第三節(jié)動物細(xì)胞培養(yǎng)

1、 皮膚燒傷，如果創(chuàng)面很?。ú淮笥谟矌牛┲灰３智鍧?，甚至深度燒傷，也可能自愈。如果下層真皮受損面積較大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自燒傷病人自身未燒傷的部位（自體植皮），也可取自其他活人或尸體（異體植皮）等。自體植皮是永久性的，取自其他人或動物的植皮是暫時性的，是在創(chuàng)面愈合過程中為保護創(chuàng)面而采取的措施，1014天后就要被身體排斥。 如果一個大面積燒傷的病人來說，自體皮膚有限，其他渠道的皮膚來源不足。如何才能獲得大量的自體健康皮膚？動物細(xì)胞工程離體植物器官、離體植物器官、組織或細(xì)胞組織或細(xì)胞植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)植物細(xì)胞工程常用的技術(shù):植物組織培養(yǎng)、植物細(xì)胞培養(yǎng)

2、植物組織培養(yǎng)、植物細(xì)胞培養(yǎng) 、植物體細(xì)胞雜交、植物體細(xì)胞雜交溫故而知新溫故而知新懸浮細(xì)胞懸浮細(xì)胞植物體植物體愈傷組織愈傷組織胚狀體胚狀體脫（去）分化脫（去）分化再分化再分化（芽、根）（芽、根）細(xì)胞群體細(xì)胞群體細(xì)胞次生細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物代謝產(chǎn)物植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞植物細(xì)胞a 植物細(xì)胞植物細(xì)胞b 去細(xì)胞壁去細(xì)胞壁原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞愈傷組織愈傷組織雜種植株雜種植株植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞融合這個過程中涉及的原理是？這個過程中涉及的原理是？細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性 植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程常用技術(shù)常用技術(shù) 動物細(xì)胞培養(yǎng)動物

3、細(xì)胞培養(yǎng) 動物組織培養(yǎng)動物組織培養(yǎng) 細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植 體細(xì)胞克隆體細(xì)胞克隆 動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合 單克隆抗體單克隆抗體 動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的術(shù)的基礎(chǔ)基礎(chǔ)。一、動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)一、動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)1、概念：、概念： 是指在是指在體外體外模擬動物體內(nèi)環(huán)境，將動物模擬動物體內(nèi)環(huán)境，將動物的細(xì)胞或組織在的細(xì)胞或組織在無菌無菌、溫度適宜溫度適宜和和營養(yǎng)充足營養(yǎng)充足的條件下培養(yǎng)，使其繼的條件下培養(yǎng)，使其繼續(xù)生長、增殖并維持續(xù)生長、增殖并維持原有的結(jié)構(gòu)和功能原有的結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。目的是獲得細(xì)胞的技術(shù)。目的是獲得細(xì)胞或細(xì)胞代謝產(chǎn)物?；蚣?xì)胞代

4、謝產(chǎn)物。 2、選料：、選料： 動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，因為這因為這些細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強。些細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強。動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動物胚胎或幼齡動動物胚胎或幼齡動物的組織、器官物的組織、器官細(xì)胞懸浮液細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞代細(xì)胞50代細(xì)胞代細(xì)胞無限傳代無限傳代單個細(xì)胞單個細(xì)胞加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶4、有關(guān)概念、有關(guān)概念 原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)：是指從供體獲取組織或細(xì)胞后的是指從供體獲取組織或細(xì)胞后的初次培養(yǎng)。初次培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)的細(xì)胞分離稀釋后轉(zhuǎn)將原

5、代培養(yǎng)的細(xì)胞分離稀釋后轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。入新的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。 細(xì)胞株：細(xì)胞株：原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左代左右，細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少右，細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到數(shù)細(xì)胞存活到4050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。株。 細(xì)胞系：細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改生長停滯狀態(tài)只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。傳代細(xì)

