的稀釋劑含有適當(dāng)濃度的無菌聚山梨醇酯80或其它非抑制性無菌外表活性劑來制備另外的10倍系列稀釋的稀釋液。煙霧劑中的液體或固體將產(chǎn)品無菌轉(zhuǎn)移到一個(gè)膜過濾器或無菌容器中以備進(jìn)一步取樣。使用每個(gè)試驗(yàn)容器中的總內(nèi)含物或規(guī)定的劑量。透皮貼劑取下透皮貼劑的保護(hù)蓋片“釋放背襯，將它們粘面向上放到無菌玻璃或塑料托盤上。用適當(dāng)?shù)臒o菌多孔材料如無菌紗布蓋在粘面上，防止多片粘在一起，將其移入所選的含有如聚山梨

18、醇酯80和/或卵磷脂之類滅活劑的適量稀釋劑中。劇烈搖晃制備品至少30分鐘。接種與稀釋將足夠體積的微生物懸液參加到如上述制備的樣品和對照不含試驗(yàn)材料中制成不大于100cfu的接種物。接種懸浮液的體積應(yīng)當(dāng)不超過稀釋后產(chǎn)品體積的1%。為了證明從產(chǎn)品中回收微生物的可接受性，必須用制備樣品中可能低的稀釋因子進(jìn)行試驗(yàn)。由于抑菌活性或可溶性差而不可能時(shí)，必須開發(fā)更加適當(dāng)?shù)姆桨浮Ｈ绻麡悠分械纳L抑制性無法防止，那么可在中和、過濾或稀釋后參加局部微生物懸浮液。抑菌活性的中和/去除將按接種和稀釋中所述規(guī)程稀釋并按在產(chǎn)品存在情況下的微生物回收中所述規(guī)程接種制備的樣品中回收的微生物數(shù)量，和從對照制備品中回收的微生物數(shù)

19、量做比擬。如果生長受到抑制由一個(gè)因子大于2引起減少，那么修正特定的計(jì)數(shù)試驗(yàn)規(guī)程以確保結(jié)果的可靠性。比方，修正規(guī)程可能包括：(1) An increase in the volume of the diluent or culture medium; 增加稀釋劑或培養(yǎng)基的體積；(2) Incorporation of a specific or general neutralizing agents into the diluent; 在稀釋劑中參加特定或通用中和劑；(3) Membrane filtration; or 薄膜過濾；或(4) A combination of the above

20、measures. 聯(lián)合上述措施中和劑中和劑可以用來中和抗菌劑的活性見表2。最好能在滅菌前將其加到所選的稀釋劑或培養(yǎng)基中。如果使用它們，必須進(jìn)行一個(gè)有中和劑無產(chǎn)品的空白試驗(yàn)來證明其對微生物的有效性和無毒性。表2. 干擾物的常用中和劑/中和方法Interfering Substance干擾物Potential Neutralizing Agents/Method可能的中和劑/方法Glutaraldehyde, mercurials戊二醛，汞Sodium hydrogen sulfite (Sodium bisulfite)亞硫酸氫鈉亞硫酸氫鈉Phenolics, alcohol, aldehyd

21、es, sorbate酚、醇、醛、山梨酸酯Dilution稀釋Aldehydes醛Glycine甘氨酸Quaternary ammonium compounds (QACs), parahydroxybenzoates (parabens), bis-biguanides季銨化合物OACs，對羥苯甲酸對羥苯甲酸脂，二雙胍Lecithin卵磷脂QACs, iodine, parabensOACs，碘，對羥苯甲酸脂Polysorbate聚山梨醇酯Mercurials汞Thioglycollate硫酸乙醇酸鹽Mercurials, halogens, aldehydes汞，鹵素，醛Thiosulfa

22、te硫帶硫酸鹽EDTA (edetate)EDTA乙二胺四乙酸鹽Mg or Ca ions鎂或鈣離子如果沒找到適當(dāng)?shù)闹泻头椒?，那么可假定別離微生物失敗的原因是由于產(chǎn)品的抗菌活性。此信息可以說明本品或許沒有被給出類型的微生物污染。但是，也有可能是產(chǎn)品僅抑制此處說明的某些微生物，但是并不抑制其它菌株，而這些菌株并不包括在試驗(yàn)菌株。那么，那么用與微生物生長和規(guī)定的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)相容的最高稀釋因子進(jìn)行試驗(yàn)。藥品中微生物的回收對列出的每種微生物進(jìn)行別離試驗(yàn)。只對所加的試驗(yàn)菌株進(jìn)行計(jì)數(shù)。薄膜過濾使用標(biāo)稱孔徑不超過0.45 um的薄膜過濾器。選擇過濾材質(zhì)的類型，其截留細(xì)菌能力應(yīng)不被供試品的組份所影響。對于列出的每

