溶血性弧菌的檢驗(yàn)

1、食品中溶血性鏈球菌的檢驗(yàn) 主要內(nèi)容 溶血性鏈球菌概述 溶血性鏈球菌生物學(xué)特性 溶血性鏈球菌檢驗(yàn) 一、概述v（一）分布：在自然界分布較廣，可存在于水、空氣、塵埃、牛奶、糞便及人的咽喉和病灶中。 v（二）分類 1 1、按溶血能力分類： （1 1） 甲型（）溶血性鏈球菌 （2 2）乙型（）乙型（）溶血性鏈球菌）溶血性鏈球菌 （3 3） 丙型（丙型（）鏈球菌）鏈球菌 v 一、概述v2、按血清學(xué)分類 主要是根據(jù)鏈球菌細(xì)胞壁抗原進(jìn)行分類，這種方法可靠，但工作復(fù)雜。 v根據(jù)族特異性抗原的不同，將乙型（）溶血性鏈球菌 分成A B C D E F G H K L M N O P Q R S T，共18族 v在一

2、個(gè)族內(nèi)因表面抗原（即型特異性抗原）不同，又分成若干型。如A族分成60多個(gè)型， B族分為4個(gè)血清型， C族分成13個(gè)血清型。用阿拉伯?dāng)?shù)字表示。 v與人類疾病有關(guān)的大多屬于乙型溶血鏈球菌，其血清型 90%屬于A族鏈球菌。 （一）形態(tài)與染色： 1 1、呈球形或卵圓形， 直徑0.5um-1um 0.5um-1um 鏈狀 排列（長短與什么有關(guān)） 2 2、革蘭氏染色陽性， 衰老培養(yǎng)物常成陰性 3 3、無芽孢、無鞭毛、多數(shù)無夾膜 二、 生物學(xué)特性二、 生物學(xué)特性 （二）培養(yǎng)特性（二）培養(yǎng)特性 1 1、多數(shù)為需氧或兼性厭氧，少數(shù)為微需氧或?qū)Ｐ詤捬?2 2、 對(duì)營養(yǎng)要求高，普通培養(yǎng)基不能良好生長，（需加血清、血

3、液、腹水等）。大多數(shù)菌株需蘇氨酸、核黃素、維生素B6B6、煙酸等生長因子。 3 3、最適溫度37 PH7.47.6 37 PH7.47.6 4 4、在液體培養(yǎng)基中，溶血菌株, ,呈絮狀或顆粒狀沉淀生長（上清下濁）；不溶血菌球，均勻渾濁生長，如糞鏈菌。 （二）培養(yǎng)特性 5 5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、圓形突起的細(xì)小菌落，直徑0.50.50.75mm0.75mm，針尖大小。不同菌型其菌落周圍的溶血現(xiàn)象不同。甲型在菌落周圍出現(xiàn)1-2mm1-2mm的綠色溶血環(huán)，放冰箱一夜呈透明溶血環(huán)，且溶血環(huán)擴(kuò)大；乙型在菌落周圍有2-3mm2-3mm的透明溶血環(huán)；丙型菌落周圍不具溶血環(huán)。 二、 生物

4、學(xué)特性甲鏈乙鏈丙鏈二、 生物學(xué)特性( (三三) )生化特性生化特性 1 1、均分糖葡萄糖產(chǎn)酸、均分糖葡萄糖產(chǎn)酸 2 2、對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷等的分解因菌株而異。、對(duì)乳糖、甘露醇、水楊苷等的分解因菌株而異。 3 3、能使牛奶產(chǎn)酸而不凝固，不液化明膠。、能使牛奶產(chǎn)酸而不凝固，不液化明膠。 4 4、乙型溶血鏈球菌山梨醇陰性，不被膽汁溶解、不、乙型溶血鏈球菌山梨醇陰性，不被膽汁溶解、不分解菊糖，可與肺炎雙球菌區(qū)別。分解菊糖，可與肺炎雙球菌區(qū)別。 4 4、觸酶陰性可與葡萄球菌區(qū)別。、觸酶陰性可與葡萄球菌區(qū)別。 5 5、 A A族菌對(duì)桿菌肽敏感，可被其抑制。族菌對(duì)桿菌肽敏感，可被其抑制。二、 生物學(xué)特性