6、胞為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別： 細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點，失去接觸抑制，容改變，具有癌細(xì)胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。易傳代培養(yǎng)。 貼壁生長：貼壁生長：動物細(xì)胞在液體培養(yǎng)基中生長動物細(xì)胞在液體培養(yǎng)基中生長一段時間之后，大部分細(xì)胞會貼附在培養(yǎng)瓶的一段時間之后，大部分細(xì)胞會貼附在培養(yǎng)瓶的表面生長。表面生長。 接觸抑制接觸抑制: :細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中貼壁生長，隨細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中貼壁生長，隨著細(xì)胞越來越多，當(dāng)貼壁生長的細(xì)胞分裂生長著細(xì)胞越來越多，當(dāng)貼壁生長的細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，就停止分裂增殖，這種現(xiàn)到表面相互接觸時，就停止分裂增殖，這種

7、現(xiàn)象叫做接觸抑制。象叫做接觸抑制。動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動物胚胎或幼齡動動物胚胎或幼齡動物的組織、器官物的組織、器官細(xì)胞懸浮液細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶或膠原蛋白酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶10代細(xì)胞代細(xì)胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)50代細(xì)胞代細(xì)胞細(xì)胞株細(xì)胞株無限傳代無限傳代細(xì)胞系細(xì)胞系傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)單個細(xì)胞單個細(xì)胞加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)未遺傳物質(zhì)未改變改變遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)改變改變剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶5 5、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機

8、鹽、維生素、葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清動物血清等。等。）3、溫度和、溫度和ph溫度溫度37左右左右 ph 7.2-7.44、氣體環(huán)境：、氣體環(huán)境： o2和和co2（95%空氣和空氣和5% co2 ）保證細(xì)胞順利的保證細(xì)胞順利的生長增殖生長增殖問題：問題：1.為何要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁為何要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來？上脫離下來？2.比較動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)所比較動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的成分用的培養(yǎng)基的成分.3.動物細(xì)胞培養(yǎng)是否能像植物細(xì)胞一樣動物細(xì)胞培養(yǎng)是否能像植物細(xì)胞一樣 最終培養(yǎng)成新個體？最終培養(yǎng)成新個體？獲得細(xì)胞獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性細(xì)胞

9、的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體植物體培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞分泌蛋白或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株等無病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理原理動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目比較項目2 2、植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較、植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較6 6、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用1、獲得細(xì)胞產(chǎn)物，如蛋白質(zhì)生物、獲得細(xì)胞產(chǎn)物，如蛋白質(zhì)生物 制品病毒疫苗、干擾素、單克制品病毒

10、疫苗、干擾素、單克隆抗體等隆抗體等2、器官移植的培養(yǎng)、器官移植的培養(yǎng)3、獲得細(xì)胞用于檢測有毒物質(zhì)、獲得細(xì)胞用于檢測有毒物質(zhì) 1 1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞（）、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞（） a a細(xì)胞系細(xì)胞系 b b細(xì)胞株細(xì)胞株 c c原代細(xì)胞原代細(xì)胞 d d傳代細(xì)胞傳代細(xì)胞 2 2、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是 - - （ ） a.a.動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合 b.b.單克隆抗體單克隆抗體 c.c.胚胎移植胚胎移植 d.d.動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)ad 3 3、為了使用于培養(yǎng)的動物組織細(xì)胞分散開以便配制成一定濃度為了使用于培養(yǎng)的動物

11、組織細(xì)胞分散開以便配制成一定濃度的細(xì)胞懸浮液，選取來的動物組織應(yīng)選用下列哪種物質(zhì)處理（的細(xì)胞懸浮液，選取來的動物組織應(yīng)選用下列哪種物質(zhì)處理（ ）a.a.胃蛋白酶胃蛋白酶 b. b.胰蛋白酶胰蛋白酶 c. c.鹽酸鹽酸 d. d.胰脂肪酶胰脂肪酶教學(xué)反饋教學(xué)反饋b4 4、用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的、用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞 （ ）a.a.容易產(chǎn)生各種變異容易產(chǎn)生各種變異 b b具有更強的全能性具有更強的全能性c.c.取材十分方便取材十分方便 d d

12、分裂增殖的能力強分裂增殖的能力強d5、在動物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中，正確的是（、在動物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中，正確的是（ ） a動物細(xì)胞培養(yǎng)的目的就是為了獲得大量的細(xì)胞分動物細(xì)胞培養(yǎng)的目的就是為了獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白泌蛋白 b動物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶處理使細(xì)胞分散動物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶處理使細(xì)胞分散 c細(xì)胞遺傳物質(zhì)的改變發(fā)生于原代培養(yǎng)過程中細(xì)胞遺傳物質(zhì)的改變發(fā)生于原代培養(yǎng)過程中 d培養(yǎng)至培養(yǎng)至50代后繼續(xù)傳代的細(xì)胞是細(xì)胞株代后繼續(xù)傳代的細(xì)胞是細(xì)胞株6、在動物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無、在動物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱之為（限制地傳代下去

