生物化學(xué)與分子生物學(xué)-2014-16 replication-Enmin Li-2014 12 15

1、1 12 23 3生物的遺傳信息以堿基排列順序的方式，即基因的方式生物的遺傳信息以堿基排列順序的方式，即基因的方式儲存于核酸儲存于核酸(DNA或或RNA)中。中?；蚪M是生物基因組是生物(細胞或病毒細胞或病毒)全部遺傳信息的總和。全部遺傳信息的總和。真核生物基因組，包括核單倍體染色體真核生物基因組，包括核單倍體染色體DNA，線粒體，線粒體DNA，葉綠體，葉綠體DNA(高等植物高等植物)；既包括編碼序列，也包；既包括編碼序列，也包括非編碼序列。括非編碼序列。4 4以親代單鏈以親代單鏈DNA為模板為模板以四種以四種dNTP 為底物為底物有多種酶和蛋白因子參與有多種酶和蛋白因子參與5 5DNA復(fù)制總

2、是在一復(fù)制總是在一個或多個固定的位點個或多個固定的位點開始，該位點被稱為開始，該位點被稱為復(fù)制起始點復(fù)制起始點(origin of replication, )。DNA復(fù)制同時也要復(fù)制同時也要有一個或多個固定的有一個或多個固定的復(fù)制終止點復(fù)制終止點()。不同生物不同生物DNA復(fù)制復(fù)制的起始點與終止點的的起始點與終止點的序列不完全相同。序列不完全相同。 E coli 基因組基因組K-12 substr. DH10B 4.69 Mb6 6（二（二/三）三）DNA復(fù)制過程中形成復(fù)制叉與復(fù)制泡（復(fù)制子）復(fù)制過程中形成復(fù)制叉與復(fù)制泡（復(fù)制子）5復(fù)制方向復(fù)制方向復(fù)制叉復(fù)制叉53353復(fù)制子復(fù)制子repli

3、con（一個復(fù)制單位）（一個復(fù)制單位）復(fù)制泡復(fù)制泡DNA復(fù)制區(qū)生長點部復(fù)制區(qū)生長點部位的叉形結(jié)構(gòu)位的叉形結(jié)構(gòu)(replication fork)replication bubble7 7(四四) 半保留復(fù)制方式保證了遺傳信息的忠實傳遞半保留復(fù)制方式保證了遺傳信息的忠實傳遞DNA復(fù)制三種方式的推斷復(fù)制三種方式的推斷全保留式全保留式混合式混合式半保留式半保留式8 8一個著名的科學(xué)實驗一個著名的科學(xué)實驗 1958 Matthew Meselson和和Franklin Stahl馬修馬修梅塞爾森梅塞爾森(Matthew Meselson)福蘭克林福蘭克林斯塔爾斯塔爾(Franklin Stahl)9

4、9一個實驗桌一個實驗桌 一臺離心機一臺離心機 一種細菌一種細菌含含 14NH4Cl 的細菌培養(yǎng)液的細菌培養(yǎng)液含含 15NH4Cl 的細菌培養(yǎng)液的細菌培養(yǎng)液一些蔗糖一些蔗糖1010細菌細菌15提取提取DNA 細菌細菌DNA離心離心DNADNADNA細菌細菌細菌細菌DNA分層分層DNA分層分層DNA分層分層DNA分層分層14N14N14N1234提取提取DNA 提取提取DNA 提取提取DNA 離心離心離心離心離心離心11111212 1313 141415151. 按半保留方式復(fù)制，子代按半保留方式復(fù)制，子代DNA與親代與親代DNA的堿的堿基序列完全一致，子代保留了親代的全部遺傳信息，體基序列完全

