(完整word版)細(xì)胞生物學(xué)題庫(kù)第3章(含答案)

1、細(xì)胞生物學(xué)題庫(kù)第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法一、名詞解釋1Resolution2. fluorescence3. Fluorescencemicroscope4. Phasecontrastmicroscope5. autoradiography6. scanningelectronmicroscopy，SEM7. scanningtransmissionelectronmicroscopy，STEM8. high-voltageelectronmicroscopy，HVEM9. negativestainning10. shadowcasting11. scanningtunnelingmicro

2、scope，STM12. enzymecytochemistry13. immunofluorescence14. immunoelectronmicroscopy15. chromosomesorting16. microspectrophotometry17. microfluorometry18. nuclearmagneticresonance，NMR19. cellengineering20. primaryculture21. callus，culli22. cellfusion23. monoclonalantibodytechnique24. micromanipulation

3、25. differentialcentrifugation26. isodensitycentrifugation27. chromatography28. gelfiltrationchromatography29. affinitychromatography30. geneengineering31. genecloning32. geneknockout33. karyoplast34. cytoplast35. cellculture36.貼壁生長(zhǎng)37. contactinhibition38. massculture39. clonalculture40. primarycult

4、ure41. subculture42.單層細(xì)胞培養(yǎng)：43.轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)44. primarycell45. subculturecell46. cellstrain47. cellline49. clone50. explant二、填空題1. 物質(zhì)經(jīng)過(guò)紫外線照射后發(fā)出熒光的現(xiàn)象可分為兩種情況，第一種是，如葉綠素、血紅素等經(jīng)紫外線照射后，能發(fā)出紅色的熒光；第二種是，即物體經(jīng)熒光染料染色后再通過(guò)紫外線照射發(fā)出熒光。2. 寫出一種細(xì)胞融合的物理性方法，舉出化學(xué)融合所需的兩種化學(xué)物質(zhì)和。3染色體DNA的三種功能元件為、和。異染色質(zhì)可分為和。4. 定量的細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)有、等。寫出兩種特殊顯微鏡的名稱，如

5、熒光顯微鏡、。5. 自發(fā)熒光是指生物體內(nèi)有些物質(zhì)受激發(fā)光照射后可直接發(fā)出的熒光。寫出五種自身熒光物質(zhì)：、。三. 選擇題1. 通過(guò)選擇性或克隆形式從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群體稱作。A. CellLineB.CellStrainC.CellLibraryD.Others2. 研究DNA在細(xì)胞中的代謝，常用的同位素標(biāo)記物有。A. 14C-戊糖B.32P-磷酸C.15N-鳥嘌吟D.3H-胸腺嘧啶3. 細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑主要有。A. PEG（聚乙二醇）B.TMV（煙草花葉?。┎《綜.亞硝酸-誘變劑D.PHV（植物凝集素）-外圍培養(yǎng)4. 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。A. 可用來(lái)研究細(xì)胞生理和細(xì)胞

6、各種功能B. 首先用胰蛋白酶將動(dòng)物或植物組織進(jìn)行酶解，游離出單細(xì)胞再進(jìn)行培養(yǎng)C. 用小牛血清配制的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)D. 培養(yǎng)過(guò)程可用普通光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察5. 在雜交瘤技術(shù)中，。A. B淋巴細(xì)胞與B淋巴瘤細(xì)胞融合，目的是抑制瘤細(xì)胞無(wú)限生長(zhǎng)B. 在培養(yǎng)基中加入氨基喋吟可選出雜交細(xì)胞C. 氨基喋吟可抑制瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成D. 氨基喋吟能導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞無(wú)限分裂6. 光鏡同電鏡比較，下列各項(xiàng)中，是不正確的。A. 電鏡用的是電子束，而不是可見光B. 電鏡樣品要在真空中觀察，而不是暴露在空氣中C. 電鏡和光鏡的樣品都需要用化學(xué)染料染色D. 用于電鏡的標(biāo)本要徹底脫水，光鏡則不必7. 在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中要用來(lái)

7、進(jìn)行觀察。A.相差顯微鏡B.熒光顯微鏡C.倒置顯微鏡D.普通光學(xué)顯微鏡8. 在遞增細(xì)胞勻漿液的離心轉(zhuǎn)速過(guò)程中最先沉淀下來(lái)的是。A.核糖體B.線粒體C.未破碎的D.微粒體細(xì)胞核9. 單個(gè)植物細(xì)胞在體外經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)并培養(yǎng)成為完整的植物小植株的實(shí)驗(yàn)最好地證明了。A.細(xì)胞是構(gòu)成有機(jī)體的基本單位B. 一切有機(jī)體均來(lái)自于細(xì)胞C. 細(xì)胞是有機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育的基礎(chǔ)D. 細(xì)胞具有遺傳的全能性10. 顯微鏡的分辨率與下列哪一項(xiàng)無(wú)關(guān)?A.光源的波長(zhǎng)入B.物鏡的鏡口角aC.介質(zhì)的折射率nD.放大倍數(shù)四、問(wèn)答題1動(dòng)物體細(xì)胞克隆有什么意義?2什么是細(xì)胞培養(yǎng)，應(yīng)注意哪些問(wèn)題?3什么是細(xì)胞系和細(xì)胞株?4何謂乳腺生物反應(yīng)器，它的出現(xiàn)有