13、，這種傳代細(xì)胞稱之為（ ） a原代培養(yǎng)原代培養(yǎng) b傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng) c細(xì)胞株細(xì)胞株 d細(xì)胞系細(xì)胞系bd7、下列與動物細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的表述中，不正確的是（下列與動物細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的表述中，不正確的是（ ）a培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清動物血清b原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右便會出現(xiàn)生長停滯代左右便會出現(xiàn)生長停滯c動物細(xì)胞培養(yǎng)一般能夠傳到動物細(xì)胞培養(yǎng)一般能夠傳到4050代，但其遺傳物代，但其遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變質(zhì)發(fā)生了改變d動物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質(zhì)和獲得大量自身健動物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質(zhì)和獲得大量

14、自身健康細(xì)胞c8 8、下圖是動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此圖回答、下圖是動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此圖回答 (1)(1)容器容器a a中放置的是動物器官或組織。它一般取中放置的是動物器官或組織。它一般取自自_。(2)(2)容器容器a a中的動物器官或組織首先要進(jìn)行的處理中的動物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是是_，然后用，然后用 酶處理，這是為了酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開來。這樣做的目的是使細(xì)胞分散開來。這樣做的目的是_._. (3) (3)培養(yǎng)首先在培養(yǎng)首先在b b瓶中進(jìn)行。瓶中的培養(yǎng)基成分有瓶中進(jìn)行。瓶中的培養(yǎng)基成分有_ _等。在此瓶中培等。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，一般傳到第養(yǎng)

15、一段時間后，一般傳到第 代，有許多細(xì)代，有許多細(xì)胞衰老死亡，到這時的培養(yǎng)稱為胞衰老死亡，到這時的培養(yǎng)稱為_._.(4)(4)為了把為了把b b瓶中的細(xì)胞分裝到瓶中的細(xì)胞分裝到c c瓶中，用瓶中，用_處理，然后配置成處理，然后配置成_，再分裝。，再分裝。(5)(5)在在c c瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部死亡。原因是部死亡。原因是_。幼齡動物的器官或組織、動物胚胎幼齡動物的器官或組織、動物胚胎剪碎剪碎 胰蛋白胰蛋白 使每個細(xì)胞能與培養(yǎng)液接觸使每個細(xì)胞能與培養(yǎng)液接觸 葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清 10原

16、代培養(yǎng)原代培養(yǎng)胰蛋白酶胰蛋白酶 細(xì)胞懸浮液細(xì)胞懸浮液細(xì)胞沒有發(fā)生癌變細(xì)胞沒有發(fā)生癌變二二 動物細(xì)胞核移植和動物體細(xì)胞克隆動物細(xì)胞核移植和動物體細(xì)胞克隆1 1 概念概念將某種動物細(xì)胞的將某種動物細(xì)胞的細(xì)胞核細(xì)胞核移入同種或者異種動物的移入同種或者異種動物的去除細(xì)胞核的成熟卵細(xì)胞內(nèi)去除細(xì)胞核的成熟卵細(xì)胞內(nèi)的技術(shù)。的技術(shù)。動物體細(xì)胞克隆動物體細(xì)胞克隆是將供體細(xì)胞的是將供體細(xì)胞的細(xì)胞核細(xì)胞核與與受體去核卵細(xì)胞受體去核卵細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)的細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行人工組合，借助卵細(xì)胞的發(fā)育能力，經(jīng)過培養(yǎng)進(jìn)行人工組合，借助卵細(xì)胞的發(fā)育能力，經(jīng)過培養(yǎng)發(fā)育成發(fā)育成胚胎胚胎進(jìn)而形成進(jìn)而形成個體個體的技術(shù)。其中的關(guān)鍵技術(shù)的技術(shù)。其中