5、一致，子代保留了親代的全部遺傳信息，體現(xiàn)了遺傳的保守性?，F(xiàn)了遺傳的保守性。 半保留復(fù)制的意義半保留復(fù)制的意義2. 遺傳的保守性是物種穩(wěn)定的分子基礎(chǔ)，但不是絕遺傳的保守性是物種穩(wěn)定的分子基礎(chǔ)，但不是絕對的，存在變異情況。對的，存在變異情況。1616（五）半不連續(xù)復(fù)制克服了空間結(jié)構(gòu)對（五）半不連續(xù)復(fù)制克服了空間結(jié)構(gòu)對DNA新鏈合成的制約新鏈合成的制約1717前導(dǎo)鏈前導(dǎo)鏈(領(lǐng)頭鏈領(lǐng)頭鏈)leading strand亞基亞基SSB模板鏈模板鏈DNA gyrasePrimasePrimerPrimer岡崎片段岡崎片段模板鏈模板鏈PrimerDNA ligaseDNA 聚合聚合 DNA 聚合酶聚合酶 35

6、5岡崎片段（岡崎片段（1968年）年）真核真核 100200個核苷酸個核苷酸原核原核 10002000個核苷酸個核苷酸后隨鏈后隨鏈 lagging strandDNA不能從頭合成，需要引物不能從頭合成，需要引物31818 GATTNTTTATTT GATCTNTTNTATT GATCTCTTATTAG 1 13 17 29 32 44 TGTGGATTA-TTATACACA-TTTGGATAA-TTATCCACA58 66 166 174 201 209 237 245同向重復(fù)序列同向重復(fù)序列 反向互補序列，反向互補序列，5 3 5 3 13bp（六）復(fù)制起始點由多個獨特的短重復(fù)序列組成（六）

7、復(fù)制起始點由多個獨特的短重復(fù)序列組成1919（七）（七）DNA復(fù)制必須有引物復(fù)制必須有引物 DNA聚合酶不能從游離的核苷酸開始合成聚合酶不能從游離的核苷酸開始合成DNA鏈，必須由引物鏈，必須由引物primer提供自由的提供自由的3 -OH末端，才能加入脫氧核苷酸使末端，才能加入脫氧核苷酸使DNA鏈不斷延伸。鏈不斷延伸。 所有細胞和多數(shù)病毒所有細胞和多數(shù)病毒DNA的復(fù)制，在引發(fā)酶的復(fù)制，在引發(fā)酶(primase)作用下，以作用下，以DNA為模板，合成一段為模板，合成一段RNA引物，這一過程被稱為引發(fā)引物，這一過程被稱為引發(fā)(priming)。 RNA引物引物5 端的第一個核苷酸通常是端的第一個核

8、苷酸通常是pppA(個別為個別為pppG)。 線粒體線粒體DNA復(fù)制，通過線粒體復(fù)制，通過線粒體RNA聚合酶合成聚合酶合成RNA引物。引物。 噬菌體噬菌體M13的的DNA復(fù)制，利用細菌復(fù)制，利用細菌RNA聚合酶合成聚合酶合成RNA引物。引物。 噬菌體噬菌體G4的的DNA復(fù)制，利用宿主引發(fā)酶合成復(fù)制，利用宿主引發(fā)酶合成RNA引物。引物。 174噬菌體以環(huán)形雙鏈噬菌體以環(huán)形雙鏈DNA一條鏈上切口處的一條鏈上切口處的3 -OH為引物。為引物。 反轉(zhuǎn)錄病毒前病毒反轉(zhuǎn)錄病毒前病毒DNA合成，利用宿主的合成，利用宿主的tRNA為引物。為引物。 腺病毒等線性腺病毒等線性DNA病毒病毒DNA的復(fù)制，以結(jié)合于病

9、毒的復(fù)制，以結(jié)合于病毒DNA末端蛋白上的末端蛋白上的dCTP的的3 -OH為引物。為引物。2020三三. 不同不同DNA基因組通過不同的模式進行復(fù)制（基因組通過不同的模式進行復(fù)制（320頁）頁）174和M13復(fù)制復(fù)制端粒酶端粒酶反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄2121原原核核生生物物單單起起點點雙雙向向復(fù)復(fù)制制真核生物多起點雙向復(fù)制真核生物多起點雙向復(fù)制腺病毒腺病毒DNA雙點單向復(fù)制雙點單向復(fù)制腺病毒腺病毒(adenovirus)，沒有包膜，直徑，沒有包膜，直徑7090 nm，252個殼粒，廿面體排列。個殼粒，廿面體排列?；蚪M基因組DNA，線狀雙鏈，線狀雙鏈，35 000 bp。33dCTPdCTP2222四四