8、什么意義?1. 電子顯微鏡的基本知識(shí)（見表3-1）表3T電鏡與光鏡的比較顯微鏡分辨本領(lǐng)光源透鏡真空成像原理LM200nm可見光玻璃透鏡要求真空利用樣品對(duì)光的吸收形成(400-700)明暗反差和顏色變化FM紫外光玻璃透鏡不要求真空(約200nm)EMlOOnm電子束電磁透鏡要求真空利用樣品對(duì)電子的散射和(0.01-0.9)1.33x10-5透射形成明暗反差1.33x10-3Pa問(wèn)答：（1）、電鏡為何要求一定的真空度？（2）、電鏡為何要有記錄系統(tǒng)？表3-3動(dòng)、植物細(xì)胞的培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)目的培養(yǎng)方式細(xì)胞生物學(xué)題庫(kù)參考答案第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法一、名詞解釋1. 分辨率(resolution)：分

9、辨率是指能分辨出的相鄰兩個(gè)物點(diǎn)間最小距離的能力，這種距離稱為分辨距離。分辨距離越小，分辨率越高。一般規(guī)定：顯微鏡或人眼在25cm明視距離處，能清楚地分辨被檢物體細(xì)微結(jié)構(gòu)最小間隔的能力，稱為分辨率。人眼的分辨率是100um;光學(xué)顯微鏡的最大分辨率是0.2umo2. 熒光(fluorescence):分子由激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)，由于電子躍遷而由被激發(fā)分子發(fā)射的光。物質(zhì)經(jīng)過(guò)紫外線照射后發(fā)出熒光的現(xiàn)象可分為兩種情況，第一種是自發(fā)熒光，如葉綠素、血紅素等經(jīng)紫外線照射后，能發(fā)出紅色的熒光，稱為自發(fā)熒光;第二種是誘發(fā)熒光，即物體經(jīng)熒光染料染色后再通過(guò)紫外線照射發(fā)出熒光，稱為誘發(fā)熒光。3. 熒光顯微鏡(Fluor

10、escencemicroscope):以紫外線為光源，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。4. 相差顯微鏡(Phasecontrastmicroscope):相差顯微鏡是荷蘭科學(xué)家Zermike于1935年發(fā)明的，用于觀察未染色標(biāo)本的顯微鏡?；罴?xì)胞和未染色的生物標(biāo)本，因細(xì)胞各部細(xì)微結(jié)構(gòu)的折射率和厚度的不同，光波通過(guò)時(shí)，波長(zhǎng)和振幅并不發(fā)生變化，僅相位發(fā)生變化(振幅差)，這種振幅差人眼無(wú)法觀察。而相差顯微鏡通過(guò)改變這種相位差，并利用光的衍射和干涉現(xiàn)象，把相差變?yōu)檎穹顏?lái)觀察活細(xì)胞和未染色的標(biāo)本。

11、相差顯微鏡和普通顯微鏡的區(qū)別是:用環(huán)狀光闌代替可變光闌，用帶相板的物鏡代替普通物鏡，并帶有一個(gè)合軸用的望遠(yuǎn)鏡。相差顯微鏡具有兩個(gè)其他顯微鏡所不具有的功能:將直射的光(視野中背景光)與經(jīng)物體衍射的光分開;將大約一半的波長(zhǎng)從相位中除去，使之不能發(fā)生相互作用，從而引起強(qiáng)度的變化。5. 放射自顯影(autoradiography)：放射自顯影的原理是利用放射性同位素所發(fā)射出來(lái)的帶電離子(a或B粒子)作用于感光材料的鹵化銀晶體，從而產(chǎn)生潛影，這種潛影可用顯影液顯示，成為可見的“像”，因此，它是利用鹵化銀乳膠顯像檢查和測(cè)量放射性的一種方法。放射性核素的原子不斷衰變，當(dāng)衰變掉一半時(shí)所需要的時(shí)間稱為半衰期。各

12、種放射性核素的半衰期長(zhǎng)短不同(表)，在自顯影實(shí)驗(yàn)中多選用半衰期較長(zhǎng)者。對(duì)于半衰期較短的核素，應(yīng)選用較快的樣品制備方法，所用劑量也應(yīng)加大。6. 掃描電子顯微鏡(scanningelectronmicroscopy,SEM):掃描電子顯微鏡是1965年發(fā)明的較現(xiàn)代的細(xì)胞生物學(xué)研究工具，主要是利用二次電子信號(hào)成像來(lái)觀察樣品的表面形態(tài)，即用極狹窄的電子束去掃描樣品，通過(guò)電子束與樣品的相互作用產(chǎn)生各種效應(yīng)，其中主要是樣品的二次電子發(fā)射。二次電子能夠產(chǎn)生樣品表面放大的形貌像，這個(gè)像是在樣品被掃描時(shí)按時(shí)序建立起來(lái)的，即使用逐點(diǎn)成像的方法獲得放大像。7. 掃描透射電子顯微鏡(scanningtransmiss

