水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定

1、水中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握水的細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法2、了解水質(zhì)狀況與細(xì)菌數(shù)量在飲用水檢測(cè)中的重要性。2. 菌落總數(shù)standard plate-count bacteria水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上、有氧條件下37°C培養(yǎng)48 h后，所得1 mL水樣所含菌落的總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)是評(píng)價(jià)水質(zhì)污染程度的主要衛(wèi)生指標(biāo)，所測(cè)定的細(xì)菌總數(shù)增多說(shuō)明水被生活廢棄物污染。由于結(jié)果不能說(shuō)明污染的來(lái)源，因此必須結(jié)合總大腸菌群數(shù)來(lái)判斷污染源和安全程度。3. 培養(yǎng)基與試劑2.1 營(yíng)養(yǎng)瓊脂成分蛋白胨10 g牛肉膏3 g氯化鈉5 g瓊脂1020 g蒸餾水1000 mL2.2 制法：根據(jù)實(shí)際需要量，按照上述配方稱(chēng)取

2、各成分混合后，加熱溶解，調(diào)整pH為7.47.6，分裝于玻璃容器中（如用含有較多雜質(zhì)的瓊脂，應(yīng)先過(guò)濾。），經(jīng)103.43 kPa（121°C,15 lb）濕熱滅菌20 min，儲(chǔ)存于冷暗處備用。4. 儀器和材料4.1 儀器：高壓蒸汽滅菌器、干熱滅菌箱、水熱恒溫培養(yǎng)箱、電爐、天平、冰箱。4.2 材料：滅菌平皿（直徑9 cm）、滅菌試管、刻度吸管、三角燒瓶、采樣瓶、酒精燈、消毒水、鑷子、試管架等。4.3 放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器、pH計(jì)或精密pH試紙、火柴或打火機(jī)。5. 樣品采集5.1 自來(lái)水的取樣：先將自來(lái)水龍頭用酒精棉擦拭，再用酒精燈火焰滅菌，打開(kāi)龍頭放水3-5 min，用無(wú)菌空三角瓶接取水

3、樣200 ml。5.2 純凈水取樣：用消毒酒精棉擦拭純水機(jī)出口后，先放走部分水，再用無(wú)菌空三角瓶接取水樣200毫升。5.3 地表水的取樣：應(yīng)取距水面1015 cm的深層水樣，先將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿(mǎn)后，將瓶塞蓋好，再?gòu)乃腥〕觯詈昧⒓礄z查，否則需放入冰箱中保存。6. 檢驗(yàn)步驟6.1 生活飲用水（自來(lái)水、純凈水）：以無(wú)菌操作方法用滅菌吸管吸取1 mL充分混勻的水樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中，傾注約15 ml已融化并冷卻到45°C左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并立即旋搖平皿，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。每次檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)做一平行接種，同時(shí)另用一個(gè)平皿只

4、傾注培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。待冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面向上，置于36°C±1°C條件下連續(xù)培養(yǎng)48 h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，即為1 ml水樣中的菌落總數(shù)。6.2 水源水：以無(wú)菌操作方法吸取1 ml充分混勻的水樣，注入盛有9 ml滅菌生理鹽水的試管中，混勻呈1:10稀釋液。吸取1:10稀釋液1 ml，注入盛有9 ml滅菌生理鹽水的試管中，混勻呈1:100稀釋液。按同法依次稀釋成1:1000、1:10000稀釋液備用。如此遞增稀釋一次，必須更換一支刻度吸管。用滅菌吸管吸取1 ml未稀釋的水樣和23個(gè)適宜稀釋度的水樣，分別注入滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)，其余操作同6.1 生活飲用水的檢驗(yàn)步

5、驟。7. 菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法7.1 作平皿菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用眼睛直接觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查以防遺漏。在記下各平皿的菌落數(shù)后，應(yīng)求出同稀釋度的平均菌落數(shù)，供下一步計(jì)算時(shí)應(yīng)用。在求同稀釋度的平均數(shù)時(shí)，若其中一個(gè)平皿有較大片狀菌落產(chǎn)生時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落產(chǎn)生的平皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半皿計(jì)數(shù)后乘2以代表全皿菌落數(shù)。然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù)。7.2 不同稀釋度的選擇及報(bào)告方法7.2.1 首先選擇平均菌落數(shù)在30300之間者進(jìn)行計(jì)算，若只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí)，則將該菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1中實(shí)

6、例1）。7.2.2 若有兩個(gè)稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在30300之間，則視二者之比值來(lái)決定：若其比值小于2，應(yīng)報(bào)告兩者的平均數(shù)（如表1實(shí)例2）；若比值大于2，則報(bào)告其中稀釋度較小的菌落數(shù)（如表1實(shí)例3）。若等于2亦報(bào)告其中稀釋度較小的菌落數(shù)（見(jiàn)表1實(shí)例4）。表1 稀釋度選擇及菌落總數(shù)報(bào)告方式實(shí)例不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個(gè)稀釋度菌落數(shù)之比菌落總數(shù)（CFU/ml）報(bào)告方式（CFU/ml）10-110-210-3113651642016 40016 000或1.6×10422760295461.637 75038 000或3.8×10432890271602.227 10027

7、000或2.7×104415030821 5001 500或1.5×1035多不可計(jì)1650513513 000513 000或5.3×105627115270270或2.7×1027多不可計(jì)3051230 50031 000或3.1×1047.2.3 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1中實(shí)例5）。7.2.4 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1中實(shí)例6）。7.2.5 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)不在30300之間，則應(yīng)以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1中實(shí)例7）。7.2.6 若所有稀釋度的平板上均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以“未檢出”報(bào)告之。7.2.7 如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可計(jì)”報(bào)告，而應(yīng)在稀釋度最大的平板上，任意數(shù)其中2個(gè)平板1 cm2中的菌落數(shù)，除2求出每平方厘米內(nèi)平均菌落總數(shù)，乘以皿底面積63.6 cm2，再乘以其稀釋倍數(shù)報(bào)告之。7.2.8 菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告：菌落數(shù)在100以?xún)?nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告；大于100時(shí)，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入法計(jì)算；為了縮短后面的零數(shù)，也