10、 不同不同RNA基因組通過不同的模式進行復(fù)制（基因組通過不同的模式進行復(fù)制（320頁）頁）雙鏈雙鏈RNA病毒病毒單鏈負鏈單鏈負鏈RNA病毒病毒單鏈正鏈單鏈正鏈RNA病毒病毒反轉(zhuǎn)錄病毒，單鏈正鏈反轉(zhuǎn)錄病毒，單鏈正鏈RNADNA232324242525圖圖16-3 E.coli DNA復(fù)制的起始復(fù)制的起始 (321頁頁)SSB蛋白和蛋白和 HU蛋白等蛋白等20-40（467aa）26262(dNMP)n + 2ndNTP 4(dNMP)n + 2(n-1)PPi 2727 E. coli DNA聚合酶聚合酶全酶結(jié)構(gòu)全酶結(jié)構(gòu)全酶包括全酶包括10種亞基：種亞基：1）2個核心酶個核心酶( / / -亞基

11、亞基)；2）1個個 -復(fù)合物復(fù)合物( / / / / / -亞基亞基)； 3）可滑動的）可滑動的DNA夾子夾子( -亞基亞基)現(xiàn)教材現(xiàn)教材, ,圖圖16-416-4（323323頁）頁）第五版教材第五版教材, ,圖圖11-511-528281959 年獲諾貝爾生理學(xué)與醫(yī)學(xué)獎年獲諾貝爾生理學(xué)與醫(yī)學(xué)獎 292911去除引物RNA，填補缺口， DNA損傷修復(fù)21DNA損傷修復(fù)33DNA復(fù)制，較讀（亞基）410DNA復(fù)制，較讀（亞基）51DNA合成跨越損傷修復(fù)63DNA合成跨越損傷修復(fù)原核細胞原核細胞DNA聚合酶的類型與功能聚合酶的類型與功能3030313150 aa 18 螺旋螺旋, 928 氨基酸

12、氨基酸 , 分子量分子量102987 道爾頓。道爾頓。 G-R: 604 氨基酸氨基酸, Klenow 片段片段, 3 5 DNA外切酶活性外切酶活性, 5 3 DNA聚合酶活性聚合酶活性, 所合成的所合成的DNA片段短，片段短，20nt。DNA5 3 polymerase3 5 exonuclease3232A53TAAACAGproofreading5353533333E coli 基因組基因組DNA復(fù)制的終止復(fù)制的終止Tus（反解旋酶（反解旋酶, contra helicase），識別結(jié)合），識別結(jié)合ter中中23bp的共有序列，的共有序列，阻止阻止DnaB的解旋作用，的解旋作用，抑制復(fù)

13、制叉前行，使復(fù)抑制復(fù)制叉前行，使復(fù)制體解體。制體解體。E coli 基因組基因組K-12 substr. DH10B 4.69 Mb3434ATCTATTTATTTAGAGA*TCTGTTCTATTGTGA*TCTCTTATTAGGA*TCGCACTGCCCTGTGGATAACAAGGA*TCCGGCTTTTAAGA*TCAACAACCTGGAAAGGA*TCATTAACTGTGAATGA*TCGGTGA*TCCTGGACCGTATAAGCTGGGA*TCAGAATGAGGGGTTATACACAACTCAAAAACTGAACAACAGTTGTTCTTTGGATAACTACCGGTTGA*TCC

14、AAGCTTCCTGACAGAGTTATCCACA Escherichia coli str. K-12 substr. MG1655 N NN NC CH H3 3O OO OH HH HN NN NN NN NN NH HH HN NN NN NN NN NH HC CH H3 3N NN NN NN NN NC CH H3 3H H3 3C C3535GA*TC GA*TC GA*TCCTAG. CTAG. CTAGGA*TC GA*TC GA*TCCTA*G CTA*G CTA*GGATC. GATC. GATCCTA*G CTA*G CTA*G+3636GATC. GATC. GAT