13、ionelectronmicroscopy,STEM):既有透射電子顯微鏡又有掃描電子顯微鏡的顯微鏡。象SEM一樣，STEM用電子束在樣品的表面掃描，但又象TEM，通過(guò)電子穿透樣品成像。STEM能夠獲得TEM所不能獲得的一些關(guān)于樣品的特殊信息oSTEM技術(shù)要求較高，要非常高的真空度，并且電子學(xué)系統(tǒng)比TEM和SEM都要復(fù)雜。&高壓電子顯微鏡(high-voltageelectronmicroscopy，HVEM):同透射電子顯微鏡基本相同，只是電壓特別高。TEM使用的加速電壓是50100kV,而HVEM使用的電壓是2001000kV。由于電壓高，就會(huì)大大減少造成染色體畸變的可能，因此，可

14、以用較厚的細(xì)胞切片研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，切片的厚度最大可達(dá)1um，相當(dāng)于普通TEM樣品厚度的10倍。9. 負(fù)染色(negativestainning):用重金屬鹽(如磷鎢酸鈉、醋酸鈾等)對(duì)鋪展在載網(wǎng)上的樣品進(jìn)行染色，使整個(gè)載網(wǎng)都鋪上一層重金屬鹽，而有凸出顆粒的地方則沒(méi)有染料沉積。由于電子密度高的重金屬鹽包埋了樣品中低電子密度的背景，增強(qiáng)了背景散射電子的能力以提高反差，這樣，在圖像中背景是黑暗的，而未被包埋的樣品顆粒則透明光亮，這種染色稱為負(fù)染技術(shù)。負(fù)染色是只染背景而不染樣品，與光學(xué)顯微鏡樣品的染色正好相反。10. 鑄型技術(shù)(shadowcasting)：鑄型技術(shù)是電子顯微鏡中一種重要的增強(qiáng)背景和待觀

15、察樣品反差的方法?；具^(guò)程包括：將樣品置于云母的表面，然后干燥;在真空裝置中將樣品鍍上一層重金屬(金或鉑金)，噴鍍時(shí)的加熱絲具有一定的角度;將樣品鍍上一層碳原子，以增加鑄型的強(qiáng)度和穩(wěn)定性;將鑄型置于酸池中，破壞樣品，只留下金屬鑄型;將鑄型漂洗后置于載網(wǎng)上進(jìn)行電子顯微鏡觀察。11. 掃描隧道顯微鏡(scanningtunnelingmicroscope,STM):掃描隧道顯微鏡使用電子學(xué)的方法，用一個(gè)金屬針尖在在樣品表面掃描。當(dāng)針尖和樣品表面距離很近時(shí)（lnm以下）,針尖和樣品表面之間會(huì)產(chǎn)生電壓。當(dāng)針尖沿X和Y方向在樣品表面掃描時(shí)，就會(huì)在針尖和樣品表面第一層電子之間產(chǎn)生電子隧道。該顯微鏡設(shè)計(jì)的沿

16、Z字形掃描，可保持電流的恒定。因此，針尖的移動(dòng)是隧道電流的作用，并且可以反映在熒光幕上。連續(xù)的掃描可以建立起原子級(jí)分辨率的表面像。12. 酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（enzymecytochemistry）：將細(xì)胞內(nèi)的酶與底物相互作用，再將酶反應(yīng)的產(chǎn)物作為反應(yīng)物質(zhì)，在酶的作用部位進(jìn)行捕捉，使其在顯微鏡下具有可見性。這種在酶作用下產(chǎn)生反應(yīng)產(chǎn)物，經(jīng)捕捉反應(yīng)來(lái)間接證明酶定位的反應(yīng)稱為酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)。酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)包括兩個(gè)反應(yīng):第一反應(yīng)是酶作用于底物的反應(yīng)，稱酶反應(yīng)，形成的產(chǎn)物稱為初級(jí)反應(yīng)產(chǎn)物;第二反應(yīng)是捕捉劑與初級(jí)反應(yīng)產(chǎn)物的作用，稱捕捉反應(yīng)，產(chǎn)生最終反應(yīng)產(chǎn)物：I酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)1I酶+條件初級(jí)捕捉劑丨底物&

17、gt;反應(yīng)產(chǎn)物>最終反應(yīng)產(chǎn)物（酶反應(yīng)）（捕捉反應(yīng)）13. 免疫熒光技術(shù)（immunofluorescence）：將免疫學(xué)方法（抗原抗體特異結(jié)合）與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來(lái)研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出，從而可對(duì)抗原進(jìn)行細(xì)胞定位。14. 免疫電鏡（immunoelectronmicroscopy）:將抗體進(jìn)行特殊標(biāo)記后用電子顯微鏡觀察免疫反應(yīng)的結(jié)果。根據(jù)標(biāo)記方法的不同，分為免疫鐵蛋白技術(shù)、免疫酶標(biāo)技術(shù)和免疫膠體金技術(shù)。如免疫鐵蛋白技術(shù)是將含鐵蛋白通過(guò)一種低分子量的雙功能試劑與抗體結(jié)合，成為一種雙分子復(fù)合物，它既保留抗體的免疫活性，又具有電鏡下可見的

