人教版教學(xué)課件1.1DNA重組技術(shù)的基本工具

1、DNA重組技術(shù)的基本工具重組技術(shù)的基本工具 準(zhǔn)確切割準(zhǔn)確切割DNA的工具（的工具（“分子手術(shù)刀分子手術(shù)刀”） DNA片段的連接工具（片段的連接工具（“分子縫合針分子縫合針”） 基因轉(zhuǎn)移工具（基因轉(zhuǎn)移工具（“分子運(yùn)輸車分子運(yùn)輸車”）基因的大小以納米計(jì)算，要對它進(jìn)行剪切、基因的大小以納米計(jì)算，要對它進(jìn)行剪切、拼接等操作，沒有非常精細(xì)的工具是不行的。進(jìn)拼接等操作，沒有非常精細(xì)的工具是不行的。進(jìn)行基因操作最少需要以下三種工具：行基因操作最少需要以下三種工具：思考思考 在自然界中有一些生物的在自然界中有一些生物的DNA可能進(jìn)入另可能進(jìn)入另一種生物的細(xì)胞中。我們有沒有學(xué)過相關(guān)一種生物的細(xì)胞中。我們有沒有學(xué)

2、過相關(guān)的實(shí)例？的實(shí)例？ 現(xiàn)今存在的生物為什么沒有在長期的進(jìn)化現(xiàn)今存在的生物為什么沒有在長期的進(jìn)化過程中被外源過程中被外源DNA的入侵而滅絕，仍能保的入侵而滅絕，仍能保持一種穩(wěn)定狀態(tài)？持一種穩(wěn)定狀態(tài)？ 怎樣才能使外來的怎樣才能使外來的DNA失效從而保護(hù)自身？失效從而保護(hù)自身？黏性末端黏性末端平末端平末端 限制酶切割限制酶切割DNA后形后形成的末端成的末端黏性末端、黏性末端、平末端是如何形成的？平末端是如何形成的？重播重播基因的針線基因的針線DNADNA連接酶連接酶切斷的切斷的DNA片段要與受體細(xì)胞的片段要與受體細(xì)胞的DNA連接，你覺得可以用什么酶？連接，你覺得可以用什么酶？DNA聚合酶和聚合酶和

3、DNA連接酶有何連接酶有何相同點(diǎn)和不同點(diǎn)？相同點(diǎn)和不同點(diǎn)？DNA連接酶連接酶DNA聚合酶聚合酶連接DNA鏈雙鏈單鏈連接部位在兩DNA片段之間形成磷酸二酯鍵將單個(gè)核苷酸加到已存在的核酸片段的3末端的羥基上，形成磷酸二酯鍵 限制酶切割后有兩種不同的結(jié)果，限制酶切割后有兩種不同的結(jié)果，一種產(chǎn)生黏性末端，一種產(chǎn)生平末端。一種產(chǎn)生黏性末端，一種產(chǎn)生平末端。那么恢復(fù)它們的連接時(shí)，所用那么恢復(fù)它們的連接時(shí)，所用DNA連連接酶是否可以不加選擇？接酶是否可以不加選擇？E.coliDNAE.coliDNA連接酶：連接黏性末端連接酶：連接黏性末端T T4 4DNADNA連接酶：連接黏性末端和平末端連接酶：連接黏性末

4、端和平末端基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體 要讓一個(gè)從甲生物細(xì)胞內(nèi)取出要讓一個(gè)從甲生物細(xì)胞內(nèi)取出來的基因在乙生物體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，來的基因在乙生物體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，首先得將這個(gè)基因送到乙生物的細(xì)首先得將這個(gè)基因送到乙生物的細(xì)胞內(nèi)去！能將外源基因送入細(xì)胞的胞內(nèi)去！能將外源基因送入細(xì)胞的工具就是載體。工具就是載體。基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制將怎樣？將怎樣？作為載體沒有切割位點(diǎn)將怎樣？作為載體沒有切割位點(diǎn)將怎樣？目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞，你如何察目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞，你如何察覺？覺？如果載體對受體細(xì)胞有害將

5、怎樣？如果載體對受體細(xì)胞有害將怎樣？作為載體的必要條件作為載體的必要條件 能自我復(fù)制能自我復(fù)制 有切割位點(diǎn)有切割位點(diǎn) 能與目的基因結(jié)合能與目的基因結(jié)合 能進(jìn)入受體生物細(xì)胞并在受體生物細(xì)胞內(nèi)復(fù)制能進(jìn)入受體生物細(xì)胞并在受體生物細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并表達(dá)；并表達(dá)； 有遺傳標(biāo)記基因有遺傳標(biāo)記基因 對受體細(xì)胞無害對受體細(xì)胞無害 比較容易得到比較容易得到3 3、基因的運(yùn)輸工具、基因的運(yùn)輸工具運(yùn)載體運(yùn)載體能復(fù)制并帶著插能復(fù)制并帶著插入的目的基因一入的目的基因一起復(fù)制起復(fù)制有切割位點(diǎn)有切割位點(diǎn)有標(biāo)記基因的存有標(biāo)記基因的存在，將來可用含在，將來可用含青霉素的培養(yǎng)基青霉素的培養(yǎng)基鑒別。鑒別。在基因工程中，切割運(yùn)載體和在基因工程中，切割運(yùn)載體和含有目的基因的含有目的基因的DNA片段，需片段，需使用（使用（ ）同種限制酶同種限制酶 B. 兩種限制酶兩種限制酶同種連接酶同種連接酶 D. 兩種連接酶兩種連接酶 大腸桿菌的一種限制酶大腸桿菌的一種限制酶（EcoR)EcoR)能識別能識別GAATTCGAATTC序列，序列，并在并在G G和和A A之間切開形成黏性末之間切開形成黏性末端。端。