15、CCTA*G CTA*G CTA*G SeqAGATC. GATC. GATCCTA*G CTA*G CTA*GSeqASeqASeqA 3737GATC. GATC. GATCCTA*G CTA*G CTA*GSeqASeqASeqASeqADamGATC. GATC. GATCCTA*G CTA*G CTA*GDamDamDamGA*TC GA*TC GA*TCCTA*G CTA*G CTA*G3838 DNA復(fù)制中，每復(fù)制復(fù)制中，每復(fù)制10bp，復(fù)制叉前方的，復(fù)制叉前方的DNA雙螺旋就要繞其長軸雙螺旋就要繞其長軸旋轉(zhuǎn)一周，產(chǎn)生正超螺旋。旋轉(zhuǎn)一周，產(chǎn)生正超螺旋。 拓撲異構(gòu)酶是可逆的核酸內(nèi)切

16、酶，可共價結(jié)合拓撲異構(gòu)酶是可逆的核酸內(nèi)切酶，可共價結(jié)合DNA分子上的磷酸基團，分子上的磷酸基團，切斷磷酸二酯鍵，發(fā)揮如下功能：切斷磷酸二酯鍵，發(fā)揮如下功能：1）消除正超螺旋，使復(fù)制叉順利）消除正超螺旋，使復(fù)制叉順利前進，前進，2）維持）維持DNA復(fù)制起始區(qū)復(fù)制起始區(qū)DNA負超螺旋狀態(tài)；負超螺旋狀態(tài)；3）使環(huán)形染色）使環(huán)形染色體復(fù)制后產(chǎn)生的兩個子染色體的連環(huán)體解連環(huán)。體復(fù)制后產(chǎn)生的兩個子染色體的連環(huán)體解連環(huán)。3939拓撲異拓撲異構(gòu)酶構(gòu)酶切斷負超螺旋切斷負超螺旋DNA雙鏈中的雙鏈中的一股一股鏈，鏈，使使DNA解鏈旋轉(zhuǎn)不致打結(jié)，適當(dāng)時候解鏈旋轉(zhuǎn)不致打結(jié)，適當(dāng)時候再封閉切口，使負超螺旋再封閉切口，使負

17、超螺旋DNA變?yōu)樗勺優(yōu)樗沙跔顟B(tài)弛狀態(tài)。反應(yīng)過程反應(yīng)過程不需不需ATP。拓撲異拓撲異構(gòu)酶構(gòu)酶切斷正超螺旋切斷正超螺旋DNA分子分子兩股兩股鏈，斷端圍鏈，斷端圍繞切口旋轉(zhuǎn)，再連接斷端，使正超螺旋繞切口旋轉(zhuǎn)，再連接斷端，使正超螺旋雙鏈雙鏈DNA松弛，進入負超螺旋狀態(tài)。反松弛，進入負超螺旋狀態(tài)。反應(yīng)過程應(yīng)過程需要需要ATP。作作用用機機制制4040圖圖167A Topo的功能的功能1（326頁）頁）E.coIi的的Topo消除消除SV40DNA負超螺旋實驗結(jié)果負超螺旋實驗結(jié)果圖圖167B Topo的功能的功能2（326頁）頁）4141424261DNA交聯(lián)損傷修復(fù)71DNA合成跨越損傷修復(fù)81減數(shù)分裂