17、的關(guān)鍵技術(shù)是是細(xì)胞核移植技術(shù)細(xì)胞核移植技術(shù)。用核移植的方法得到的動物用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物稱為克隆動物動物細(xì)胞核移植動物細(xì)胞核移植多利羊的產(chǎn)生過程：多利羊的產(chǎn)生過程：黑面綿羊去黑面綿羊去核卵細(xì)胞核卵細(xì)胞白面綿羊乳白面綿羊乳腺細(xì)胞核腺細(xì)胞核細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植重組細(xì)胞重組細(xì)胞早期胚胎早期胚胎胚胎移植胚胎移植另一頭綿羊的子宮另一頭綿羊的子宮妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利2 2 過程過程供體動物的組織供體動物的組織細(xì)胞培育細(xì)胞培育供體細(xì)胞核供體細(xì)胞核卵細(xì)胞卵細(xì)胞去核去核去核卵細(xì)胞去核卵細(xì)胞注入注入重組細(xì)胞重組細(xì)胞分裂分裂重組胚胎重組胚胎胚胎移植胚胎移植代孕母牛代孕母牛新個體新

18、個體 用卵細(xì)胞的原因？用卵細(xì)胞的原因？細(xì)胞已經(jīng)發(fā)育成熟細(xì)胞已經(jīng)發(fā)育成熟; ;細(xì)胞核較易取出；有重組和發(fā)細(xì)胞核較易取出；有重組和發(fā)育所需的因子便于發(fā)育成胚胎育所需的因子便于發(fā)育成胚胎受體卵母細(xì)胞為什么要先去核？受體卵母細(xì)胞為什么要先去核？為了使克隆動物的遺傳物質(zhì)為了使克隆動物的遺傳物質(zhì)( (核內(nèi)核內(nèi)) )全部來自供體全部來自供體動物的細(xì)胞；保證獲得其遺傳特性。動物的細(xì)胞；保證獲得其遺傳特性?？寺∈强寺∈?00%100%的復(fù)制嗎？的復(fù)制嗎？不是，克隆動物的核內(nèi)不是，克隆動物的核內(nèi)dnadna跟供體動物的體細(xì)胞一跟供體動物的體細(xì)胞一樣，但其細(xì)胞質(zhì)的樣，但其細(xì)胞質(zhì)的dnadna則來源于受體卵母細(xì)胞。此

19、則來源于受體卵母細(xì)胞。此外，動物的行為，習(xí)性受還環(huán)境的影響，可能與外，動物的行為，習(xí)性受還環(huán)境的影響，可能與供體動物不同。供體動物不同。二二 動物細(xì)胞核移植和克隆動物動物細(xì)胞核移植和克隆動物1 1、 應(yīng)用前景應(yīng)用前景保護瀕危物種增加動物保護瀕危物種增加動物 的存活數(shù)量的存活數(shù)量用于組織器官的移植，用于組織器官的移植，皮膚移植皮膚移植2 2 存在的問題存在的問題成功率不高成功率不高克隆動物存在健康、生理缺陷、遺傳缺陷等克隆動物存在健康、生理缺陷、遺傳缺陷等三三 動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合1 1 概念概念指在一定條件下指在一定條件下2 2個或多個動物細(xì)胞融合形成一個個或多個動物細(xì)胞融合形成一個細(xì)胞的

20、過程細(xì)胞的過程融合融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞的遺傳信后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞的遺傳信息的細(xì)胞為息的細(xì)胞為雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞。2 2 過程過程不同的兩個細(xì)胞不同的兩個細(xì)胞滅活病毒滅活病毒或或peg雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞3 3 意義意義克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和性克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和性誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法法動物細(xì)胞融合的用途：動物細(xì)胞融合的用途：制備單克隆抗體制備單克隆抗體：仙臺病毒：仙臺病毒紫外線紫外線喪失感染活性喪失感染活性（不感染細(xì)胞）（不感染細(xì)胞）保留融合活性保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）物理法物理法 化學(xué)法化學(xué)法（peg）生物法生物法四四 單克隆抗體單克