18、高電子密度鐵離子核心，因此用鐵蛋白標(biāo)記的抗體可通過(guò)電鏡免疫化學(xué)的方法在電鏡下定位細(xì)胞中的抗原。由于某些固定技術(shù)（如鋨酸固定）對(duì)抗體抗原的結(jié)合有干擾，因此應(yīng)采取較為溫和的樣品制備方法。15. 染色體分選（chromosomesorting）:用流式細(xì)胞計(jì)分選特定的染色體，基本過(guò)程與細(xì)胞分選相似。不同的是，要用帶有熒光標(biāo)記的DNA探針同特異染色體結(jié)合，使待分選的染色體帶上標(biāo)記。在染色體分選中，使用的探針是同所感興趣染色體互補(bǔ)的寡聚核苷酸，這種探針也可同熒光染料偶聯(lián)。將結(jié)合有熒光染料的探針同染色體一起溫育，使探針同特異染色體雜交，形成穩(wěn)定的雜交體，這樣染色體就被帶上了熒光標(biāo)記，稀釋后送入流式細(xì)胞計(jì)的

19、流室，然后與細(xì)胞分選過(guò)程一樣將特異的染色體分選出來(lái)。16. 顯微分光光度術(shù)(microspectrophotometry):將顯微鏡技術(shù)與分光光度計(jì)結(jié)合起來(lái)的技術(shù)。它以物質(zhì)分子的光吸收、熒光發(fā)射和光反射特性作為測(cè)定基礎(chǔ)，可用來(lái)分析生物樣品細(xì)微結(jié)構(gòu)中的化學(xué)成分，同時(shí)進(jìn)行定位、定性和定量。17. 顯微熒光光度術(shù)(microfluorometry):利用顯微分光光度計(jì)對(duì)細(xì)胞內(nèi)原有能發(fā)光的物質(zhì)或?qū)?xì)胞內(nèi)各種化學(xué)成分用不同的熒光經(jīng)熒光探針標(biāo)記后進(jìn)行定位、定性和定量地測(cè)定，稱為顯微熒光光度術(shù)，也稱細(xì)胞熒光光度術(shù)(cytofluorometry)。它是一種微觀而靈敏的方法，對(duì)于研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能及其變化具

20、有重要意義。18核磁共振技術(shù)(nuclearmagneticresonance，NMR)：核磁共振技術(shù)可以直接研究溶液和活細(xì)胞中相對(duì)分子質(zhì)量較小(20，000道爾頓以下)的蛋白質(zhì)、核酸以及其它分子的結(jié)構(gòu)，而不損傷細(xì)胞。核磁共振的基本原理是:原子核有自旋運(yùn)動(dòng)，在恒定的磁場(chǎng)中，自旋的原子核將繞外加磁場(chǎng)作回旋轉(zhuǎn)動(dòng)，叫進(jìn)動(dòng)(precession)。進(jìn)動(dòng)有一定的頻率，它與所加磁場(chǎng)的強(qiáng)度成正比。如在此基礎(chǔ)上再加一個(gè)固定頻率的電磁波，并調(diào)節(jié)外加磁場(chǎng)的強(qiáng)度，使進(jìn)動(dòng)頻率與電磁波頻率相同。這時(shí)原子核進(jìn)動(dòng)與電磁波產(chǎn)生共振，叫核磁共振。核磁共振時(shí)，原子核吸收電磁波的能量，記錄下的吸收曲線就是核磁共振譜(NMR-spe

21、ctrum)。由于不同分子中原子核的化學(xué)環(huán)境不同，將會(huì)有不同的共振頻率，產(chǎn)生不同的共振譜。記錄這種波譜即可判斷該原子在分子中所處的位置及相對(duì)數(shù)目，用以進(jìn)行定量分析及分子量的測(cè)定，并對(duì)有機(jī)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析19. 細(xì)胞工程技術(shù)(cellengineering):細(xì)胞工程技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)的交叉領(lǐng)域，主要利用細(xì)胞生物學(xué)的原理和方法，結(jié)合工程學(xué)的技術(shù)手段，按照人們預(yù)先的設(shè)計(jì)，有計(jì)劃地改變或創(chuàng)造細(xì)胞遺傳性的技術(shù)。包括體外大量培養(yǎng)和繁殖細(xì)胞，或獲得細(xì)胞產(chǎn)品、或利用細(xì)胞體本身。主要內(nèi)容包括:細(xì)胞融合、細(xì)胞生物反應(yīng)器、染色體轉(zhuǎn)移、細(xì)胞器移植、基因轉(zhuǎn)移、細(xì)胞及組織培養(yǎng)。20. 原代培養(yǎng)(primaryc