23、種微生物，使用一個(gè)薄膜過濾器。將按樣品的制備、接種與稀釋和抑菌活性的中和/去除所述制備的適量樣品移入薄膜過濾器中，立即過濾，并用適當(dāng)體積的稀釋劑沖洗薄膜過濾器。為了確定好氧微生物的總數(shù)TAMC，將薄膜過濾器的移到大豆-酪蛋白消化瓊脂外表上。為了確定酵母菌和霉菌總數(shù)TYMC，將薄膜轉(zhuǎn)移到沙氏葡萄糖瓊脂外表上。按表1所述培養(yǎng)平板，進(jìn)行計(jì)數(shù)。平板計(jì)數(shù)法對每種培養(yǎng)基執(zhí)行平板計(jì)數(shù)法時(shí)至少重復(fù)一次，使用平均計(jì)數(shù)結(jié)果。 平板計(jì)數(shù)法在直徑9cm的培養(yǎng)皿中，參加按照樣品的制備、接種與稀釋和抑菌活性的中和/去除所述制備的樣品1mL，以及15到20mL的大豆-酪蛋白消化瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂，保持兩種培養(yǎng)基溫度均不超

24、過45°。如果使用更大的培養(yǎng)皿，那么相應(yīng)增加培養(yǎng)基的量。對于表1中列出的各種微生物，至少使用兩個(gè)培養(yǎng)皿。按表1所述培養(yǎng)平板。采用每種培養(yǎng)基計(jì)數(shù)的算數(shù)平均值，并計(jì)算原始接種物的cfu數(shù)。外表鋪展法對于直徑9cm的培養(yǎng)皿，在每個(gè)培養(yǎng)皿參加約45°的15到20mL的大豆-酪蛋白消化瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂，使其凝固。如果使用更大的培養(yǎng)皿，相應(yīng)增加瓊脂的量。在層流柜或培養(yǎng)箱中使平板枯燥。表1中列出的每種微生物，至少用兩個(gè)培養(yǎng)皿。將已測體積，不少于0.1mL的樣品鋪展到培養(yǎng)基外表上，樣品是按照樣品的制備、接種與稀釋和抑菌活性的中和/去除所述制備的。按傾注培養(yǎng)法所述培養(yǎng)并計(jì)數(shù)。最大機(jī)率MP

25、N法MPN法的精密度和準(zhǔn)確性要比薄膜過濾法或平板計(jì)數(shù)法低。計(jì)霉菌數(shù)得到的結(jié)果尤其不可信。因此，保存MPN法僅在無其它可用方法時(shí)對TAMC計(jì)數(shù)。如果所用方法判定，按如下進(jìn)行。制備一系列，至少三個(gè)10倍系列稀釋的按照樣品的制備、接種與稀釋和抑菌活性的中和/去除所述制備的樣品。從每個(gè)級別的稀釋液中，取1g或1mL接種到三個(gè)含有9到10mL的大豆-酪蛋白消化肉湯的試管中。如有必要，可以在培養(yǎng)基中參加類似聚山梨醇酯80的外表活性劑或抑菌因子滅活劑。因此，如果制備了三個(gè)稀釋度，就要接種9個(gè)試管。所有試管在30° 到35°培養(yǎng)不超過3天。如果由于供試品特性而導(dǎo)致讀出結(jié)果困難或不確定，那么

26、在同種肉湯或大豆-酪蛋白消化瓊脂上以相同的溫度再次培養(yǎng)1到2天，并使用此次結(jié)果。從表3中，確定每克或每毫升供試品中微生物的最可能數(shù)。表3 . 微生物的最可能數(shù)值Observed Combinations of Numbers of Tubes Showing Growth in Each Set 觀察到的各組合中顯示生長的試管數(shù)MPN per g or per mL of Product 每g或每mL產(chǎn)品的MPN95% Confidence Limits 95%的置信度Number of g or mL of Product per Tube每管產(chǎn)品的g或mL數(shù) 0.1 0.01 0.001

27、0 0 0 <3 0-9.4 0 0 1 3 0.1-9.5 0 1 0 3 0.1-10 0 1 1 6.1 1.2-17 0 2 0 6.2 1.2-17 0 3 0 9.4 3.5-35 1 0 0 3.6 0.2-17 1 0 1 7.2 1.2-17 1 0 2 11 4-35 1 1 0 7.4 1.3-20 1 1 1 11 4-35 1 2 0 11 4-35 1 2 1 15 5-38 1 3 0 16 5-38 2 0 0 9.2 1.5-35 2 0 1 14 4-35 2 0 2 20 5-38 2 1 0 15 4-38 2 1 1 20 5-38 2 1 2