18、相關(guān)DNA損傷修復(fù)91保留高度突變的DNA損傷修復(fù)101DNA合成跨越損傷修復(fù)111相對準確的DNA合成跨越損傷修復(fù)121DNA合成跨越損傷修復(fù), 保留高度突變的DNA損傷修復(fù)131DNA合成跨越損傷修復(fù)(一一) 真核細胞真核細胞DNA聚合酶的類型與功能聚合酶的類型與功能常見4343識別引物識別引物iDNA3 端，幫助端，幫助Pol 替換替換Pol 切除引物切除引物結(jié)合結(jié)合DNA單鏈，使之穩(wěn)定單鏈，使之穩(wěn)定連接連接DNA單鏈單鏈結(jié)合結(jié)合DNA，幫助，幫助Pol 進位進位44444545 引發(fā)酶引發(fā)酶后隨鏈模板后隨鏈模板RPARPARPARPA3 5 3 后隨鏈模板后隨鏈模板RPARPA3 5

19、3 后隨鏈模板后隨鏈模板RPA3 5 3 RFC 后隨鏈模板后隨鏈模板RPA3 5 3 RFCPol PCNA 后隨鏈模板后隨鏈模板3 5 3 RFCPol PCNA RNase H /FEN1 后隨鏈模板后隨鏈模板3 5 3 Pol PCNA 后隨鏈模板后隨鏈模板3 5 3 連接酶連接酶4646RNAse H/FEN1機制機制Dna2/FEN1機制機制留一個核苷酸留一個核苷酸4747(五五) 真核染色體真核染色體DNA在每個細胞周期只能復(fù)制一次在每個細胞周期只能復(fù)制一次4848546 aa 560 aa 4949DdK/CdK 開始合成前導(dǎo)鏈開始合成前導(dǎo)鏈開始合成后隨鏈開始合成后隨鏈P PP

20、 P50505151染色體染色體DNA末端末端5252535353535454端粒及其端粒酶研究大事記端粒及其端粒酶研究大事記1939年，年，Barbara McClintock發(fā)現(xiàn)玉米細胞的染色體斷裂末端容易融合發(fā)現(xiàn)玉米細胞的染色體斷裂末端容易融合1972年，年，James Watson提出染色體復(fù)制末端縮短問題提出染色體復(fù)制末端縮短問題1978年，報道四膜蟲的端粒序列年，報道四膜蟲的端粒序列1982年，端粒的發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致人工染色體發(fā)明年，端粒的發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致人工染色體發(fā)明1984年，報道酵母的端粒序列年，報道酵母的端粒序列1985年，報道四膜蟲的端粒酶活性年，報道四膜蟲的端粒酶活性1989年，報道四

21、膜蟲端粒酶的年，報道四膜蟲端粒酶的RNA亞基亞基1994年，報道酵母端粒酶的年，報道酵母端粒酶的RNA亞基亞基1995年，報道酵母端粒酶活性年，報道酵母端粒酶活性1996年，純化了四膜蟲端粒酶的催化亞基年，純化了四膜蟲端粒酶的催化亞基, 遺傳篩選到酵母端粒酶的催化亞基遺傳篩選到酵母端粒酶的催化亞基1997年，證明了四膜蟲和酵母端粒酶的催化亞基年，證明了四膜蟲和酵母端粒酶的催化亞基 2009年，年， 諾貝爾生理學(xué)醫(yī)學(xué)獎授予發(fā)現(xiàn)端粒酶保護染色體復(fù)制完整性機理的三位學(xué)者諾貝爾生理學(xué)醫(yī)學(xué)獎授予發(fā)現(xiàn)端粒酶保護染色體復(fù)制完整性機理的三位學(xué)者XXXX年，年，55555656重鏈重鏈輕鏈輕鏈1234567DN

22、A-pol 57571234567893335333555858關(guān)于關(guān)于DNA復(fù)制引物復(fù)制引物1. 所有所有DNA復(fù)制的引物一定是復(fù)制的引物一定是RNA ?3. DNA復(fù)制引物復(fù)制引物RNA一定由引物酶催化合成一定由引物酶催化合成 ?4. DNA復(fù)制引物復(fù)制引物RNA的合成一定有模板指導(dǎo)的合成一定有模板指導(dǎo) ?2. DNA復(fù)制引物一定是復(fù)制引物一定是RNA或或DNA ?5. 大腸桿菌大腸桿菌DNA復(fù)制引物去除由復(fù)制引物去除由 負責(zé)。負責(zé)。6. 真核生物真核生物DNA復(fù)制引物去除由復(fù)制引物去除由 或或 負責(zé)。負責(zé)。59596060DNAs RNAs Proteinsp 1964年，年，Temin