22、ulture)：原代培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng)。因此，較為嚴(yán)格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì)，如果是正常細(xì)胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上，通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。最常用的原代培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。21. 愈傷組織(callus,culli)：植物受創(chuàng)傷后，在傷面新生的組織稱為愈傷組織。其原因是由于受創(chuàng)傷的刺激后，傷面附近的生活組織恢復(fù)了分裂機(jī)能，加速增生而將傷面愈合。在植物組織培養(yǎng)中的愈傷組織是指植物細(xì)胞在組織培養(yǎng)過(guò)程中形成的無(wú)一定結(jié)構(gòu)的組織團(tuán)塊，在適宜的條件下，愈傷組織可再分化，形成芽、根，再生成

23、植株。22. 細(xì)胞融合(cellfusion)：在自發(fā)或人工誘導(dǎo)下，兩個(gè)不同基因型的細(xì)胞或原生質(zhì)體融合形成一個(gè)雜種細(xì)胞?；具^(guò)程包括細(xì)胞融合形成異核體(heterokaryon)、異核體通過(guò)細(xì)胞有絲分裂進(jìn)行核融合、最終形成單核的雜種細(xì)胞。23. 單克隆抗體技術(shù)(monoclonalantibodytechnique):1975年英國(guó)科學(xué)家Milstein和Kohler所發(fā)明，并獲得1984年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。它是將產(chǎn)生抗體的單個(gè)B淋巴細(xì)胞同腫瘤細(xì)胞雜交，獲得既能產(chǎn)生抗體，又能無(wú)限增殖將雜種細(xì)胞，并以此生產(chǎn)抗體的技術(shù)。其原理是：B淋巴細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗體，但在體外不能進(jìn)行無(wú)限分裂；而瘤細(xì)胞雖然可以在體外

24、進(jìn)行無(wú)限傳代，但不能產(chǎn)生抗體。將這兩種細(xì)胞融合后得到的雜交瘤細(xì)胞具有兩種親本細(xì)胞的特性。24. 顯微操作術(shù)(micromanipulation)：在顯微鏡下，用顯微操作裝置對(duì)細(xì)胞進(jìn)行解剖手術(shù)和微量注射的技術(shù)屬顯微操作技術(shù)。顯微操作儀是在顯微鏡下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行顯微操作的裝置，可用于細(xì)胞核移植、基因注入、染色體微切和胚胎切割等手術(shù)。25. 差速離心(differentialcentrifugation)：主要是采取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細(xì)胞器。起始的離心速度較低，讓較大的顆粒沉降到管底，小的顆粒仍然懸浮在上清液中。收集沉淀，改用較高的離心速度離心懸浮液，將較小的顆粒沉降，以此類推，達(dá)到分

25、離不同大小顆粒的目的。26. 等密度離心(isodensitycentrifugation)：等密度離心分離樣品主要是根據(jù)被分離樣品的密度。在這種離心分離方法中，要用介質(zhì)產(chǎn)生一種密度梯度，這種密度梯度覆蓋了待分離物質(zhì)的密度，這樣，通過(guò)離心使不同密度的顆粒懸浮到相應(yīng)的介質(zhì)密度區(qū)。在這種梯度離心中，顆粒的密度是影響最終位置的惟一因素，因此用這種方法分離顆粒，主要是根據(jù)被分離顆粒的密度差異。只要被分離顆粒間的密度差異大于1%就可用此法分離。蔗糖或者甘油(它們的最大密度是1.3g/cm3)通?？捎糜诜蛛x膜結(jié)合的細(xì)胞器，如高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體和線粒體。在等密度梯度離心中蔗糖或甘油的梯度的作用與移動(dòng)區(qū)

26、帶離心中梯度原理是不同的，在移動(dòng)區(qū)帶離心中梯度的惟一目的是減少樣品的擴(kuò)散，即使是在離心管的底部，顆粒的密度也比介質(zhì)大。相反，在等密度梯度離心中，使用的密度是足以阻止顆粒移動(dòng)的密度，當(dāng)顆粒達(dá)到與本身密度相同的密度區(qū)時(shí)就會(huì)停留在該區(qū)域。離心分離密度大于1.3g/cm3的樣品，如DNA、RNA,需要使用密度比蔗糖和甘油大的介質(zhì)。重金屬鹽氯化銫(CsCl)是目前使用的最好的離心介質(zhì)，它在離心場(chǎng)中可自行調(diào)節(jié)形成濃度梯度，并能保持穩(wěn)定。在氯化銫形成的密度梯度中，離心管頂部的密度為1.65g/cm3，底部為：1.75g/cm3。因?yàn)镈NA的密度是1.70g/cm3，會(huì)停留在離心管的中部。27. 層析分離技術(shù)

