乙型肝炎病毒抗體診斷膠體金法SOP標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1、乙型肝炎病毒抗體診斷（膠體金法SOP）測定標(biāo)準(zhǔn)操作程序編寫者：宿金濤 日期：2012年3月1日一. 原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗體、e抗原、e抗體、核心抗體檢測試劑盒（膠體金法）采用膠體金免疫層析分析技術(shù)、將五個診斷意義相關(guān)的試劑通過一個包裝組合在一起，同時進(jìn)行乙型肝炎病毒五項(xiàng)標(biāo)志物的檢測，在不影響各自性能的情況下，便于客戶的儲存和使用。HBsAg檢測試劑采用雙抗體夾心法，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)(T)的抗體。測試時，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的膠體金顆粒結(jié)合的抗HBsAg抗體 反應(yīng)。然后，混合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽性，膠體金抗體在層析過程中先于標(biāo)本中的HBsAg

2、結(jié)合，隨后家何物會被固定在膜上的抗HBsAg抗體結(jié)合，在測試區(qū)內(nèi)（T）會出現(xiàn)一條紫紅色帶。這條帶是HBsAg抗體-HBsAg-HBsAg抗體金標(biāo)粒子的復(fù)合物在膜上結(jié)合形成的。如是陰性，則測試區(qū)內(nèi)（T）將沒有紫紅色帶。無論HBsAg是否存在于標(biāo)本中，一條紫紅色帶都會出現(xiàn)在指控內(nèi)（C）。質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定是否有足夠標(biāo)本，層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。HBsAb檢測試劑雙抗原夾心法，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)（T）的乙肝表面抗體。測試時，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的膠體金顆粒結(jié)合的HBsAg反應(yīng)。然后，混合物隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽性，膠體金

3、抗體在層析過程中先于標(biāo)本中的HBsAg結(jié)合，隨后結(jié)合物會被固定在膜上的HBsAg抗體結(jié)合，在測試區(qū)內(nèi)(T)會出現(xiàn)一條紫紅色條帶。這條帶是HBsAg-HBsAb-HBsAg金標(biāo)粒子的復(fù)合物在膜上結(jié)合形成的。如果陰性，則測試區(qū)內(nèi)(T)將沒有紫紅色條帶。無論HBsAg是否存在于標(biāo)本中，一條紫紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)。質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定是否有足夠標(biāo)本，層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。HBeAg檢測試劑采用雙抗體夾心法，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)（T）的乙肝e抗體。測試時，標(biāo)本滴入試劑加樣處，標(biāo)本與預(yù)包被的膠體金顆粒結(jié)合的HBeAg抗體反應(yīng)。然后，混合物

4、隨之在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如是陽性，膠體金抗體在層析過程中先于標(biāo)本中的HBeAg結(jié)合，隨后結(jié)合物會被固定在膜上的HBeAg抗體結(jié)合，在測試區(qū)內(nèi)(T)會出現(xiàn)一條紫紅色條帶。這條帶是HBeAg抗體-HBeAg-HBeAg抗體金標(biāo)粒子的復(fù)合物在膜上結(jié)合形成的。如果陰性，則測試區(qū)內(nèi)(T)將沒有紫紅色條帶。無論HBeAg抗體是否存在于標(biāo)本中，一條紫紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)。質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定是否有足夠標(biāo)本，層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。HBeAb,HBcAb檢測試劑才有競爭抑制法，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)(T)的抗體。測試時，血清或血漿標(biāo)本滴入試劑加

5、樣處，隨之標(biāo)本在毛細(xì)效應(yīng)下向上層析。如標(biāo)本中含有相應(yīng)的抗體，則同膜上測試區(qū)(T)的抗體競爭與預(yù)包被在金標(biāo)粒子的相應(yīng)抗體反應(yīng)。如果標(biāo)本中沒有相應(yīng)抗體，預(yù)包被在金標(biāo)粒子的復(fù)合物的相應(yīng)抗原則同膜上測試區(qū)(T)的抗體全部結(jié)合。陽性標(biāo)本，測試區(qū)內(nèi)(T)將沒有紫紅色條帶，陰性標(biāo)本，測試區(qū)內(nèi)(T)將會出現(xiàn)明顯的紫紅色條帶。無論相應(yīng)的抗體是否存在于標(biāo)本中，一條紫紅色條帶都會出現(xiàn)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)。質(zhì)控區(qū)內(nèi)(C)所顯現(xiàn)的紫紅色條帶是判定是否有足夠標(biāo)本，層析過程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。二. 試劑：英科新創(chuàng)乙肝五項(xiàng)檢測卡（膠體金法）。規(guī)格為25人份/盒。產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號：YZB/國0378-2009。三