21、隆抗體 抗體：抗體：由效應(yīng)由效應(yīng)b b淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的，主要成淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的，主要成分是球蛋白，一種效應(yīng)分是球蛋白，一種效應(yīng)b b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體只分泌一種特異性抗體單克隆抗體概念的理解：單克隆抗體概念的理解：單克隆抗體：由這些細(xì)胞群產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單單克隆抗體：由這些細(xì)胞群產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單 一、特異性強的抗體一、特異性強的抗體單克隆單克隆: :由單個效應(yīng)由單個效應(yīng)b b細(xì)胞通過無性繁殖獲得細(xì)胞群細(xì)胞通過無性繁殖獲得細(xì)胞群 原始的方法原始的方法：獲得抗體，特異性差，純度低。獲得抗體，特異性差，純度低。想獲得單一抗體：想獲得單一抗體：必須用單個必須用單個b b淋巴細(xì)胞進(jìn)行無性繁淋

22、巴細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，通過克隆形成細(xì)胞群。殖，通過克隆形成細(xì)胞群。問題：問題：怎樣才能獲得單克隆抗體？怎樣才能獲得單克隆抗體？我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？有什么方法能使有什么方法能使b b細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細(xì)胞無細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時具備呢？限增殖能力同時具備呢？體外培養(yǎng)的條件下，一個體外培養(yǎng)的條件下，一個b b淋巴細(xì)胞是不可能淋巴細(xì)胞是不可能無限增值的，如何使單個淋巴細(xì)胞增殖呢？無限增值的，如何使單個淋巴細(xì)胞增殖呢？設(shè)計方案：設(shè)計方案： 一個一個b b淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞能

23、無限增殖小鼠骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞目的目的:制備單克隆抗體制備單克隆抗體.原理：原理：b淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，骨髓瘤細(xì)胞能無淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖，雜交瘤細(xì)胞既能產(chǎn)生抗體又能無限增殖，雜交瘤細(xì)胞既能產(chǎn)生抗體又能無限增殖。限增殖。單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程 注射注射 抗原抗原效應(yīng)效應(yīng)b淋巴淋巴細(xì)胞細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合、篩選誘導(dǎo)細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體誘導(dǎo)其融

24、合的方誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？法有哪些？ ？ ？ 抗原抗原 效應(yīng)效應(yīng)b細(xì)胞細(xì)胞篩選 篩選 aa型、型、bb型型ab型雜交瘤細(xì)胞型雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞（1 1）為什么用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與）為什么用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與b b淋巴細(xì)胞融合？淋巴細(xì)胞融合？融合形成雜交瘤細(xì)胞的特點？融合形成雜交瘤細(xì)胞的特點？思考思考：（2 2）單克隆抗體制備過程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技）單克隆抗體制備過程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技 術(shù)手段？術(shù)手段？（3 3）制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選？）制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選？細(xì)胞膜的流動性；細(xì)胞膜的流動性；雜交瘤細(xì)胞既能大量繁殖，又可以產(chǎn)生單一抗

25、體雜交瘤細(xì)胞既能大量繁殖，又可以產(chǎn)生單一抗體動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞；第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞；第二次篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞第二次篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞（4）為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與）為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與b細(xì)胞融合？細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有遺傳物質(zhì)，不僅具有b細(xì)胞分泌抗體的能力，而細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體克隆抗體單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用

26、與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強，產(chǎn)量高，特異性強，靈敏度高靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯，優(yōu)越性十分明顯。1、作為診斷試劑、作為診斷試劑2、用于治療疾病和運載藥物、用于治療疾病和運載藥物 作為載體，運載抗癌藥物，形成作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治治療腫瘤療腫瘤主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株用用 途途物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振蕩、電刺激）蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融

27、合去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的原理動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交比較項目比較項目比較項目比較項目植物、動物細(xì)胞融合的比較植物、動物細(xì)胞融合的比較 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實驗方案體實驗方案3 3、圖中、圖中b b為為_過程，常用過程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既

28、能_,_,又能又能_。1 1、該實驗方案的目的是、該實驗方案的目的是_2 2、a a是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_制備單克隆抗體制備單克隆抗體b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞抗體抗體細(xì)胞融合細(xì)胞融合滅活病毒滅活病毒雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞分泌抗體分泌抗體無限增殖無限增殖b體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔ac 1 1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是變的細(xì)胞是 -（ ） a a細(xì)胞系細(xì)胞系 b b細(xì)胞株細(xì)胞株 c c原代細(xì)胞原代細(xì)胞 d d傳代細(xì)胞傳代細(xì)胞2 2、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是 -（）（） a.a.動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合 b.b.單克隆抗體單克隆抗體 c.