27、(chromatography)：根據(jù)蛋白質(zhì)的形態(tài)、大小和電荷的不同而設(shè)計(jì)的物理分離方法。各種不同的層析方法都涉及共同的基本特點(diǎn)：有一個(gè)固定相和流動(dòng)相，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)混合溶液(流動(dòng)相)通過(guò)裝有珠狀或基質(zhì)材料的管或柱(固定相)時(shí)，由于混合物中各組份在物理化學(xué)性質(zhì)(如吸引力、溶解度、分子的形狀與大小、分子的電荷性與親和力)等方面的差異使各組分在兩相間進(jìn)行反復(fù)多次的分配而得以分開。流動(dòng)相的流動(dòng)取決于引力和壓力，而不需要電流。用層析法可以純化得到非變性的、天然狀態(tài)的蛋白質(zhì)。層析的方法很多，其中凝膠過(guò)濾層析、離子交換層析、親和層析等是目前最常用的層析方法。28凝膠過(guò)濾層析(gelfiltrationchrom

28、atography):凝膠過(guò)濾層析法又稱排阻層析或分子篩方法，主要是根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和形狀，即蛋白質(zhì)的質(zhì)量進(jìn)行分離和純化。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質(zhì)，使蛋白質(zhì)混合物中的物質(zhì)按分子大小的不同進(jìn)行分離。29. 親和層析(affinitychromatography):將具有特殊結(jié)構(gòu)的親和分子制成固相吸附劑放置在層析柱中，當(dāng)要被分離的蛋白混合液通過(guò)層析柱時(shí)，與吸附劑具有親和能力的蛋白質(zhì)就會(huì)被吸附而滯留在層析柱中。那些沒(méi)有親和力的蛋白質(zhì)由于不被吸附，直接流出，從而與被分離的蛋白質(zhì)分開，然后選用適當(dāng)?shù)南疵撘?，改變結(jié)合條件將被結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫下來(lái)，

29、這種分離純化蛋白質(zhì)的方法稱為親和層析。在生物分子中有些分子的特定結(jié)構(gòu)部位能夠同其他分子相互識(shí)別并結(jié)合，如酶與底物的識(shí)別結(jié)合、受體與配體的識(shí)別結(jié)合、抗體與抗原的識(shí)別結(jié)合，這種結(jié)合既是特異的，又是可逆的，改變條件可以使這種結(jié)合解除。生物分子間的這種結(jié)合能力稱為親和力。親和層析就是根據(jù)這樣的原理設(shè)計(jì)的蛋白質(zhì)分離純化方法。30. 基因工程(geneengineering):基因工程是以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)，以分子生物學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代方法為手段，將不同來(lái)源的基因(DNA分子)，按預(yù)先設(shè)計(jì)的藍(lán)圖，在體外構(gòu)建雜種DNA分子，然后導(dǎo)入活細(xì)胞，以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、生產(chǎn)新產(chǎn)品。基因工程技術(shù)為基

30、因的結(jié)構(gòu)和功能的研究提供了有力的手段。31. 基因克隆(genecloning):是70年代發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)具有革命性的研究技術(shù)，可概括為：分、切、連、轉(zhuǎn)、選?！胺帧笔侵阜蛛x制備合格的待操作的DNA，包括作為運(yùn)載體的DNA和欲克隆的目的DNA；“切”是指用序列特異的限制性內(nèi)切酶切開載體DNA，或者切出目的基因；“連”是指用DNA連接酶將目的DNA同載體DNA連接起來(lái)，形成重組的DNA分子；“轉(zhuǎn)”是指通過(guò)特殊的方法將重組的DNA分子送入宿主細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制和擴(kuò)增；“選”則是從宿主群體中挑選出攜帶有重組DNA分子的個(gè)體?；蚬こ碳夹g(shù)的兩個(gè)最基本的特點(diǎn)是分子水平上的操作和細(xì)胞水平上的表達(dá)，而分子水平上的

31、操作即是體外重組的過(guò)程，實(shí)際上是利用工具酶對(duì)DNA分子進(jìn)行外科手術(shù)。32. 基因敲除(geneknockout)：是指一個(gè)有功能的基因通過(guò)基因工程方法完全被剔除的人工突變技術(shù)。人為的將小鼠的某一種有功能的基因完全缺失的技術(shù)就稱為基因敲除技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)是MarrioCapecchi于八十年代末在Utah大學(xué)發(fā)展起來(lái)的。實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物通常是小鼠，被敲除了功能基因的小鼠就稱為敲除小鼠(knockoutmice)?；蚯贸夹g(shù)已成功地應(yīng)用于幾種遺傳病的研究，還可用于研究特定基因的細(xì)胞生物學(xué)活性以及研究發(fā)育調(diào)控的基因作用等，因此是研究基因功能的一項(xiàng)非常有用的技術(shù)?；蚯贸且惶捉M合技術(shù)，包括基因重組、細(xì)胞分