6、.操作步驟：1、將待測標(biāo)本從儲存條件下取出，平衡至室溫（1825）并編號。2、將膠體金測試卡從包裝盒中取出，打開鋁箔包裝袋，平置于臺面上。編號（與樣品相對應(yīng)）；3、用塑料滴管加2-3滴樣本血清或血漿，加入試劑板的五個加樣孔。4、等待紫紅色條帶的出現(xiàn)，測試結(jié)果應(yīng)在測定開始后20分鐘開始讀取。30分鐘后判斷無效。四. 參考范圍：正常人為陰性。五、結(jié)果判定 HBsAg HBsAb HBeAg 陽性：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。陽性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有待測物質(zhì)。陰性：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶，在測試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表明：標(biāo)本中檢測不出

7、待測物質(zhì)無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑已變質(zhì)損壞。在此情況下，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說明書，并用新的試劑重新測試。如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。注意：測試區(qū)（T）內(nèi)的紫紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在規(guī)定的觀察時間內(nèi)，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)判定為陽性結(jié)果。HBeAb HBcAb陽性：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶，在測試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)。陽性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有待測物質(zhì)。陰性：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)，一條位于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。陰性結(jié)果表明：標(biāo)本中檢測不出待測物質(zhì)。無效：質(zhì)控區(qū)（

8、C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑已變質(zhì)損壞。在此情況下，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說明書，并用新的試劑重新測試。如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。六臨床意義： 乙肝肝炎病毒引起的感染帶來了嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。母嬰傳播、性傳播和血液傳播是最主要的傳播途徑。盡早的發(fā)現(xiàn)感染可以有效的減少疾病的傳播。 乙肝五項(xiàng)檢測卡（膠體金法）定性檢測人血清、血漿中的乙肝表面抗原、表面抗體、e抗體、核心抗體、用于乙型肝炎病毒感染的輔助診斷。七. 病人及樣本要求： 1、本品適用于血清、血漿樣本，血漿樣本對臨床常用抗凝劑（EDTA、肝素、枸椽酸鈉）無要求；樣本的采集須遵循常規(guī)的醫(yī)療樣本的

9、采集方法并遵守相關(guān)的醫(yī)學(xué)規(guī)定。 2、采集靜脈血樣本必須在無菌條件下操作，并避免樣品溶血。 3、如果血清和血漿樣品收集后7天內(nèi)檢測，樣品須放在2-8保存；大于7天須20以下冷凍保存。 4、溶血、粘稠及高脂標(biāo)本不適于本試劑。含特珠物質(zhì)（如強(qiáng)氧化劑）的標(biāo)本可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果不穩(wěn)定，在檢測前須清除。八. 注意事項(xiàng)：1、 檢測必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范和物物安全守則的規(guī)定，操作時必須戴手套、穿工作服、嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。2、 乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗體、e抗原、e抗體、核心抗體檢測試劑盒（膠體金法）適用于測試血清或血漿標(biāo)本，其他標(biāo)本或溶液進(jìn)行檢測可能出現(xiàn)異常結(jié)果。3、 由于在技術(shù)上和操作上可能出現(xiàn)的失誤，同時也由于標(biāo)本中存在干擾物質(zhì)，檢測結(jié)果有可能錯誤。4、 請保證適量的標(biāo)本用于檢測，過多或過少的標(biāo)本量都有可能導(dǎo)致結(jié)果的偏差。5、 測試結(jié)果應(yīng)在測定開始后20分鐘讀取，30分鐘后判定無效。6、 本產(chǎn)品為目視讀取結(jié)果，為保證判定結(jié)果的正確，請勿在光線昏暗處對結(jié)果進(jìn)行判讀。7、 試劑可在室溫下保存，謹(jǐn)防受潮。低溫下保存的試劑應(yīng)平衡到