5、（四）致病性鏈球菌可產(chǎn)生的毒素和酶 1 1、溶血素：有溶解紅細(xì)胞，殺死白細(xì)胞、血小板及、溶血素：有溶解紅細(xì)胞，殺死白細(xì)胞、血小板及毒害心臟的作用，有O O和S S兩種。 鏈球菌溶血素鏈球菌溶血素O O為含有為含有-SH-SH基的蛋白質(zhì)，能破壞基的蛋白質(zhì)，能破壞白細(xì)胞和血小板，動(dòng)物試驗(yàn)又證實(shí)對(duì)心臟有急性毒害作用，使心臟驟停，抗原性強(qiáng)，感染后2 23 3周，85%85%以上病上產(chǎn)生抗以上病上產(chǎn)生抗“O”O(jiān)”抗體?？贵w。 S S為小分子多肽，相對(duì)分子質(zhì)量較小，故無抗原為小分子多肽，相對(duì)分子質(zhì)量較小，故無抗原性。 S S對(duì)氧穩(wěn)定，對(duì)熱和酸敏感。 血平板所見透明溶血是由血平板所見透明溶血是由“S”S”所

6、引起，能破壞所引起，能破壞白細(xì)胞和血小板，給動(dòng)物靜注可迅速致死。注射小鼠腹腔，引起腎小管壞死。 二、 生物學(xué)特性（四）致病性鏈球菌可產(chǎn)生的毒素和酶 2 2、致熱外毒素：曾稱紅疹毒素、致熱外毒素：曾稱紅疹毒素(Erythrotoxin)(Erythrotoxin)或猩或猩紅紅熱毒素(Scarletfever toxin)(Scarletfever toxin)，是人類猩紅熱的主要致病物質(zhì)，為外毒素。主要有A A族鏈球菌產(chǎn)生。小劑量可使局部產(chǎn)生紅疹，大劑量引起全身性紅疹，并伴有發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、周身不適等。 3 3、透明質(zhì)酸酶：又稱擴(kuò)散因子，可溶解組織間質(zhì)的透透明質(zhì)酸酶：又稱擴(kuò)散因子，可溶解

7、組織間質(zhì)的透明質(zhì)酸，故能增加細(xì)菌的侵襲力。 4 4、鏈激酶：又、鏈激酶：又稱溶纖維蛋白酶，具有增強(qiáng)細(xì)菌在組織稱溶纖維蛋白酶，具有增強(qiáng)細(xì)菌在組織中的擴(kuò)散作用。 5 5、殺白細(xì)胞素：在肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)可產(chǎn)生。、殺白細(xì)胞素：在肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)可產(chǎn)生?？墒拱卓墒拱准?xì)胞失去動(dòng)力，變?yōu)榍蛐?，最后膨脹破裂?v 二、 生物學(xué)特性（五）抵抗力 抵抗力一般不強(qiáng)，抵抗力一般不強(qiáng)，6030min6030min即被殺死，對(duì)常用即被殺死，對(duì)常用消毒劑敏感。 乙型鏈球菌對(duì)青霉素、紅霉素、氯霉素、四環(huán)乙型鏈球菌對(duì)青霉素、紅霉素、氯霉素、四環(huán)素、磺胺均敏感。青霉素是溶血鏈球菌感染的首選藥物。 v( (六六) )流行病學(xué)與致病

8、性流行病學(xué)與致病性 溶血性鏈球菌在自然界中分布較廣，存在于水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動(dòng)物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過直接接觸、空氣飛沫傳播或通過皮膚、粘膜傷口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也會(huì)對(duì)人類進(jìn)行感染。上呼吸道感染患者、人畜化膿性感染部位常成為食品污染的污染源。二、 生物學(xué)特性v一般來說，溶血性鏈球菌常通過以下途徑污染食品： 1、食品加工或銷售人員口腔、鼻腔、手、面部有化膿性炎癥時(shí)造成食品的污染； 2、食品在加工前就已帶菌、奶?；蓟撔匀橄傺谆蛐笄菥植炕摃r(shí)，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包裝不善而使食品受到污染。 溶血性鏈球菌?？梢鹌つw、皮下組織的化膿性炎癥、呼

9、吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)性流行以及新生兒敗血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、猩紅熱和風(fēng)濕熱、腎小球腎炎等變態(tài)反應(yīng)?；撔枣溓蚓? 三、微生物檢驗(yàn) （一）檢驗(yàn)程序 液體檢樣 v固體檢樣樣品處理增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)分純培養(yǎng)生化鑒定報(bào)告 v（二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn) 1 1、采樣：食品：按常規(guī)、采樣：食品：按常規(guī) 2 2、增菌培養(yǎng)：、增菌培養(yǎng)： 葡萄糖肉浸液肉湯葡萄糖肉浸液肉湯 ：一般情況：一般情況 36361 24h1 24h 匹克氏肉湯：在污染嚴(yán)重時(shí)用匹克氏肉湯：在污染嚴(yán)重時(shí)用 （二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn) 3 3、分離培養(yǎng)：血平板，、分離培養(yǎng)：血平板， 37 24h,37 24h,菌落菌落: :灰白色，灰白色，半透明或不透明