32、離培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因等33. 核體(karyoplast)：細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞松弛素處理后，排出帶有少量細(xì)胞質(zhì)，并包有一層細(xì)胞膜的細(xì)胞核。34. 胞質(zhì)體(cytoplast):細(xì)胞經(jīng)處理排核后剩下的包有細(xì)胞膜的細(xì)胞質(zhì)部分。35細(xì)胞的培養(yǎng)(cellculture)：在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，培養(yǎng)從機(jī)體取下的細(xì)胞，并使之生存和生長(zhǎng)的技術(shù)。36.貼壁生長(zhǎng)：分散的細(xì)胞懸液在培養(yǎng)瓶中很快(幾十分鐘至數(shù)小時(shí)內(nèi))就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。37接觸抑制(contactinhibition):正常細(xì)胞生長(zhǎng)到彼此相互接觸，其運(yùn)動(dòng)和分裂活動(dòng)都將停止的現(xiàn)象。38. 群體培養(yǎng)(massculture)：將含有一定數(shù)量的細(xì)胞懸液置

33、于培養(yǎng)瓶中，讓細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，匯合后生成單層細(xì)胞。39. 克隆培養(yǎng)(clonalculture):將高度稀釋的細(xì)胞懸液置于游離的培養(yǎng)瓶中，細(xì)胞貼壁后彼此距離較遠(yuǎn)，經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)增殖，每個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)生長(zhǎng)集落。40. 原代培養(yǎng)(primaryculture):直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器官后立即進(jìn)行的培養(yǎng)。有人將1-10代的細(xì)胞培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。41. 繼代培養(yǎng)(subculture)：在體外培養(yǎng)的條件下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行的持續(xù)傳代培養(yǎng)42. 單層細(xì)胞培養(yǎng)：分散成原球形的細(xì)胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展并開始有絲分裂，逐漸形成致密的細(xì)胞單層，這種培養(yǎng)方式稱單層細(xì)胞培養(yǎng)。43. 轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)：為制取細(xì)胞產(chǎn)品而設(shè)計(jì)的方法，使用大

34、容量的圓培養(yǎng)瓶，在培養(yǎng)過(guò)程中不斷的轉(zhuǎn)動(dòng)，使培養(yǎng)細(xì)胞始終處于懸浮狀態(tài)之中而不貼壁。44. 原代細(xì)胞(primarycell):從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。45傳代細(xì)胞(subculturecell):適應(yīng)在體外培養(yǎng)的條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞。46.細(xì)胞株(cellstrain):通過(guò)選擇法或克隆的方法從原代培養(yǎng)的細(xì)胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群，在培養(yǎng)過(guò)程中其特征始終保持不變。47細(xì)胞系（cellline）:在培養(yǎng)條件下可進(jìn)行無(wú)限分裂的細(xì)胞群。48.轉(zhuǎn)化：正常細(xì)胞在某種因子的作用下發(fā)生突變而具有癌性的細(xì)胞。培養(yǎng)的細(xì)胞類型：原代細(xì)胞和繼代細(xì)胞；細(xì)胞株和細(xì)胞系；細(xì)胞培養(yǎng)物的名稱：克隆、外植

35、體和愈傷組織49克?。╟lone）:由單一祖先經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖產(chǎn)生的遺傳性一致的后代群體。50.外植體（explant）:取自成體或胚胎，用于體外培養(yǎng)的組織和細(xì)胞群二、填空題1. 物質(zhì)經(jīng)過(guò)紫外線照射后發(fā)出熒光的現(xiàn)象可分為兩種情況，第一種是自發(fā)熒光，如葉綠素、血紅素等經(jīng)紫外線照射后，能發(fā)出紅色的熒光;第二種是透發(fā)熒光，即物體經(jīng)熒光染料染色后再通過(guò)紫外線照射發(fā)出熒光。2. 寫出一種細(xì)胞融合的物理性方法電融合技術(shù)，舉出化學(xué)融合所需的兩種化學(xué)物質(zhì)滅活的仙臺(tái)病毒和聚乙二醇，PEG3. 染色體DNA的三種功能元件為著絲粒,端粒,復(fù)制起點(diǎn)。異染色質(zhì)可分為組成型異染色質(zhì)，兼型異染色質(zhì)4定量的細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)有顯微

36、分光光度分析,流式細(xì)胞儀等。寫出兩種特殊顯微鏡的名稱，如熒光顯微鏡，掃描隧道顯微鏡,相差顯微鏡5.自發(fā)熒光是指生物體內(nèi)有些物質(zhì)受激發(fā)光照射后可直接發(fā)出的熒光。寫出五種自身熒光物質(zhì)：FAD、FMN、NADH、木質(zhì)素、卟啉三、選擇題1. 通過(guò)選擇性或克隆形式從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群體稱作B。A. CellLineB.CellStrainC.CellLibraryD.Others2. 研究DNA在細(xì)胞中的代謝，常用的同位素標(biāo)記物有D。A. 14C-戊糖B.32P-磷酸C.15N-鳥嘌吟D.3H-胸腺嘧啶3. 細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑主要有A。A. PEG（聚乙二醇）B.TMV（煙