23、 等發(fā)現(xiàn)原病毒（等發(fā)現(xiàn)原病毒（provirus）DNA，RNA腫瘤病毒復(fù)制的中間物。腫瘤病毒復(fù)制的中間物。p 1970年，年，Temin和和Baltimore發(fā)現(xiàn)反轉(zhuǎn)錄酶。發(fā)現(xiàn)反轉(zhuǎn)錄酶。p RNA腫瘤病毒腫瘤病毒 DNA原病毒原病毒 RNA腫瘤病毒。腫瘤病毒。p 原病毒或前病毒原病毒或前病毒：存在于真核染色體中，與反轉(zhuǎn)錄病毒：存在于真核染色體中，與反轉(zhuǎn)錄病毒RNA基因組相對應(yīng)的雙鏈基因組相對應(yīng)的雙鏈DNA序列。序列。6161一一 反轉(zhuǎn)錄酶以宿主的反轉(zhuǎn)錄酶以宿主的tRNA為引物合成雙鏈為引物合成雙鏈cDNA6262病毒衣殼蛋白編碼基因病毒衣殼蛋白編碼基因病毒三種酶蛋白編碼基因病毒三種酶蛋白編碼基

24、因病毒外膜糖蛋白編碼基因病毒外膜糖蛋白編碼基因5 5 /3/3 端長末端重復(fù)序列端長末端重復(fù)序列u一些鳥類反一些鳥類反u一些鼠類反一些鼠類反整合信號整合信號/ /啟動子啟動子/ /增強子增強子/polyA/polyA位點位點6363A AC CD DB B反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶（反轉(zhuǎn)錄酶（RNase H）生成引物生成引物PPTU5-R DNA作為引物作為引物6464E EH HF FG G3 65653 3 3 3 5 5 5 5 3 3 5 5 5 5 gag-pol mRNAenv mRNA6666 6767 多種體內(nèi)外因素所多種體內(nèi)外因素所DNA分子的組成與結(jié)構(gòu)上的變化

25、。分子的組成與結(jié)構(gòu)上的變化。68686969CCCH3COOOOCCCCNNHCCH3NHNHRR胸腺嘧啶二聚體CH3NRNO活性甲基基團甲基亞硝胺苯并芘的誘變衍生物OCHHCHCCHHOOH紫外線HNO2NH2OH (CH3 )嘧啶二聚體形成堿基交換C UA I 堿基自發(fā)丟失 堿基化學(xué)修飾脫氨基O環(huán)氧化物自由基電離輻射烷基化合物重組缺陷導(dǎo)致 的 D N A片 段 的 缺陷 或 插 入H、X7070717172727373400nm光子光子 次甲四氫葉酸次甲四氫葉酸 FADH2 T-TT+T次甲四氫葉酸次甲四氫葉酸 / FADH27474DNA復(fù)制復(fù)制DNA復(fù)制復(fù)制N NN NN NN NH

26、H2 2N NO OC CH H3 3SH7575N NN NN NN NH H2 2N NO OGC堿基插入酶堿基插入酶NNONH2NNONH27676：UvrA蛋白識別蛋白識別DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)變形位點；雙螺旋結(jié)構(gòu)變形位點；UvrB蛋白負責(zé)蛋白負責(zé)解鏈，同時募集核酸內(nèi)切酶解鏈，同時募集核酸內(nèi)切酶UvrC；UvrC在損傷部位的兩側(cè)切斷在損傷部位的兩側(cè)切斷DNA鏈；鏈；UvrD蛋白去除這兩個切點之間的蛋白去除這兩個切點之間的DNA片段；片段；DNA聚合酶聚合酶負責(zé)填補缺口；連負責(zé)填補缺口；連接酶負責(zé)封合切口接酶負責(zé)封合切口77777878Pol/7979DNA損傷修復(fù)保證了物種遺傳的穩(wěn)定性，對防