10、，表面光滑，有透明溶血環(huán)半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血環(huán) 4 4、分純培養(yǎng)：血平板、分純培養(yǎng)：血平板 37 24h37 24h 5 5、鏡檢：革蘭氏染色，陽性，、鏡檢：革蘭氏染色，陽性，G G+ +鏈狀排列，符合者可做生化鑒定。 三、微生物檢驗(yàn) （二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn) 6 6、生化鑒定：、生化鑒定： （1 1）鏈激酶試驗(yàn)（溶纖維蛋白酶試驗(yàn)）鏈激酶試驗(yàn)（溶纖維蛋白酶試驗(yàn)） 吸取草酸鉀血漿吸取草酸鉀血漿0.2mL0.2mL，加，加0.8mL0.8mL滅菌生理鹽水，滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌混勻，再加入鏈球菌18-24h3618-24h36肉浸液肉湯培養(yǎng)物肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL0.5mL

11、及及0.25%0.25%氯化鈣氯化鈣0.25mL0.25mL，混勻，置于，混勻，置于3636水浴水浴10min,10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時(shí)間，完全溶解為陽性，如解的時(shí)間，完全溶解為陽性，如24h24h后不溶解即為后不溶解即為陰性。同時(shí)用肉浸液肉湯做陰性對(duì)照，用已知的鏈陰性。同時(shí)用肉浸液肉湯做陰性對(duì)照，用已知的鏈激酶陽性的菌株做陽性對(duì)照。激酶陽性的菌株做陽性對(duì)照。三、微生物檢驗(yàn) 三、微生物檢驗(yàn) （二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn) 6 6、生化鑒定：、生化鑒定： （2 2）桿菌肽敏感試驗(yàn)）桿菌肽敏感試驗(yàn) 將分純的乙型溶血性鏈球菌接種血平板，在劃將

12、分純的乙型溶血性鏈球菌接種血平板，在劃線處貼附桿菌肽紙片，線處貼附桿菌肽紙片，3718h3718h，出現(xiàn)抑菌帶為陽，出現(xiàn)抑菌帶為陽性，據(jù)此可推測(cè)為乙型溶血性鏈球菌。性，據(jù)此可推測(cè)為乙型溶血性鏈球菌。 （二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn) v7 7、報(bào)告：、報(bào)告： 根據(jù)培養(yǎng)后的形態(tài)，菌落特征及生化試驗(yàn)可報(bào)告： 有乙型溶血性鏈球菌生長。 三、微生物檢驗(yàn)思考題1 1、鏈球菌的溶血現(xiàn)象有哪幾個(gè)類型，各類型的溶、鏈球菌的溶血現(xiàn)象有哪幾個(gè)類型，各類型的溶血特征如何？血特征如何？ 2 2、溶血性鏈球菌能產(chǎn)生什么毒素和酶？、溶血性鏈球菌能產(chǎn)生什么毒素和酶？ 3 3、溶血性鏈球菌在血平板中生長有何特征？、溶血性鏈球菌在血平板中生

13、長有何特征？ 一、概述v（一）分布：在自然界分布較廣，可存在于水、空氣、塵埃、牛奶、糞便及人的咽喉和病灶中。 v（二）分類 1 1、按溶血能力分類： （1 1） 甲型（）溶血性鏈球菌 （2 2）乙型（）乙型（）溶血性鏈球菌）溶血性鏈球菌 （3 3） 丙型（丙型（）鏈球菌）鏈球菌 v （二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn) 3 3、分離培養(yǎng)：血平板，、分離培養(yǎng)：血平板， 37 24h,37 24h,菌落菌落: :灰白色，灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血環(huán)半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血環(huán) 4 4、分純培養(yǎng)：血平板、分純培養(yǎng)：血平板 37 24h37 24h 5 5、鏡檢：革蘭氏染色，陽性，、鏡檢：革蘭氏染色，陽性，G G+ +鏈狀排列，符合者可做生化鑒定。 三、微生物檢驗(yàn) （二）檢驗(yàn)操作要點(diǎn) 6 6、生化鑒定：、生化鑒定： （1 1）鏈激酶試驗(yàn)（溶纖維蛋白酶試驗(yàn)）鏈激酶試驗(yàn)（溶纖維蛋白酶試驗(yàn)） 吸取草酸鉀血漿吸取草酸鉀血漿0.2mL0.2mL，加，加0.8mL0.8mL滅菌生理鹽水，滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌混勻，再加入鏈球菌18-24h3618-24h36肉浸液肉湯培養(yǎng)物肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL0.5mL及及0.25%