28、27 9-94 2 2 0 21 5-40 2 2 1 28 9-94 2 2 2 35 9-94 2 3 0 29 9-94 2 3 1 36 9-94 3 0 0 23 5-94 3 0 1 38 9-104 3 0 2 64 16-181 3 1 0 43 9-181 3 1 1 75 17-199 3 1 2 120 30-360 3 1 3 160 30-380 3 2 0 93 18-360 3 2 1 150 30-380 3 2 2 210 30-400 3 2 3 290 90-990 3 3 0 240 40-990 3 3 1 460 90-1980 3 3 2 1100

29、 200-4000 3 3 3 > 1100 結(jié)果和判定驗(yàn)證薄膜過濾法或平板計(jì)數(shù)法的適用性時(shí)，任何試驗(yàn)菌計(jì)數(shù)的平均值與接種與稀釋中定義的不含產(chǎn)品的對照值不得有大于2的差值。驗(yàn)證MPN法的適用性時(shí)，接種物的計(jì)算值必須在用對照得到結(jié)果的置信限度的95%內(nèi)。如果用所述任一方法檢測的多個(gè)微生物中有一個(gè)達(dá)不到以上標(biāo)準(zhǔn)，那么使用更接近于標(biāo)準(zhǔn)的方法和試驗(yàn)條件來測試產(chǎn)品。產(chǎn)品檢測用于試驗(yàn)的數(shù)量除非特別指定，否那么取10或10mL供試品按上面所述小心進(jìn)行檢測。對于煙霧劑中的液體或固體，抽取10個(gè)包裝的樣品。對于透皮貼劑，取10貼樣品。對于將在下述條件下按配方制造的活性成分，試驗(yàn)量可以減少：每個(gè)劑量單位如片

30、劑、膠囊、注射劑中活性成分的數(shù)量小于或等于1mg的，或者每g或每ml對于不用劑量單位表示的制劑的量小于1mg。在這些情況下，檢測樣品的量不能小于10個(gè)劑量單位，或10g或10mL的產(chǎn)品。在樣品量有限或批量非常小例如小于1000mL或1000g時(shí)，用作活性成分的物質(zhì)的試驗(yàn)量應(yīng)當(dāng)是批量的1%，除非規(guī)定或者經(jīng)過證明和批準(zhǔn)用更少的量。對于一批總數(shù)小于200的產(chǎn)品如，用于臨床試驗(yàn)的樣品，取樣量可以減少到2個(gè)單位，數(shù)量少于100的可為1個(gè)單位。從散裝物料或制劑的可用容器中隨機(jī)抽取樣品。為了獲得必需的量，可以將足夠數(shù)容器的內(nèi)含物混合以提供樣品。產(chǎn)品檢查薄膜過濾使用一硝化裝置，其設(shè)計(jì)允許過濾器轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上。

31、用適當(dāng)?shù)姆椒▉碇苽錁悠?，此方法在促生長實(shí)驗(yàn)和計(jì)數(shù)方法的適用性中已被證明其適用性，轉(zhuǎn)移適量到每個(gè)膜過濾器上，并立即過濾。遵循適當(dāng)規(guī)程清洗每個(gè)過濾器。測定TAMC時(shí)，將一個(gè)薄膜過濾器轉(zhuǎn)移到大豆-酪蛋白消化瓊脂上面。測定TYMC時(shí)，將另一個(gè)薄膜轉(zhuǎn)移到沙氏葡萄糖瓊脂上面。在30° 到 35°培養(yǎng)大豆-酪蛋白消化瓊脂平板3到5天，在20° 到 25°培養(yǎng)沙氏葡萄糖瓊脂平板5到7天。計(jì)算每g或每mL產(chǎn)品的cfu數(shù)。檢查透皮貼劑時(shí)，分別用兩個(gè)無菌過濾膜過濾10%的樣品制備所述的制備品。將一片薄膜轉(zhuǎn)移到大豆-酪蛋白消化瓊脂上計(jì)算TAMC，另一片轉(zhuǎn)移到沙氏葡萄糖瓊脂上計(jì)算TYMC。平板計(jì)數(shù)法傾注平板法用適當(dāng)?shù)姆椒▉碇苽錁悠?，此方法在促生長實(shí)