27、止損傷修復(fù)保證了物種遺傳的穩(wěn)定性，對防止DNA損傷修復(fù)缺陷相關(guān)疾病的發(fā)生有重要意義。損傷修復(fù)缺陷相關(guān)疾病的發(fā)生有重要意義。研究研究DNA損傷修復(fù)缺陷，有助于揭示某些相關(guān)疾病損傷修復(fù)缺陷，有助于揭示某些相關(guān)疾病發(fā)病的分子機制。發(fā)病的分子機制。利用利用DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)變異，可研發(fā)生物新品種。損傷修復(fù)系統(tǒng)變異，可研發(fā)生物新品種。8080祝同學(xué)們，好好學(xué)習(xí)祝同學(xué)們，好好學(xué)習(xí)天天向上，早日成才天天向上，早日成才81811、DNA復(fù)制時，下列哪一種酶是不需要的？復(fù)制時，下列哪一種酶是不需要的？ A DNA指導(dǎo)下的指導(dǎo)下的DNA聚合酶聚合酶 B DNA連接酶連接酶 C 拓撲異構(gòu)酶拓撲異構(gòu)酶 D 解鏈酶解鏈

28、酶 E 限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶82822、合成合成DNA的原料是的原料是 A dNMA B dNDP C dNTP D NTP E NMP83833、真核細胞進行、真核細胞進行DNA復(fù)制的部位是復(fù)制的部位是 A 細胞膜細胞膜 B 細胞漿細胞漿 C 細胞核細胞核 D 核蛋白體核蛋白體 E 微粒體微粒體 原核細胞進行原核細胞進行DNA復(fù)制的部位是其擬核區(qū)復(fù)制的部位是其擬核區(qū) 8484 A 以以DNA為模板合成的為模板合成的DNA片段片段 B 以以DNA為模板合成的為模板合成的RNA片段片段 C 以以RNA為模板合成的為模板合成的DNA片段片段 D 以以RNA為模板合成的為模板合成的RNA片段片段

29、 4、DNA復(fù)制中的引物是復(fù)制中的引物是 8585 A 5 -TCTA-3 B 5 -ATCT-3 C 5 -UCUA-3 D 5 -GCGA-3 E 3 -TCTA-5 5、DNA復(fù)制時，模板序列復(fù)制時，模板序列 5 -TAGA-3 將合成哪種互補序列？將合成哪種互補序列？ 86866、關(guān)于、關(guān)于DNA復(fù)制中復(fù)制中DNA聚合酶的錯誤說法是聚合酶的錯誤說法是 A 底物是底物是dNTP B 必須有必須有DNA模板模板 C 合成方向是合成方向是5 3 D 需要需要Mg2+參與參與 E 需要需要ATP參與參與87877、下列關(guān)于大腸桿菌、下列關(guān)于大腸桿菌DNA聚合酶聚合酶 的敘述哪一項是正確的的敘述

30、哪一項是正確的 A 具有具有3 5 外切酶活性外切酶活性 B 不需要引物不需要引物 C 需要四種不同的三磷酸核苷需要四種不同的三磷酸核苷 D dUTP是它的一種作用底物是它的一種作用底物 E 可以將兩個可以將兩個DNA片段連接起來片段連接起來 88888、DNA連接酶：連接酶： A 使使DNA形成超螺旋形成超螺旋 B 使使DNA鏈鏈 上切口的兩個末端連接起來上切口的兩個末端連接起來 C 合成引物合成引物 D 將雙螺旋解鏈將雙螺旋解鏈 E 去除引物，填補空缺去除引物，填補空缺 89899、大腸桿菌、大腸桿菌DNA復(fù)制需要復(fù)制需要 (1) helicase，(2) primase， (3) DNA polymerase ，(4) DNA topoisomerase， (5) DNA ligase。其作用順序是：。其作用順序是： A (1) (5) (2) (4) (3)B (1) (2) (3) (4) (5