37、草花葉病）病毒C.亞硝酸-誘變劑D.PHV（植物凝集素）-外圍培養(yǎng)4. 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)B。A. 可用來(lái)研究細(xì)胞生理和細(xì)胞各種功能B. 首先用胰蛋白酶將動(dòng)物或植物組織進(jìn)行酶解,游離出單細(xì)胞再進(jìn)行培養(yǎng)C. 用小牛血清配制的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)D. 培養(yǎng)過(guò)程可用普通光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察5. 在雜交瘤技術(shù)中，B。A. B淋巴細(xì)胞與B淋巴瘤細(xì)胞融合，目的是抑制瘤細(xì)胞無(wú)限生長(zhǎng)B. 在培養(yǎng)基中加入氨基喋呤可選出雜交細(xì)胞C. 氨基喋呤可抑制瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成D. 氨基喋吟能導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞無(wú)限分裂6. 光鏡同電鏡比較，下列各項(xiàng)中,D是不正確的。A. 電鏡用的是電子束，而不是可見光B. 電鏡樣品要在真空中觀察，而不是暴露在

38、空氣中C. 電鏡和光鏡的樣品都需要用化學(xué)染料染色D. 用于電鏡的標(biāo)本要徹底脫水，光鏡則不必7. 在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中要用C來(lái)進(jìn)行觀察。A.相差顯微鏡B.熒光顯微鏡C.倒置顯微鏡D.普通光學(xué)顯微鏡&在遞增細(xì)胞勻漿液的離心轉(zhuǎn)速過(guò)程中最先沉淀下來(lái)的是D。A.核糖體B.線粒體C.未破碎的D.微粒體細(xì)胞核9. 單個(gè)植物細(xì)胞在體外經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)并培養(yǎng)成為完整的植物小植株的實(shí)驗(yàn)最好地證明了D。A. 細(xì)胞是構(gòu)成有機(jī)體的基本單位B. 一切有機(jī)體均來(lái)自于細(xì)胞C. 細(xì)胞是有機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育的基礎(chǔ)D. 細(xì)胞具有遺傳的全能性10. 顯微鏡的分辨率與下列哪一項(xiàng)無(wú)關(guān)？DA.光源的波長(zhǎng)入B.物鏡的鏡口角aC.介質(zhì)的折射率nD.

39、放大倍數(shù)四、問(wèn)答題1動(dòng)物體細(xì)胞克隆有什么意義?答：動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)的成功對(duì)生命科學(xué)的發(fā)展具有重要的推動(dòng)作用，不僅證明了動(dòng)物的體細(xì)胞具有全能性，而且有巨大的應(yīng)用前景。例如結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)藥物?，F(xiàn)在很多藥物如胰島素、生長(zhǎng)激素、表皮生長(zhǎng)因子等都是動(dòng)物細(xì)胞體內(nèi)正常的代謝物，某些病人由于產(chǎn)生這些物質(zhì)的功能發(fā)生缺陷，導(dǎo)致了相應(yīng)疾病的發(fā)生，目前的治療方法就是給這些病人注射這類藥物。由于這類藥物本身是來(lái)自動(dòng)物的某些臟器，制備這種藥物就需要大量的動(dòng)物提供臟器，因此成本就很高，如果通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)把相應(yīng)的基因轉(zhuǎn)入到哺乳動(dòng)物，讓動(dòng)物的乳汁生產(chǎn)具有療效的蛋白質(zhì)就會(huì)降低成本，再結(jié)合動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)，將這種轉(zhuǎn)基因動(dòng)物

40、大量無(wú)性繁殖克隆，就可以大大提高產(chǎn)量，大幅度降低成本，同時(shí)也保證了所轉(zhuǎn)基因的穩(wěn)定。該項(xiàng)技術(shù)也可以生產(chǎn)供動(dòng)物本身和人類器官移植的動(dòng)物，解決器官捐贈(zèng)長(zhǎng)期缺乏的問(wèn)題。另外，動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)在基因結(jié)構(gòu)和功能、基因治療、遺傳病及人類衰老等的研究方面都具有巨大的潛力。2什么是細(xì)胞培養(yǎng)，應(yīng)注意哪些問(wèn)題?答：在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，培養(yǎng)從機(jī)體中取出的細(xì)胞，并使之生存和生長(zhǎng)的技術(shù)為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中最有價(jià)值的技術(shù)，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)可以獲得大量的細(xì)胞，也可通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)研究細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝等。細(xì)胞培養(yǎng)的突出特點(diǎn)是在離體條件下觀察和研究細(xì)胞生命活動(dòng)的規(guī)律。培養(yǎng)中的細(xì)胞不受體內(nèi)復(fù)雜環(huán)境的影響，人為改變培養(yǎng)條件（如物理、化學(xué)、生物等外界因素的變化）即可進(jìn)一步觀察細(xì)胞在單因素或多因素的影響下的生理功能變化。然而，細(xì)胞在體外環(huán)境的局限性，又使細(xì)胞的形態(tài)與功能不能與體內(nèi)的同類細(xì)胞完全等同。體外培養(yǎng)細(xì)胞必需注意三個(gè)環(huán)節(jié)：物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)、生存環(huán)境和廢物的排除。體外培養(yǎng)細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)是由培養(yǎng)基提供的。培養(yǎng)基通常含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的氨基酸、維生素和微量元素。一般培養(yǎng)